本文關(guān)鍵詞：巴西蘇木素致死膀胱癌靶標(biāo)基因siRNA的篩選

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【摘要】：課題組前期工作表明GADD45β和c-Fos在巴西蘇木素(Brazilin)致死膀胱癌細(xì)胞T24時(shí)顯著升高,且分別過表達(dá)GADD45β和c-Fos均能抑制T24細(xì)胞的生長,表明其為Brazilin致死T24細(xì)胞潛在的靶標(biāo)基因,但并未在GADD45β和c-Fos沉默狀態(tài)下研究Brazilin對(duì)T24細(xì)胞的影響。RNA干擾是目前沉默靶標(biāo)基因的常用技術(shù)手段,但高效RNAi片段篩選步驟繁瑣,成本高。在本文中,首先以GADD45β為例,設(shè)計(jì)僅需一步酶切連接就可獲得的熒光報(bào)告載體p-GADD45β-EGFP-N1,對(duì)GADD45β的3條siRNA(siRNA360、siRNA477和siRNA638)在熒光顯微鏡下進(jìn)行干擾效率的檢測(cè),獲得的干擾效率分別為63%、34%和67%,表明siRNA638對(duì)GADD45β干擾效率最高,與RT-qPCR的篩選結(jié)果一致。為驗(yàn)證熒光報(bào)告載體的通用性,選擇c-Fos構(gòu)建熒光報(bào)告載體p-c-Fos-EGFPN1,通過篩選獲得熒光量最少的c-Fos siRNA274組的干擾效率最高為64%,與RT-qPCR的驗(yàn)證結(jié)果一致。
【作者單位】： 山西大學(xué)應(yīng)用生物學(xué)研究所;山西大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院;山西省腫瘤研究所;
【基金】：山西省優(yōu)秀人才科技創(chuàng)新項(xiàng)目(201605D211026) 山西省高校創(chuàng)新項(xiàng)目(2014016) 山西省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物專項(xiàng)資金項(xiàng)目(2013K02)
【分類號(hào)】：R737.14
【正文快照】： that the interference efficiencies of GADD45βsiRNA360,GADD45βsiRNA477and GADD45βsiRNA638were 63%,34%and 67%,which were compatible with results of RT-qPCR,and the best one was siR-NA477.To further validate the generality of the screening system,we cons

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本文編號(hào)：1297750