發(fā)布時(shí)間：2017-10-08 11:20

  本文關(guān)鍵詞：小型豬復(fù)合麻醉劑及其頡頏劑對(duì)大鼠不同腦區(qū)LKB1影響的研究

  更多相關(guān)文章： 小型豬 麻醉 XFM 頡頏劑 交互作用機(jī)制 LKB1

【摘要】：小型豬復(fù)合麻醉劑(XFM)及其頡頏劑具有效果確實(shí)、安全、副作用小及使用方便的特點(diǎn),但其麻醉和催醒機(jī)理尚不完全清楚。隨著對(duì)于細(xì)胞信號(hào)通路的研究不斷深入,尋找明確的藥物作用靶位,探尋關(guān)鍵的作用機(jī)制一直是全麻機(jī)理和催醒機(jī)理研究的重點(diǎn)。而在中樞神經(jīng)系統(tǒng)里面存在著非常復(fù)雜的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)網(wǎng)絡(luò),可謂紛繁復(fù)雜。其中,LKB1可以磷酸化諸多保守的下游激酶,就是一個(gè)很好的代表,AMPK家族屬于絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶,LKB1通過磷酸化AMPK而激活A(yù)MPK,負(fù)向調(diào)節(jié)mTOR的活性,即LKB1-AMPK-mTOR信號(hào)傳導(dǎo)通路。LKB1/AMPK/m TOR通路可在細(xì)胞增殖、生長(zhǎng)、分化等過程中起著中心調(diào)控點(diǎn)的作用,在長(zhǎng)時(shí)程調(diào)節(jié)(麻醉時(shí)間長(zhǎng)短)及樹突的興奮性調(diào)節(jié)中,LKB1起到了重要作用,特別是參與局部蛋白質(zhì)的合成與神經(jīng)元可塑性密切相關(guān)。這可能就是全麻藥物及其頡頏劑在中樞神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)揮作用的關(guān)鍵靶位點(diǎn)和作用途徑之一。為準(zhǔn)確地了解XFM及其頡頏劑對(duì)中樞高級(jí)神經(jīng)系統(tǒng)生理活動(dòng)的影響,本實(shí)驗(yàn)選取LKB1-AMPK-mTOR信號(hào)傳導(dǎo)通路中的關(guān)鍵蛋白LKB1及其轉(zhuǎn)錄因子為研究對(duì)象,闡明XFM及其頡頏劑對(duì)大鼠不同腦區(qū)LKB1基因和蛋白的影響,并從分子水平對(duì)XFM及其頡頏劑交互作用機(jī)制進(jìn)行探討,為進(jìn)一步研究LKB1-AMPK-mTOR信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)系統(tǒng)在中樞神經(jīng)系統(tǒng)中的作用奠定基礎(chǔ)。本實(shí)驗(yàn)將90只SD大鼠隨機(jī)分為XFM麻醉組(M組)、小型豬復(fù)合麻醉頡頏劑組(J組)、XFM與頡頏劑交互組(MJ組)。M組隨機(jī)分為5個(gè)亞組,分別為M1組(腹腔注射XFM 10 min后)、M2組(腹腔注射XFM 20 min后)、M3組(腹腔注射XFM 40 min后)、M4組(腹腔注射XFM 60 min后)、C1組(腹腔注射與M組等劑量的生理鹽水);J組隨機(jī)分為5個(gè)亞組,分別為J1組(腹腔注射頡頏劑10 min后)、J2組(腹腔注射頡頏劑20 min后)、J3組(腹腔注射頡頏劑40 min后)、J4組(腹腔注射頡頏劑60 min后)、C2組(腹腔注射與J組等劑量的生理鹽水);MJ組隨機(jī)分為4個(gè)亞組,分別為MJ1組(腹腔注射XFM10 min后再腹腔注射頡頏劑10 min后)、MJ2組(腹腔注射XFM 10 min后再腹腔注射頡頏劑20 min后)、MJ3組(腹腔注射XFM 10 min后再腹腔注射頡頏劑40 min后)、MJ4組(腹腔注射XFM 10 min后再腹腔注射頡頏劑60 min后)、C3組(分兩次腹腔注射與MJ組等劑量的生理鹽水)。以上每個(gè)亞組6只。各亞組大鼠到達(dá)預(yù)定時(shí)間點(diǎn)后斷頸處死,取腦,并分離大腦皮層、海馬、小腦、丘腦和腦干部位。采用RT-PCR方法檢測(cè)各腦區(qū)中LKB1m RNA的相對(duì)轉(zhuǎn)錄含量,用Western blot方法檢測(cè)各腦區(qū)中LKB1和磷酸化LKB1(pLKB1)蛋白的相對(duì)表達(dá)量。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明:(1)小型豬復(fù)合麻醉劑(XFM)能夠明顯升高大鼠腦內(nèi)大腦皮層、海馬、小腦、丘腦和腦干的LKB1 m RNA相對(duì)轉(zhuǎn)錄量、降低大腦皮層、小腦LKB1和p-LKB1蛋白的相對(duì)表達(dá)量,升高海馬、丘腦和腦干p-LKB1蛋白的相對(duì)表達(dá)量,這些可能是XFM產(chǎn)生麻醉作用的位點(diǎn)。(2)小型豬復(fù)合麻醉頡頏劑能夠降低大鼠腦內(nèi)大腦皮層、海馬、小腦、丘腦和腦干的LKB1 mRNA相對(duì)轉(zhuǎn)錄量、降低大腦皮層和小腦的LKB1和p-LKB1蛋白的相對(duì)表達(dá)量(3)小型豬復(fù)合麻醉頡頏劑催醒XFM麻醉的大鼠后,能夠有效完全的逆轉(zhuǎn)大鼠腦內(nèi)小腦和腦干的LKB1 mRNA相對(duì)轉(zhuǎn)錄量、LKB1和p-LKB1蛋白的相對(duì)表達(dá)量,部分逆轉(zhuǎn)丘腦內(nèi)的LKB1 m RNA相對(duì)轉(zhuǎn)錄量、LKB1和p-LKB1蛋白的相對(duì)表達(dá)量,這些可能是其發(fā)揮催醒作用的位點(diǎn)之一。綜上所述,小型豬復(fù)合麻醉劑(XFM)及其頡頏劑對(duì)大鼠部分腦區(qū)LKB1具有相反作用,這可能是它們產(chǎn)生麻醉和催醒作用的交互機(jī)制之一,但頡頏劑不能全部完全逆轉(zhuǎn)XFM對(duì)大鼠腦內(nèi)LKB1的作用,可能有其它相關(guān)機(jī)制產(chǎn)生作用,LKB1因子所作用的LKB1-AMPK-mTOR通路影響可能只是其中之一。
【關(guān)鍵詞】：小型豬 麻醉 XFM 頡頏劑 交互作用機(jī)制 LKB1
【學(xué)位授予單位】：東北農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：S859.7
【目錄】：

• 摘要8-10
• Abstract10-12
• 1 引言12-24
• 1.1 麻醉概述12-13
• 1.1.1 麻醉概念12
• 1.1.2 麻醉分類12
• 1.1.3 麻醉起源與發(fā)展12-13
• 1.2 全身麻醉概述13-17
• 1.2.1 藥物作用靶位研究13-14
• 1.2.2 全身麻醉機(jī)制研究進(jìn)展14-17
• 1.3 動(dòng)物麻醉概述17-20
• 1.3.1 動(dòng)物麻醉概念17
• 1.3.2 動(dòng)物麻醉分類17
• 1.3.3 動(dòng)物麻醉藥物相關(guān)研究進(jìn)展17-19
• 1.3.4 小型豬復(fù)合麻醉劑（XFM）與頡頏劑研究19-20
• 1.4 LKB1概述20-23
• 1.4.1 LKB1簡(jiǎn)介20
• 1.4.2 LKB1基因及蛋白功能20-21
• 1.4.3 LKB1研究進(jìn)展21-23
• 1.5 研究目的與意義23-24
• 2 實(shí)驗(yàn)材料與方法24-36
• 2.1 實(shí)驗(yàn)材料24-26
• 2.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物24
• 2.1.2 實(shí)驗(yàn)儀器24
• 2.1.3 實(shí)驗(yàn)試劑24-26
• 2.1.4 實(shí)驗(yàn)藥品26
• 2.2 實(shí)驗(yàn)方法26-34
• 2.2.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分組及處置26-27
• 2.2.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物樣品采集27
• 2.2.3 不同腦區(qū)LKB1mRNA含量的測(cè)定27-30
• 2.2.4 不同腦區(qū)LKB1和p-LKB1蛋白的測(cè)定30-34
• 2.3 數(shù)據(jù)處理與分析34-36
• 2.3.1 基因數(shù)據(jù)處理34
• 2.3.2 蛋白數(shù)據(jù)處理34-35
• 2.3.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析35-36
• 3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果36-53
• 3.1 XFM及其頡頏劑對(duì)大鼠不同腦區(qū)LKB1 MRNA含量的影響36-41
• 3.1.1 RNA濃度測(cè)定36
• 3.1.2 樣品總RNA完整性檢驗(yàn)36
• 3.1.3 RT-PCR檢測(cè)條件結(jié)果36-38
• 3.1.4 XFM對(duì)大鼠不同腦區(qū)LKB1 mRNA含量的影響38-39
• 3.1.5 小型豬復(fù)合麻醉頡頏劑對(duì)大鼠不同腦區(qū)LKB1 mRNA含量的影響39-40
• 3.1.6 XFM及其頡頏劑交互作用對(duì)大鼠不同腦區(qū)LKB1 mRNA含量的影響40-41
• 3.2 XFM及其頡頏劑對(duì)大鼠不同腦區(qū)LKB1和P-LKB1蛋白含量的影響41-53
• 3.2.1 Western blot方法檢測(cè)條件結(jié)果41-42
• 3.2.2 XFM對(duì)大鼠不同腦區(qū)LKB1蛋白含量的影響42-44
• 3.2.3 XFM對(duì)大鼠不同腦區(qū)p-LKB1蛋白含量的影響44
• 3.2.4 小型豬復(fù)合麻醉頡頏劑對(duì)大鼠不同腦區(qū)LKB1蛋白含量的影響44-46
• 3.2.5 小型豬復(fù)合麻醉頡頏劑對(duì)大鼠不同腦區(qū)p-LKB1蛋白含量的影響46-48
• 3.2.6 XFM及其頡頏劑交互作用對(duì)大鼠不同腦區(qū)LKB1蛋白含量的影響48-50
• 3.2.7 XFM及其頡頏劑交互作用對(duì)大鼠不同腦區(qū)p-LKB1蛋白含量的影響50-53
• 4 討論53-62
• 4.1 實(shí)驗(yàn)總體設(shè)計(jì)53-56
• 4.1.1 實(shí)驗(yàn)思路確立53-54
• 4.1.2 實(shí)驗(yàn)因素控制54
• 4.1.3 實(shí)驗(yàn)方法確立54-56
• 4.2 XFM及其頡頏劑與LKB1的關(guān)系56-59
• 4.2.1 XFM及其頡頏劑對(duì)LKB1 mRNA表達(dá)的影響56-57
• 4.2.2 XFM及其頡頏劑對(duì)LKB1蛋白表達(dá)的影響57-58
• 4.2.3 XFM及其頡頏劑對(duì)P-LKB1蛋白表達(dá)的影響58-59
• 4.3 全身麻醉與催醒過程中LKB1作用機(jī)制探討59-62
• 5 結(jié)論62-63
• 致謝63-64
• 參考文獻(xiàn)64-71
• 攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文71

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本文編號(hào)：993735