本文關(guān)鍵詞： 前列腺癌(PCa) PC-3細(xì)胞 DU145細(xì)胞 LNCaP細(xì)胞 齊墩果酸(OA) 抗癌療效 細(xì)胞存活 細(xì)胞增殖 細(xì)胞遷移侵襲 前列腺癌(PCa) PC-3細(xì)胞 DU145細(xì)胞 齊墩果酸(OA) 細(xì)胞存活 細(xì)胞增殖 PI3K/Akt通路 前列腺癌(PCa) PC-3細(xì)胞 齊墩　出處：《華中科技大學(xué)》2016年博士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：第一部分齊墩果酸在人前列腺癌細(xì)胞中的體外抗癌療效目的：探討齊墩果酸(OA)對人前列腺癌(PCa)細(xì)胞的體外抗癌療效。方法：用不同濃度的OA處理人PCa PC-3細(xì)胞、DU145細(xì)胞和LNCaP細(xì)胞。采用CCK-8法檢測OA對PC-3細(xì)胞、DU145細(xì)胞和LNCaP細(xì)胞的存活能力與增殖能力的影響。采用平板克隆形成實(shí)驗(yàn)檢測OA對PC-3細(xì)胞、DU145細(xì)胞和LNCaP細(xì)胞的克隆形成能力的影響。采用流式細(xì)胞術(shù)檢測OA對PC-3細(xì)胞、DU145細(xì)胞和LNCaP細(xì)胞的凋亡與周期分布的影響。采用Transwell法檢測OA對PC-3、DU145細(xì)胞和LNCaP細(xì)胞的遷移侵襲能力的影響。采用caspase活性檢測試劑盒檢測OA對PC-3細(xì)胞、DU145細(xì)胞和LNCaP細(xì)胞中caspase-、caspase-9和caspase-3活性的影響。采用線粒體膜電位檢測試劑盒檢測OA對PC-3細(xì)胞、DU145細(xì)胞和LNCaP細(xì)胞的線粒體膜電位丟失的影響。采用western blotting法檢測OA對PC-3細(xì)胞、DU145細(xì)胞和LNCaP細(xì)胞中裂解的PARP、Bax、Bcl-2、Bcl-xL、CDK4、cyclin D1、細(xì)胞色素c、PI3K、Akt、p-AktSe4473、 p-BadSer136、p-GSK-3β5er9、FOX01和p-FOXO1的蛋白表達(dá)的影響。結(jié)果：CCK-8法結(jié)果顯示,OA明顯抑制了PC-3細(xì)胞、DU145細(xì)胞和LNCaP細(xì)胞的存活能力與增殖能力,且具有劑量依賴性和時間依賴性。流式細(xì)胞術(shù)結(jié)果顯示,OA明顯誘導(dǎo)了PC-3細(xì)胞、DU145細(xì)胞和LNCaP細(xì)胞的凋亡及G0/G1期阻滯,且具有劑量依賴性。平板克隆形成實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,OA明顯抑制了PC-3細(xì)胞、DU145細(xì)胞和LNCaP細(xì)胞的克隆形成能力,且具有劑量依賴性。Transwell實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,OA明顯抑制了PC-3細(xì)胞、DU145細(xì)胞和LNCaP細(xì)胞的遷移侵襲能力,且具有劑量依賴性。OA增加了PC-3細(xì)胞、DU145細(xì)胞和LNCaP細(xì)胞中caspase8、caspase-9和caspase-3的活性及裂解的PARP水平,且具有劑量依賴性。Western blotting結(jié)果顯示,OA增加了PC-3細(xì)胞、DU145細(xì)胞和LNCaP細(xì)胞中促凋亡蛋白Bax表達(dá),降低了抗凋亡蛋白Bcl-2和Bcl-xL以及CDK4和cyclin D1的蛋白表達(dá),且具有劑量依賴性。OA促進(jìn)了PC-3細(xì)胞、DU145細(xì)胞和LNCaP細(xì)胞線粒體膜電位丟失以及線粒體cyt c向胞質(zhì)的釋放,且具有劑量依賴性。Western blotting法結(jié)果顯示,OA劑量依賴性地抑制了PC-3細(xì)胞、DU145細(xì)胞和LNCaP細(xì)胞中P13K、p=AktSer473、p-BadSer136和p-GSK-3pSe9的蛋白表達(dá)水平,而并未改變FOXO1和p=FOXO1的蛋白表達(dá)水平。結(jié)論：OA能夠劑量依賴性地抑制人PCa細(xì)胞的體外存活能力、增殖能力及遷移侵襲能力：OA能夠活化線粒體通路,抑制周期相關(guān)蛋白表達(dá)和PI3K/Akt通路活性。第二部分齊墩果酸通過PI3K/Akt通路抑制人前列腺癌細(xì)胞的體外存活與增殖目的：探討齊墩果酸(OA)抑制人前列腺癌細(xì)胞的體外存活與增殖能力的作用機(jī)制。方法：采用質(zhì)粒轉(zhuǎn)染法在人前列腺癌PC-3細(xì)胞和DU145細(xì)胞中上調(diào)Akt基因的表達(dá)。采用qRT-PCR法和western blotting法驗(yàn)證Akt基因轉(zhuǎn)染效率。采用CCK-8法檢測上調(diào)Akt基因表達(dá)對OA抑制PC-3細(xì)胞和DU145細(xì)胞的存活能力與增殖能力的影響。采用平板克隆形成實(shí)驗(yàn)檢測上調(diào)Akt基因表達(dá)對OA抑制PC-3細(xì)胞和DU145細(xì)胞的克隆形成能力的影響。采用流式細(xì)胞術(shù)檢測上調(diào)Akt基因表達(dá)對OA增強(qiáng)PC-3細(xì)胞和DU145細(xì)胞的凋亡與周期阻滯的影響。采用caspase活性檢測試劑盒檢測上調(diào)Akt基因表達(dá)對OA增加PC-3細(xì)胞和DU145細(xì)胞的caspase-9和caspase-3活性的影響。采用線粒體膜電位檢測試劑盒檢測上調(diào)Akt基因表達(dá)對OA增加PC-3細(xì)胞和DU145細(xì)胞的線粒體膜電位丟失的影響。采用western blotting法檢測上調(diào)Akt基因表達(dá)對OA抑制PC-3細(xì)胞和DU145細(xì)胞的p-AktSer473、p-BadSer136、Bcl-2、p-GSK-3βSer9和cyclin D1的蛋白表達(dá)的影響。結(jié)果：qRT-PCR法和western blotting法結(jié)果顯示,采用質(zhì)粒轉(zhuǎn)染法成功上調(diào)PC-3細(xì)胞和DU145細(xì)胞的Akt基因表達(dá),且Akt蛋白活性也明顯增加。CCK-8法結(jié)果顯示,上調(diào)Akt基因表達(dá)明顯逆轉(zhuǎn)了OA對PC-3細(xì)胞和DU145細(xì)胞的存活能力的抑制效應(yīng)。流式細(xì)胞術(shù)結(jié)果顯示,上調(diào)Akt基因表達(dá)明顯逆轉(zhuǎn)了OA對PC-3細(xì)胞和DU145細(xì)胞的凋亡的促進(jìn)效應(yīng)。CCK-8法結(jié)果顯示,上調(diào)Akt基因表達(dá)明顯逆轉(zhuǎn)了OA對PC-3細(xì)胞和DU145細(xì)胞的增殖能力的抑制效應(yīng)。平板克隆形成實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,上調(diào)Akt基因表達(dá)明顯逆轉(zhuǎn)了OA對PC-3細(xì)胞和DU145細(xì)胞的克隆形成能力的抑制效應(yīng)。流式細(xì)胞術(shù)結(jié)果顯示,上調(diào)Akt基因表達(dá)明顯逆轉(zhuǎn)了OA對PC-3細(xì)胞和DU145細(xì)胞的G0/G1期阻滯的促進(jìn)效應(yīng)。上調(diào)Akt基因表達(dá)明顯逆轉(zhuǎn)了OA對PC-3細(xì)胞和DU145細(xì)胞的caspase-9和caspase-3活性的活化效應(yīng)。上調(diào)Akt基因表達(dá)明顯逆轉(zhuǎn)了OA對PC-3細(xì)胞和DU145細(xì)胞的線粒體膜電位丟失的促進(jìn)效應(yīng)。Western blotting法結(jié)果顯示,上調(diào)Akt基因表達(dá)明顯逆轉(zhuǎn)了OA對PC-3細(xì)胞和DU145細(xì)胞的p-BadSer136、Bcl-2、 p-GSK-3βSer9和cyclin D1蛋白表達(dá)的抑制效應(yīng)。結(jié)論：OA通過PI3K/Akt通路來抑制人前列腺癌細(xì)胞的體外存活能力與增殖能力。第三部分齊墩果酸通過PI3K/Akt通路抑制人前列腺癌PC-3細(xì)胞的體內(nèi)成瘤目的：探討齊墩果酸(OA)抑制人前列腺癌PC-3細(xì)胞體內(nèi)成瘤的作用機(jī)制。方法：四周齡大BALB/c雄裸鼠隨機(jī)分為四組：NC組、NC+OA組、Akt組和Akt+OA組,每組5只裸鼠。3×106個有或無Akt質(zhì)粒轉(zhuǎn)染的PC-3細(xì)胞注射于相應(yīng)組的每只裸鼠的右前腋窩皮下。每天150mg/kg的OA注射于相應(yīng)組的裸鼠腹腔。從第六天,每3天測量腫瘤大小,第21天,處死裸鼠,分離腫瘤并稱重。qRT-PCR法檢測PC-3細(xì)胞成瘤組織中Akt基因的轉(zhuǎn)錄水平。Western blotting法檢測PC-3細(xì)胞成瘤組織中Akt蛋白的表達(dá)水平。免疫組織化學(xué)法檢測PC-3細(xì)胞成瘤組織中Akt、p-AktSer473、Ki-67、 p-BadSer136、Bcl-2、p-GSK-3βS349和cyclin D1的蛋白表達(dá)水平。結(jié)果：NC+OA組的PC-3細(xì)胞體內(nèi)成瘤組織生長慢于NC組,NC+OA組分離的腫瘤的重量小于NC組,說明OA可以抑制PC-3細(xì)胞的體內(nèi)成瘤能力。Akt+OA組的Akt質(zhì)粒轉(zhuǎn)染的PC-3細(xì)胞體內(nèi)成瘤組織生長快于NC+OA組,Akt+OA組于第21天分離的腫瘤的重量大于NC+OA組,說明上調(diào)Akt基因表達(dá)逆轉(zhuǎn)了OA對PC-3細(xì)胞體內(nèi)成瘤的抑制效應(yīng)。qRT-PCR和Western blotting結(jié)果顯示,Akt組和Akt+OA組腫瘤組織的Akt蛋白表達(dá)高于NC組和NC+OA組,表明Akt蛋白表達(dá)成功上調(diào)。免疫組織化學(xué)法結(jié)果顯示,與NC組的腫瘤組織比較,NC+OA組腫瘤組織的Ki-67、p-BadSer136、Bcl-2、p-GSK-3βSer9和cyclin D1的蛋白表達(dá)受到抑制：與NC+OA組的腫瘤組織比較,Akt+OA組的腫瘤組織的Ki-67、p-BadSer136、Bcl-2、p-GSK-3βSer9和cyclin D1的蛋白表達(dá)增強(qiáng),說明上調(diào)Akt基因表達(dá)逆轉(zhuǎn)了OA對PC-3細(xì)胞成瘤組織中的Ki-67、p-BadSer136、Bcl-2、 p-GSK-3βSer9和cyclin D1的蛋白表達(dá)的抑制效應(yīng)。結(jié)論：OA能夠通過PI3K/Akt通路抑制人前列腺癌PC-3細(xì)胞的體內(nèi)成瘤能力。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：華中科技大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R737.25

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本文編號：1527536