本文關(guān)鍵詞：MEPE蛋白影響前列腺癌細(xì)胞遷移作用機(jī)制研究

  更多相關(guān)文章： MEPE蛋白 PI3K/Rac1/PAK1 RWPE1細(xì)胞 PC3細(xì)胞

【摘要】：目的:研究細(xì)胞外基質(zhì)磷酸糖蛋白(MEPE)在前列腺癌細(xì)胞中的表達(dá)水平對(duì)前列腺癌細(xì)胞遷移能力的影響,以及MEPE蛋白影響細(xì)胞遷移能力的機(jī)制與小G蛋白家族蛋白PI3K/Rac1/PAK1通路的關(guān)系。為闡明腫瘤浸潤(rùn)及轉(zhuǎn)移機(jī)制提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。方法:構(gòu)建腺病毒包裝質(zhì)粒pYr-ads-4-mMEPE與pYr-ads-4-siMEPE,在HEK293細(xì)胞中包裝形成腺病毒顆粒,分別轉(zhuǎn)染正常前列腺上皮細(xì)胞株RWPE1與前列腺癌細(xì)胞株P(guān)C3,同時(shí)轉(zhuǎn)染空質(zhì)粒作為對(duì)照細(xì)胞株。免疫印跡檢測(cè)轉(zhuǎn)染細(xì)胞株中MEPE蛋白表達(dá)水平,確定轉(zhuǎn)染效果。通過(guò)經(jīng)典的劃痕實(shí)驗(yàn)、Transwell侵襲/遷移實(shí)驗(yàn)對(duì)比人為上調(diào)或下調(diào)MEPE蛋白表達(dá)水平的細(xì)胞株以及其對(duì)應(yīng)的空載體的細(xì)胞株之間侵襲/遷移能力的差異。進(jìn)一步采用免疫印跡方法檢測(cè)MEPE蛋白表達(dá)水平不同的各個(gè)細(xì)胞株內(nèi)信號(hào)通路PI3K/Rac1/PAK1的信號(hào)蛋白表達(dá)水平是否也隨之改變。結(jié)果:1經(jīng)酶切與測(cè)序驗(yàn)證,pYr-ads-4-mMEPE與pYr-ads-4-siMEPE重組質(zhì)粒構(gòu)建成功,免疫印跡分析驗(yàn)證轉(zhuǎn)染rAd-4-mMEPE的RWPE1細(xì)胞株中MEPE蛋白表達(dá)水平上調(diào),轉(zhuǎn)染rAd-4-siMEPE的PC3細(xì)胞株中MEPE蛋白表達(dá)水平下調(diào),而轉(zhuǎn)染相應(yīng)空載體的細(xì)胞株中MEPE蛋白的表達(dá)水平與野生型細(xì)胞株一致,說(shuō)明腺病毒質(zhì)粒構(gòu)建成功可在真核細(xì)胞表達(dá)。2通過(guò)劃痕實(shí)驗(yàn)分別在0h與48h觀察轉(zhuǎn)染rAd-4-mMEPE的RWPE1細(xì)胞株、轉(zhuǎn)染rAd-4-siMEPE的PC3細(xì)胞株以及其對(duì)照細(xì)胞株細(xì)胞遷移情況,MEPE蛋白表達(dá)水平高的細(xì)胞株遷移率分別為83%、56%,空載體對(duì)照細(xì)胞遷移率為68%、79%,實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明MEPE蛋白表達(dá)水平高的細(xì)胞株細(xì)胞遷移能力明顯增強(qiáng)。3 Transwell實(shí)驗(yàn)觀察到轉(zhuǎn)染rAd-4-mMEPE的RWPE1細(xì)胞株遷移率比對(duì)照細(xì)胞株增加了15%,轉(zhuǎn)染rAd-4-siMEPE的PC3細(xì)胞株遷移率比對(duì)照細(xì)胞株下降了23%。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明MEPE蛋白表達(dá)水平高的細(xì)胞株細(xì)胞遷移能力明顯增強(qiáng)。4免疫印跡分析結(jié)果顯示,轉(zhuǎn)染rAd-4-mMEPE的RWPE1細(xì)胞株、轉(zhuǎn)染rAd-4-siMEPE的PC3細(xì)胞株以及其對(duì)照細(xì)胞株中PI3K與Rac1的信號(hào)蛋白表達(dá)水平也隨MEPE表達(dá)水平改變而改變。在RWPE1細(xì)胞中其中隨著MEPE蛋白表達(dá)水平增高,PI3K與Rac1表達(dá)水平也升高,在MEPE蛋白表達(dá)水平較低的轉(zhuǎn)染rAd-4-siMEPE的PC3細(xì)胞株與轉(zhuǎn)染空載體的RWPE1細(xì)胞株中,PI3K與Rac1表達(dá)水平較低,actin的表達(dá)水平未見(jiàn)明顯變化,轉(zhuǎn)染MEPE的RWPE1細(xì)胞中PAK1蛋白表達(dá)量沒(méi)有增加,但轉(zhuǎn)染PC3-si-hmepe細(xì)胞中PAK1蛋白表達(dá)量比轉(zhuǎn)染空載體PC3細(xì)胞表達(dá)量明顯下降。結(jié)論:1.MEPE蛋白表達(dá)水平影響前列腺癌細(xì)胞株的侵襲/遷移能力。2.MEPE蛋白參與前列腺癌細(xì)胞株遷移活動(dòng)機(jī)制與PI3K/Rac1/PAK1信號(hào)通路相關(guān)。
【學(xué)位授予單位】：佳木斯大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類(lèi)號(hào)】：R737.25

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1 張慧明;MEPE蛋白影響前列腺癌細(xì)胞遷移作用機(jī)制研究[D];佳木斯大學(xué);2015年

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本文編號(hào)：1177647