本文關(guān)鍵詞：12-脂氧化酶對鼠腎小球Ezh2表達(dá)的影響及機(jī)制研究

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【摘要】：腎臟纖維化是慢性腎臟病的共同病理特征,主要表現(xiàn)為細(xì)胞外基質(zhì)（extracellular matrix,ECM）成分的積聚、腎小球硬化和腎小管間質(zhì)纖維化的形成。在腎臟纖維化過程中,腎小球硬化、小管間質(zhì)纖維化、炎性細(xì)胞浸潤以及腎實(shí)質(zhì)的丟失(小管萎縮、毛細(xì)血管閉塞、足細(xì)胞耗竭)共同參與了其發(fā)生和發(fā)展。腎臟纖維化為慢性腎臟病進(jìn)展至終末期腎病的共同通路，因此積極了解腎臟纖維化的形成機(jī)制及影響腎臟纖維化的因素進(jìn)一步指導(dǎo)臨床治療極其重要。阻斷引起腎臟纖維化相關(guān)的作用通路可能是一種有效的阻止進(jìn)展至終末期腎病的治療靶點(diǎn)。新興的研究結(jié)果表明，，組蛋白修飾在腎臟疾病、終末期腎病和腎臟纖維化進(jìn)展中起到關(guān)鍵作用。多種細(xì)胞因子，趨化因子和生長因子在基質(zhì)的形成和降解中協(xié)同作用，導(dǎo)致ECM的積聚失衡，最終引起腎小球硬化和間質(zhì)纖維化。在血管內(nèi)皮和腎臟細(xì)胞中，12-脂氧化酶(12-lipoxygenase,12-LO)代謝產(chǎn)物12(S)HETE具有重要的促增殖及炎性因子作用，12-LO能夠通過其代謝產(chǎn)物引起腎小球ECM積聚導(dǎo)致腎臟纖維化。組蛋白甲基轉(zhuǎn)移酶Ezh2（enhancer of zeste homolog2,Ezh2）的表達(dá)變化與腎臟纖維化的關(guān)系以及12-LO對腎小球Ezh2表達(dá)調(diào)節(jié)的影響與腎臟纖維化的關(guān)系尚不明確。 方法： 本研究采用腎小球系膜細(xì)胞培養(yǎng)的方法，應(yīng)用RT-PCR、Western blot、轉(zhuǎn)染等方法探討12-LO是否通過p38MAPK通路調(diào)控Ezh2導(dǎo)致腎小球纖維化，以及觀察12-LO和Ezh2在腎臟纖維化中的作用。 結(jié)果： 1、抑制p38活性可有效阻斷12(S)HETE誘導(dǎo)的系膜細(xì)胞（mesangialcells,MC）內(nèi)p38活性和Ezh2蛋白表達(dá)減少，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P 0.01）和CTGF的mRNA表達(dá)增加，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P 0.05）。 2、野生型小鼠系膜細(xì)胞（mouse mesangial cells,MMC）和12-LO基因敲除小鼠系膜細(xì)胞(12lipoxygenase knockout mesangial cells,12-LOKO MC)相比，12LOKO MC Ezh2蛋白水平明顯高于MMC，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P 0.01），同時CTGF的mRNA表達(dá)水平明顯低于MMC，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P 0.05）。 3、大鼠系膜細(xì)胞轉(zhuǎn)染NTC或siEzh2，轉(zhuǎn)染siEzh2的RMC，CTGF的mRNA水平明顯高于轉(zhuǎn)染NTC，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P 0.05）。 結(jié)論： 1、腎小球中12-LO通過p38MAPK途徑調(diào)節(jié)Ezh2表達(dá)，進(jìn)而調(diào)控CTGF的表達(dá)。 2、12-LO通過下調(diào)Ezh2上調(diào)CTGF引起腎臟纖維化。
【關(guān)鍵詞】：12-脂氧化酶 Ezh2 CTGF 系膜細(xì)胞 腎小球
【學(xué)位授予單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R692
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-11
• 第1章 文獻(xiàn)綜述11-21
• 1.1 腎臟纖維化的發(fā)病機(jī)制研究進(jìn)展11-12
• 1.2 炎癥反應(yīng)在腎臟纖維化的作用12-15
• 1.2.1 生長因子在腎臟纖維化的作用12-13
• 1.2.2 血管活性因子在腎臟纖維化中的作用13-14
• 1.2.3 表觀遺傳學(xué)在腎臟纖維化的作用14-15
• 1.3 表觀遺傳學(xué)及其調(diào)控15-19
• 1.3.1 組蛋白修飾15-16
• 1.3.2 組蛋白甲基化與腎臟纖維化16
• 1.3.3 組蛋白修飾酶 Ezh216-19
• 1.4 12-脂氧化酶與腎臟纖維化19-21
• 第2章 材料與方法21-30
• 2.1 實(shí)驗(yàn)材料21-24
• 2.1.1 細(xì)胞系21
• 2.1.2 所用試劑21-22
• 2.1.3 主要儀器22-23
• 2.1.4 主要試劑配制23-24
• 2.2 實(shí)驗(yàn)方法：24-30
• 2.2.1 腎小球分離及系膜細(xì)胞培養(yǎng)（包括 SD 大鼠，清潔級野生型（WT）和 12-LO 基因敲除 C57BL/6 小鼠）24
• 2.2.2 實(shí)驗(yàn)分組24-25
• 2.2.3 蛋白印跡雜交（Western Blot）25-27
• 2.2.4 cDNA 制備27-28
• 2.2.5 Amaxa 協(xié)同轉(zhuǎn)染腎小球系膜細(xì)胞28-29
• 2.2.6 結(jié)果分析與統(tǒng)計學(xué)處理29-30
• 第3章 結(jié)果30-35
• 3.1 觀察 SB203580 對 12(S)HETE 誘導(dǎo)的 SD 大鼠系膜細(xì)胞 Ezh2 表達(dá)的影響30-32
• 3.2 觀察野生型小鼠系膜細(xì)胞和 12LOKO 小鼠系膜細(xì)胞對 Ezh2 和CTGF 表達(dá)的影響32-33
• 3.3 觀察大鼠系膜細(xì)胞轉(zhuǎn)染 NTC 或 siEzh2 對 Ezh2 和 CTGF 表達(dá)影響33-35
• 第4章 討論35-38
• 第5章 結(jié)論38-39
• 參考文獻(xiàn)39-45
• 作者簡介及在學(xué)期間所取得的科研成果45-46
• 致謝46

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 楊敏,黃海長,李驚子,王海燕;結(jié)締組織生長因子增加TGFβ活化成肌纖維細(xì)胞的作用[J];基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)與臨床;2005年01期

本文編號：1093148