本文關(guān)鍵詞：轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β1對(duì)前列腺癌DU145細(xì)胞中腫瘤干細(xì)胞作用的實(shí)驗(yàn)研究

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【摘要】：研究背景：前列腺癌(Prostate Cancer,PCa)是老年男性中最常見的惡性腫瘤之一。在世界范圍內(nèi),就發(fā)病率而言,前列腺癌一直處于較高水平,在所有男性惡性腫瘤中排第二位,僅排在肺癌之后,其致死率排第六位。在我國(guó),由于老年人口增多,飲食習(xí)慣改善及生活水平提高,前列腺癌的發(fā)病率逐年升高。在發(fā)達(dá)國(guó)家中,前列腺癌占男性癌癥死因的第二位。就五年生存率而言,局限性前列腺癌可達(dá)100%,但是進(jìn)展期前列腺癌僅為31%。對(duì)于早期未發(fā)生轉(zhuǎn)移前列腺癌患者,大多數(shù)可通過行前列腺癌根治術(shù)得到很好的治療,對(duì)于進(jìn)展期前列腺癌,目前主要的治療方法是雄激素阻斷療法(androgem-deprivation therapy,ADT),但是接受雄激素去勢(shì)治療的患者早期敏感,多數(shù)會(huì)在中位期左右演變?yōu)槿?shì)治療無效前列腺癌(Castration-Resistant Prostate Cancer, CRPC),最終導(dǎo)致難以治愈。CRPC患者的生存期很少超過十八個(gè)月。因此,進(jìn)一步闡明CRPC形成機(jī)制,研究CRPC的有效治療方案是一個(gè)極具挑戰(zhàn)性的課題。目前的研究表明,CRPC的形成可能和前列腺癌中存在腫瘤干細(xì)胞(Cancer Stem Cells, CSC)有關(guān)。很多學(xué)者認(rèn)為,腫瘤組織中存在兩種細(xì)胞,即CSC和終末分化的成熟腫瘤細(xì)胞,終末分化的成熟腫瘤細(xì)胞又被稱為非成瘤細(xì)胞,占腫瘤細(xì)胞總數(shù)的絕大部分,但增殖能力有限,在維持腫瘤的體積等方面發(fā)揮著重要作用,體外實(shí)驗(yàn)很難發(fā)展成為新的腫瘤。腫瘤復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移的根本原因就是腫瘤組織中CSC的存在。CSC通過激活抗凋亡途徑、增加膜轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白、增強(qiáng)DNA修復(fù)等方式免于被殺傷,以此來逃避放化療等腫瘤治療方案,為腫瘤復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移留下隱患。在抗腫瘤治療結(jié)束后,CSC可以分化為非成瘤細(xì)胞并增殖形成新的腫瘤。轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β1 (transforming growth factor-β1, TGF-β1)屬于TGF-β超家族,是一類細(xì)胞因子,具有調(diào)節(jié)細(xì)胞生長(zhǎng)和分化等多種功能。TGF-β1在腫瘤侵襲和轉(zhuǎn)移過程中發(fā)揮重要的作用。TGF-β1既在胚胎干細(xì)胞中發(fā)揮重要作用,參與自我更新能力的維持和多向分化,也在成體干細(xì)胞的分化過程中扮演重要角色,并在其他多種干細(xì)胞的維持和分化中有著不可替代的作用。TGF-β1信號(hào)通路參與上皮-間充質(zhì)轉(zhuǎn)化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)的重要過程,而EMT過程與腫瘤惡性程度呈正相關(guān)。研究目的：通過體外實(shí)驗(yàn)研究TGF-β1對(duì)前列腺癌DU145細(xì)胞系的影響,使用流式細(xì)胞儀檢測(cè)不同濃度TGF-β1作用后前列腺癌DU145細(xì)胞系腫瘤干細(xì)胞表型CD133的表達(dá)率,MTT法檢測(cè)不同濃度TGF-β1對(duì)前列腺癌DU145細(xì)胞系增殖、侵襲、遷移的影響,并通過western blot及qRT-PCR檢測(cè)相關(guān)蛋白及基因表達(dá)量的變化,初步探討其相關(guān)機(jī)制。研究方法：1、利用MTT法檢測(cè)不同濃度TGF-β1干預(yù)前后前列腺癌DU145細(xì)胞增殖能力的變化。2、利用Transwell小室檢測(cè)不同濃度TGF-β干預(yù)前后對(duì)前列腺癌DU145細(xì)胞系遷移及侵襲能力的影響。3、使用流式細(xì)胞儀檢測(cè)TGF-β1對(duì)前列腺癌DU145細(xì)胞系腫瘤干細(xì)胞標(biāo)記物CD133表達(dá)的影響。4、采用qRT-PCR方法測(cè)定TGF-β1對(duì)前列腺癌DU145細(xì)胞系Wnt/β-catenin信號(hào)通路、腫瘤耐藥基因ABCG2、腫瘤干細(xì)胞相關(guān)基因Sox2在轉(zhuǎn)錄水平的影響。5、采用western-blot方法測(cè)定不同濃度TGF-β1干預(yù)前后前列腺癌DU145細(xì)胞系Wnt/β-catenin信號(hào)通路、腫瘤耐藥基因ABCG2、腫瘤干細(xì)胞相關(guān)基因Sox2在翻譯水平的變化。實(shí)驗(yàn)結(jié)果：1、MTT法描繪生長(zhǎng)曲線提示TGF-β可以抑制前列腺癌DU145細(xì)胞系的增殖,TGF-β1的濃度從2.5ng/ml升高到10ng/ml的過程時(shí),隨著TGF-β1濃度的升高,DU145細(xì)胞系的生長(zhǎng)曲線下移,增殖能力下降。2、TGF-β能夠促進(jìn)前列腺癌DU145細(xì)胞系的遷移和侵襲能力,并且隨著TGF-β1的濃度的升高,前列腺癌DU145細(xì)胞系的遷移和侵襲能力增強(qiáng),且呈正相關(guān)。3.流式細(xì)胞儀檢測(cè)腫瘤干細(xì)胞表面標(biāo)志物CD133提示TGF-β1能夠促進(jìn)CD133的表達(dá),并且CD133的表達(dá)率隨著TGF-β1濃度的升高而升高。4、qRT-PCR結(jié)果提示,TGF-β1濃度在2.5ng/ml時(shí)即能明顯抑制β-catenin基因的表達(dá),其作用不隨濃度而變化；同時(shí)TGF-β1能夠促進(jìn)ABCG2及Sox2基因的表達(dá),并且作用隨著濃度的升高逐漸增強(qiáng)。5、western-blot結(jié)果顯示TGF-β1濃度在2.5ng/ml時(shí)就能抑制β-catenin蛋白的表達(dá),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),并且隨著TGF-β1濃度的升高,其抑制作用隨之增強(qiáng),但是差異沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。TGF-β1能夠促進(jìn)ABCG2及Sox2蛋白的表達(dá),其濃度在2.5ng/ml時(shí)差異即開始有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。結(jié)論：TGF-β1能夠抑制前列腺癌DU145細(xì)胞系的增殖能力,減弱Wnt/β-catenin信號(hào)通路的功能,同時(shí)促進(jìn)腫瘤耐藥蛋白ABCG2及干細(xì)胞相關(guān)基因Sox2的表達(dá),并使腫瘤干細(xì)胞表面標(biāo)志物CD133的表達(dá)增強(qiáng),促進(jìn)其遷移及侵襲能力。總之,TGF-β1通過作用于Wnt/p-catenin信號(hào)通路及增加耐藥蛋白ABCG2的表達(dá),使腫瘤細(xì)胞增殖能力減弱,但是增強(qiáng)其干細(xì)胞能力,導(dǎo)致腫瘤難以根治,容易復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移。
【關(guān)鍵詞】：轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β1 前列腺癌 腫瘤干細(xì)胞
【學(xué)位授予單位】：蘭州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R737.25
【目錄】：

• 中文摘要3-6
• Abstract6-9
• 英文縮略詞9-12
• 引言12-16
• 第一部分：研究不同濃度TGF-β1干預(yù)前后前列腺癌DU145細(xì)胞生物學(xué)行為及腫瘤干細(xì)胞標(biāo)記物CD133含量的變化16-28
• 材料與方法16-23
• 一、材料16-17
• 二、方法17-23
• (一)、MTT法檢測(cè)不同濃度TGF-β1干預(yù)前后前列腺癌DU145細(xì)胞增殖能力的變化17-20
• (二)、利用Transwell小室檢測(cè)不同濃度TGF-β1干預(yù)后對(duì)前列腺癌DU145細(xì)胞系侵襲和遷移能力的變化20-21
• (三)、流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)不同濃度TGF-β1干預(yù)后對(duì)前列腺癌DU145細(xì)胞系腫瘤干細(xì)胞表面標(biāo)志物CD133表達(dá)量的變化21-23
• 三、統(tǒng)計(jì)分析23
• 實(shí)驗(yàn)結(jié)果23-25
• 一、TGF-β1能抑制前列腺癌DU145細(xì)胞系的增殖23-24
• 二、TGF-β1能促進(jìn)前列腺癌DU145細(xì)胞系的侵襲能力24
• 三、TGF-β1能夠提高CD133陽(yáng)性細(xì)胞的比例24-25
• 討論25-28
• 第二部分：研究不同濃度TGF-β1干預(yù)前后對(duì)前列腺癌DU145細(xì)胞系腫瘤干細(xì)胞相關(guān)蛋白轉(zhuǎn)錄與翻譯的影響28-43
• 材料與方法28-38
• 一、材料28-30
• 二、方法30-38
• (一) 采用qRT-PCR方法測(cè)定不同濃度TGF-β1干預(yù)前后前列腺癌DU145細(xì)胞系Wnt/β-catenin信號(hào)通路、腫瘤耐藥基因ABCG2、腫瘤干細(xì)胞相關(guān)蛋白Sox2在轉(zhuǎn)錄水平的變化30-33
• (二) 采用western-blot方法測(cè)定不同濃度TGF-β1干預(yù)前后前列腺癌DU145細(xì)胞系Wnt/β-catenin信號(hào)通路、腫瘤耐藥基因ABCG2、腫瘤干細(xì)胞相關(guān)蛋白Sox2蛋白在翻譯水平的變化33-38
• 三、統(tǒng)計(jì)分析38
• 實(shí)驗(yàn)結(jié)果38-41
• 一、TGF-β1能夠抑制Wnt/β-catenin信號(hào)通路中β-catenin基因,同時(shí)促進(jìn)腫瘤耐藥蛋白ABCG2及干細(xì)胞相關(guān)基因SOX2的表達(dá)38-39
• 二、TGF-β1能夠抑制Wnt/β-catenin信號(hào)通路中β-catenin蛋白,同時(shí)促進(jìn)腫瘤耐藥蛋白ABCG2及干細(xì)胞相關(guān)基因SOX2的表達(dá)39-41
• 討論41-43
• 全文結(jié)論43-44
• 研究展望44-45
• 圖片45-51
• 參考文獻(xiàn)51-56
• 在學(xué)期間的研究成果56-57
• 致謝57-58
• 綜述 TGF-β1在腫瘤干細(xì)胞中的作用58-62
• 參考文獻(xiàn)60-62

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1 蔡劍;彭成;朱曉燕;張程;萬峰;曾文彤;張蜀武;;廣藿香醇對(duì)人雄激素非依賴性前列腺癌細(xì)胞DU145生長(zhǎng)的抑制作用及機(jī)制[J];中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志;2014年10期

2 陳毅夫;蔣先鎮(zhèn);何樂業(yè);湯育新;龍智;;iNOS基因轉(zhuǎn)染對(duì)雄激素非依賴性前列腺癌細(xì)胞DU145生長(zhǎng)的影響[J];中華男科學(xué)雜志;2012年08期

3 蔣寧;李曉石;陳靖;常文亮;王娟;周利群;牛遠(yuǎn)杰;;NSBP1調(diào)節(jié)非激素依賴性前列腺癌DU145細(xì)胞的凋亡和增殖[J];中華臨床醫(yī)師雜志(電子版);2013年07期

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5 張毅;佟笑竹;徐小Z，

本文編號(hào)：1066867