本文關(guān)鍵詞：內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激與氧化應(yīng)激在膜性腎病中的作用及機制

  更多相關(guān)文章： 膜性腎病 細胞凋亡 足細胞 氧化應(yīng)激 內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激

【摘要】：目的:研究膜性腎病(membranous nephropathy,MN)發(fā)病過程中足細胞損傷機制,初步探討內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激(endoplasmic reticulum stress,ERS)和氧化應(yīng)激在MN發(fā)病過程中的作用。方法:SD雄性大鼠85只,隨機分為5組:正常組(不預(yù)免,不免疫,其他實驗組正式實驗時予以隔日尾靜脈注射1ml生理鹽水(NS),同時NS1ml/d灌胃,n=20);模型組(按照改良的Border法予以C-BSA復(fù)制MN大鼠模型,同時NS 1ml/d灌胃,n=20);NAC1干預(yù)組(復(fù)制C-BSA MN大鼠模型,同時灌胃N-乙酰半胱氨酸(NAC)100mg/kg/d,n=20);NAC2干預(yù)組(復(fù)制C-BSA MN大鼠模型,同時灌胃NAC200mg/kg/d,n=20);NAC藥物對照組(不預(yù)免,不免疫,其他實驗組正式實驗時予以隔日尾靜脈注射1ml NS,同時灌胃NAC200mg/kg/d,n=5)。藥物對照組在正式免疫后第1、2、3、4周末檢測24h UTP,第4周殺檢;其余組在正式免疫后第1、2、3、4周分別隨機取5只大鼠殺檢,并于處死前檢測24h UTP;在各組殺檢時心臟取血檢查ALB、TG、TC等生化指標;采用分光光度法檢測血清中的SOD、MDA;取大鼠腎臟分別進行光鏡、電鏡、免疫熒光鑒定成模情況及病理變化;用TUNEL法檢測各組腎小球固有細胞凋亡情況并計算凋亡指數(shù)(AI);免疫組化法檢測各組腎小球中GRP78、TRAF2、Caspase12、WT-1蛋白不同時間點的半定量,并根據(jù)WT-1免疫組化結(jié)果計算足細胞密度;相關(guān)實驗指標行Pearson相關(guān)分析。結(jié)果:⑴生化指標變化正常組各實驗指標均正常;與正常組比較,模型組24h UTP、TG、TC呈時間依賴性升高,ALB隨實驗進展逐漸降低,24h UTP、ALB在第2、3、4周均有統(tǒng)計學意義(P0.05),TG、TC在第3、4周均有明顯差異(P0.05);經(jīng)過NAC治療后,NAC1組、NAC2組24h UTP、TG、TC水平下降,ALB水平上升,第3、4周24h UTP較模型組均有顯著性差異(P0.05),第4周ALB較模型組均有顯著差異(P0.05),NAC2組TG于第4周接近正常,較模型組有明顯差異(P0.05);藥物對照組臨床實驗指標較正常組無明顯異常。⑵腎臟形態(tài)學改變正常組與藥物對照組腎臟顏色正常,未見明顯形態(tài)學變化,無見電子致密物沉積,無免疫熒光沉積。與正常組比較,模型組隨著實驗進展,腎臟體積逐漸增大,色澤蒼白,病理損害逐漸加重,腎小球毛細血管袢熒光強度逐漸增強;第4周時,模型組腎臟體積明顯增大,邊緣圓鈍,呈“大白腎”樣外觀,光鏡下見腎小球明顯腫脹,少部分球囊腔狹窄,基底膜(GBM)彌漫性增厚,足細胞側(cè)“釘突”形成,部分釘突頂部融合,呈“假雙軌”結(jié)構(gòu),腎間質(zhì)可見少許膠原纖維沉積,間質(zhì)明顯增寬,電鏡下可見上皮下大量電子致密物沉積,毛細血管袢免疫熒光強度+++-+++++。與模型組比較,NAC1組、NAC2組病理損傷明顯減輕,部分GBM增厚,呈“綢緞”樣空泡變性,少量“釘突”形成,少許免疫復(fù)合物在上皮下沉積,未見明顯“假雙軌”改變,兩組間免疫熒光強度較模型組稍減弱,但無顯著性差異。⑶腎小球固有細胞凋亡的動態(tài)變化正常組與藥物對照組罕見細胞凋亡;模型組腎小球細胞凋亡較正常組明顯增多,第1、2、3、4周較正常組均有統(tǒng)計學意義(P0.05);與模型組比較,NAC1組、NAC2組腎小球細胞凋亡減少,第4周較模型組均有明顯差異(P0.05),但仍均高于正常組(P0.05)。⑷足細胞密度變化正常組各時間點均無明顯差異;與正常組比較,模型組第1周足細胞密度開始減少,但無統(tǒng)計學意義,第2、3、4周明顯下降(P0.05);經(jīng)干預(yù)治療后,NAC1組、NAC2組足細胞密度較模型組略增大,于第4周出現(xiàn)明顯差異(P0.05),足細胞密度增大與NAC劑量有一定關(guān)系,但整個治療過程中同期比較均無統(tǒng)計學意義;與正常組比較,藥物對照組第4周足細胞密度無明顯差異。⑸血清中SOD、MDA變化與正常組比較,模型組大鼠血清中SOD表達量呈應(yīng)激性升高,隨后呈時間依賴性下降,第1、2、3、4周均有顯著性差異(P0.05);模型組MDA呈升高趨勢,第1、2、3、4周較正常組均有顯著性差異(P0.05);經(jīng)NAC干預(yù)后,NAC1組、NAC2組大鼠血清中SOD升高、MDA降低,在第3、4周較模型組均有明顯差異(P0.05),第4周NAC2組MDA接近正常組。⑹腎臟組織免疫組化結(jié)果正常組大鼠GRP78主要集中在腎小管細胞胞漿表達,腎小球內(nèi)表達較少;與正常組比較,模型組GRP78表達位置相同,腎小球GRP78表達在實驗前3周呈時間依賴性升高,隨后呈下降趨勢,第1、2、3、4周較正常組均有統(tǒng)計學意義(P0.05);與模型組比較,NAC1、NAC2組腎小球GRP78表達減弱,第2周有明顯差異(P0.05);與正常組比較,NAC1、NAC2組第1、2、3、4周均有統(tǒng)計學意義(P0.05)。正常組大鼠TRAF2表達量較少,主要集中在腎小球表達,近遠端小管少量表達,集合管幾乎不表達;與正常組比較,模型組腎小球TRAF2呈時間依賴性升高,第1、2、3、4周均有顯著性差異(P0.05);Caspase12在正常組大鼠少量表達,主要定位在集合管和近遠端小管細胞胞漿,腎小球少量表達;與正常組比較,模型組腎小球Caspase12呈時間依賴性升高,第2、3、4周均有統(tǒng)計學意義(P0.05)。經(jīng)NAC抗氧化處理后,NAC1、NAC2組腎小球TRAF2、Caspase12表達均減弱,在第3、4周較模型組均有顯著差異(P0.05),但仍較正常組升高(P0.05)。第4周藥物對照組的GRP78、TRAF2、Caspase12表達位置同正常組,其在腎小球表達較正常組均無明顯差異。⑺模型組各指標相關(guān)性分析24h UTP與腎小球AI呈正相關(guān),與足細胞密度呈負相關(guān);SOD與24h UTP、腎小球AI呈負相關(guān),與足細胞密度呈正相關(guān);MDA與24h UTP、腎小球AI呈正相關(guān),與足細胞密度呈負相關(guān);腎小球Caspase12與足細胞密度呈顯著負相關(guān),與腎小球AI呈正相關(guān);腎小球AI與足細胞密度呈負相關(guān)。結(jié)論:⑴氧化應(yīng)激與內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激參與大鼠膜性腎病發(fā)病。⑵在大鼠膜性腎病發(fā)病過程中,內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激早期可能通過未折疊蛋白反應(yīng)起一定保護作用,晚期則可能通過活化TRAF2-Caspase12途徑誘導足細胞損傷。⑶在大鼠膜性腎病發(fā)病過程中,氧化應(yīng)激可能通過介導TRAF2-Caspase12途徑的活化誘導足細胞凋亡。
【學位授予單位】：四川醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R692

【共引文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前6條

1 董瑞華;趙巍;王立明;張旭光;吳坤;;酸性神經(jīng)磷脂酶在維生素E琥珀酸酯誘導胃癌細胞凋亡過程中對內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激的影響[J];癌變.畸變.突變;2013年05期

2 Su-zhen Jiang;Jia-jia Zheng;Xiang-Mei Chen;Ting Zhang;Qiang Xu;Hui Zhuang;Feng-min Lu;;Hepatitis B Virus S Promoter Deletion in Hepatocellular Carcinoma[J];Infection International(Electronic Edition);2012年01期

3 李坤;楊鳳博;苗雨晨;;擬南芥膜蛋白GPX3的原核表達及純化[J];河南大學學報(自然科學版);2013年06期

4 馮春紅;段春燕;夏先明;代榮陽;李洪;;內(nèi)質(zhì)網(wǎng)伴侶分子GRP78在膽管癌細胞中的作用研究[J];瀘州醫(yī)學院學報;2014年05期

5 Britta Hardy;Annat Raiter;;GRP78 expression beyond cellular stress:A biomarker for tumor manipulation[J];World Journal of Immunology;2015年02期

6 李燕;高操;鄭利;司馬欣元;武陽;;NaHS抑制創(chuàng)傷出血性休克導致的大鼠心肌組織的凋亡[J];現(xiàn)代生物醫(yī)學進展;2014年11期

中國博士學位論文全文數(shù)據(jù)庫 前7條

1 常曉慧;組分中藥金智達對認知功能的改善及其相關(guān)機制的研究[D];大連醫(yī)科大學;2012年

2 黃曉莉;維素E琥珀酸酯誘導胃癌細胞凋過程中內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激與氧化應(yīng)激的互作用[D];哈爾濱醫(yī)科大學;2012年

3 韓笑;具有抗氧化活性的硒蛋白的真核表達與活性研究[D];吉林大學;2014年

4 劉振;新型硫化氫緩釋劑GYY4137抗動脈粥樣硬化的作用及機制研究[D];南京醫(yī)科大學;2012年

5 張帆;小鼠重組糖調(diào)節(jié)蛋白78誘導DC的生物學特性研究[D];華中科技大學;2014年

6 帕力萬;利拉魯肽對糖尿病大鼠腸道菌群的影響[D];北京協(xié)和醫(yī)學院;2015年

7 籍文強;硫化氫抗L-NAME所致的大鼠肝臟損傷作用及機制的研究[D];河北醫(yī)科大學;2015年

中國碩士學位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 趙國宏;葡萄糖調(diào)節(jié)蛋白78在食管鱗癌轉(zhuǎn)移中的作用及機制的研究[D];第四軍醫(yī)大學;2013年

2 陳風雷;小鼠Zhangfei基因過表達和shRNA干擾慢病毒載體的構(gòu)建和鑒定[D];西北農(nóng)林科技大學;2013年

3 程彩虹;綿羊附睪特異谷胱甘肽過氧化物酶（GPx5）基因的克隆與表達[D];山西農(nóng)業(yè)大學;2013年

4 楊少娟;硫化氫與糖尿病的研究進展[D];華中科技大學;2013年

5 夏飛;未折疊蛋白反應(yīng)在增強口腔鱗癌藥物治療敏感性中的作用[D];蚌埠醫(yī)學院;2014年

6 肖冬;黃癸固體分散體通過激活A(yù)MPK通路治療糖尿病腎病的作用機制研究[D];吉林大學;2014年

7 莫家潤;Neuronostatin對小鼠大腦H_2S通路及大鼠急性胰腺炎的作用[D];蘭州大學;2014年

8 李曉慧;內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激誘導大鼠肝星狀細胞凋亡的機制研究[D];安徽醫(yī)科大學;2014年

9 郭增;缺氧/無血清培養(yǎng)對大鼠骨髓間充質(zhì)干細胞中3-巰基丙酮酸硫基轉(zhuǎn)移酶/硫化氫合成途徑的影響[D];安徽醫(yī)科大學;2014年

10 高雪靜;血管緊張素Ⅱ?qū)ψ慵毎允傻挠绊懠皺C制研究[D];第三軍醫(yī)大學;2014年

，

本文編號：1272518