本文關(guān)鍵詞：MEPE蛋白影響前列腺癌細胞遷移作用機制研究

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【摘要】：目的:研究細胞外基質(zhì)磷酸糖蛋白(MEPE)在前列腺癌細胞中的表達水平對前列腺癌細胞遷移能力的影響,以及MEPE蛋白影響細胞遷移能力的機制與小G蛋白家族蛋白PI3K/Rac1/PAK1通路的關(guān)系。為闡明腫瘤浸潤及轉(zhuǎn)移機制提供實驗依據(jù)。方法:構(gòu)建腺病毒包裝質(zhì)粒pYr-ads-4-mMEPE與pYr-ads-4-siMEPE,在HEK293細胞中包裝形成腺病毒顆粒,分別轉(zhuǎn)染正常前列腺上皮細胞株RWPE1與前列腺癌細胞株P(guān)C3,同時轉(zhuǎn)染空質(zhì)粒作為對照細胞株。免疫印跡檢測轉(zhuǎn)染細胞株中MEPE蛋白表達水平,確定轉(zhuǎn)染效果。通過經(jīng)典的劃痕實驗、Transwell侵襲/遷移實驗對比人為上調(diào)或下調(diào)MEPE蛋白表達水平的細胞株以及其對應(yīng)的空載體的細胞株之間侵襲/遷移能力的差異。進一步采用免疫印跡方法檢測MEPE蛋白表達水平不同的各個細胞株內(nèi)信號通路PI3K/Rac1/PAK1的信號蛋白表達水平是否也隨之改變。結(jié)果:1經(jīng)酶切與測序驗證,pYr-ads-4-mMEPE與pYr-ads-4-siMEPE重組質(zhì)粒構(gòu)建成功,免疫印跡分析驗證轉(zhuǎn)染rAd-4-mMEPE的RWPE1細胞株中MEPE蛋白表達水平上調(diào),轉(zhuǎn)染rAd-4-siMEPE的PC3細胞株中MEPE蛋白表達水平下調(diào),而轉(zhuǎn)染相應(yīng)空載體的細胞株中MEPE蛋白的表達水平與野生型細胞株一致,說明腺病毒質(zhì)粒構(gòu)建成功可在真核細胞表達。2通過劃痕實驗分別在0h與48h觀察轉(zhuǎn)染rAd-4-mMEPE的RWPE1細胞株、轉(zhuǎn)染rAd-4-siMEPE的PC3細胞株以及其對照細胞株細胞遷移情況,MEPE蛋白表達水平高的細胞株遷移率分別為83%、56%,空載體對照細胞遷移率為68%、79%,實驗結(jié)果表明MEPE蛋白表達水平高的細胞株細胞遷移能力明顯增強。3 Transwell實驗觀察到轉(zhuǎn)染rAd-4-mMEPE的RWPE1細胞株遷移率比對照細胞株增加了15%,轉(zhuǎn)染rAd-4-siMEPE的PC3細胞株遷移率比對照細胞株下降了23%。實驗結(jié)果表明MEPE蛋白表達水平高的細胞株細胞遷移能力明顯增強。4免疫印跡分析結(jié)果顯示,轉(zhuǎn)染rAd-4-mMEPE的RWPE1細胞株、轉(zhuǎn)染rAd-4-siMEPE的PC3細胞株以及其對照細胞株中PI3K與Rac1的信號蛋白表達水平也隨MEPE表達水平改變而改變。在RWPE1細胞中其中隨著MEPE蛋白表達水平增高,PI3K與Rac1表達水平也升高,在MEPE蛋白表達水平較低的轉(zhuǎn)染rAd-4-siMEPE的PC3細胞株與轉(zhuǎn)染空載體的RWPE1細胞株中,PI3K與Rac1表達水平較低,actin的表達水平未見明顯變化,轉(zhuǎn)染MEPE的RWPE1細胞中PAK1蛋白表達量沒有增加,但轉(zhuǎn)染PC3-si-hmepe細胞中PAK1蛋白表達量比轉(zhuǎn)染空載體PC3細胞表達量明顯下降。結(jié)論:1.MEPE蛋白表達水平影響前列腺癌細胞株的侵襲/遷移能力。2.MEPE蛋白參與前列腺癌細胞株遷移活動機制與PI3K/Rac1/PAK1信號通路相關(guān)。
【學(xué)位授予單位】：佳木斯大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R737.25

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1 張慧明;MEPE蛋白影響前列腺癌細胞遷移作用機制研究[D];佳木斯大學(xué);2015年

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