本文關(guān)鍵詞：小型豬復合麻醉劑及其頡頏劑對大鼠不同腦區(qū)LKB1影響的研究

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【摘要】：小型豬復合麻醉劑(XFM)及其頡頏劑具有效果確實、安全、副作用小及使用方便的特點,但其麻醉和催醒機理尚不完全清楚。隨著對于細胞信號通路的研究不斷深入,尋找明確的藥物作用靶位,探尋關(guān)鍵的作用機制一直是全麻機理和催醒機理研究的重點。而在中樞神經(jīng)系統(tǒng)里面存在著非常復雜的信號轉(zhuǎn)導網(wǎng)絡(luò),可謂紛繁復雜。其中,LKB1可以磷酸化諸多保守的下游激酶,就是一個很好的代表,AMPK家族屬于絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶,LKB1通過磷酸化AMPK而激活A(yù)MPK,負向調(diào)節(jié)mTOR的活性,即LKB1-AMPK-mTOR信號傳導通路。LKB1/AMPK/m TOR通路可在細胞增殖、生長、分化等過程中起著中心調(diào)控點的作用,在長時程調(diào)節(jié)(麻醉時間長短)及樹突的興奮性調(diào)節(jié)中,LKB1起到了重要作用,特別是參與局部蛋白質(zhì)的合成與神經(jīng)元可塑性密切相關(guān)。這可能就是全麻藥物及其頡頏劑在中樞神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)揮作用的關(guān)鍵靶位點和作用途徑之一。為準確地了解XFM及其頡頏劑對中樞高級神經(jīng)系統(tǒng)生理活動的影響,本實驗選取LKB1-AMPK-mTOR信號傳導通路中的關(guān)鍵蛋白LKB1及其轉(zhuǎn)錄因子為研究對象,闡明XFM及其頡頏劑對大鼠不同腦區(qū)LKB1基因和蛋白的影響,并從分子水平對XFM及其頡頏劑交互作用機制進行探討,為進一步研究LKB1-AMPK-mTOR信號轉(zhuǎn)導系統(tǒng)在中樞神經(jīng)系統(tǒng)中的作用奠定基礎(chǔ)。本實驗將90只SD大鼠隨機分為XFM麻醉組(M組)、小型豬復合麻醉頡頏劑組(J組)、XFM與頡頏劑交互組(MJ組)。M組隨機分為5個亞組,分別為M1組(腹腔注射XFM 10 min后)、M2組(腹腔注射XFM 20 min后)、M3組(腹腔注射XFM 40 min后)、M4組(腹腔注射XFM 60 min后)、C1組(腹腔注射與M組等劑量的生理鹽水);J組隨機分為5個亞組,分別為J1組(腹腔注射頡頏劑10 min后)、J2組(腹腔注射頡頏劑20 min后)、J3組(腹腔注射頡頏劑40 min后)、J4組(腹腔注射頡頏劑60 min后)、C2組(腹腔注射與J組等劑量的生理鹽水);MJ組隨機分為4個亞組,分別為MJ1組(腹腔注射XFM10 min后再腹腔注射頡頏劑10 min后)、MJ2組(腹腔注射XFM 10 min后再腹腔注射頡頏劑20 min后)、MJ3組(腹腔注射XFM 10 min后再腹腔注射頡頏劑40 min后)、MJ4組(腹腔注射XFM 10 min后再腹腔注射頡頏劑60 min后)、C3組(分兩次腹腔注射與MJ組等劑量的生理鹽水)。以上每個亞組6只。各亞組大鼠到達預(yù)定時間點后斷頸處死,取腦,并分離大腦皮層、海馬、小腦、丘腦和腦干部位。采用RT-PCR方法檢測各腦區(qū)中LKB1m RNA的相對轉(zhuǎn)錄含量,用Western blot方法檢測各腦區(qū)中LKB1和磷酸化LKB1(pLKB1)蛋白的相對表達量。實驗結(jié)果表明:(1)小型豬復合麻醉劑(XFM)能夠明顯升高大鼠腦內(nèi)大腦皮層、海馬、小腦、丘腦和腦干的LKB1 m RNA相對轉(zhuǎn)錄量、降低大腦皮層、小腦LKB1和p-LKB1蛋白的相對表達量,升高海馬、丘腦和腦干p-LKB1蛋白的相對表達量,這些可能是XFM產(chǎn)生麻醉作用的位點。(2)小型豬復合麻醉頡頏劑能夠降低大鼠腦內(nèi)大腦皮層、海馬、小腦、丘腦和腦干的LKB1 mRNA相對轉(zhuǎn)錄量、降低大腦皮層和小腦的LKB1和p-LKB1蛋白的相對表達量(3)小型豬復合麻醉頡頏劑催醒XFM麻醉的大鼠后,能夠有效完全的逆轉(zhuǎn)大鼠腦內(nèi)小腦和腦干的LKB1 mRNA相對轉(zhuǎn)錄量、LKB1和p-LKB1蛋白的相對表達量,部分逆轉(zhuǎn)丘腦內(nèi)的LKB1 m RNA相對轉(zhuǎn)錄量、LKB1和p-LKB1蛋白的相對表達量,這些可能是其發(fā)揮催醒作用的位點之一。綜上所述,小型豬復合麻醉劑(XFM)及其頡頏劑對大鼠部分腦區(qū)LKB1具有相反作用,這可能是它們產(chǎn)生麻醉和催醒作用的交互機制之一,但頡頏劑不能全部完全逆轉(zhuǎn)XFM對大鼠腦內(nèi)LKB1的作用,可能有其它相關(guān)機制產(chǎn)生作用,LKB1因子所作用的LKB1-AMPK-mTOR通路影響可能只是其中之一。
【關(guān)鍵詞】：小型豬 麻醉 XFM 頡頏劑 交互作用機制 LKB1
【學位授予單位】：東北農(nóng)業(yè)大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：S859.7
【目錄】：

• 摘要8-10
• Abstract10-12
• 1 引言12-24
• 1.1 麻醉概述12-13
• 1.1.1 麻醉概念12
• 1.1.2 麻醉分類12
• 1.1.3 麻醉起源與發(fā)展12-13
• 1.2 全身麻醉概述13-17
• 1.2.1 藥物作用靶位研究13-14
• 1.2.2 全身麻醉機制研究進展14-17
• 1.3 動物麻醉概述17-20
• 1.3.1 動物麻醉概念17
• 1.3.2 動物麻醉分類17
• 1.3.3 動物麻醉藥物相關(guān)研究進展17-19
• 1.3.4 小型豬復合麻醉劑（XFM）與頡頏劑研究19-20
• 1.4 LKB1概述20-23
• 1.4.1 LKB1簡介20
• 1.4.2 LKB1基因及蛋白功能20-21
• 1.4.3 LKB1研究進展21-23
• 1.5 研究目的與意義23-24
• 2 實驗材料與方法24-36
• 2.1 實驗材料24-26
• 2.1.1 實驗動物24
• 2.1.2 實驗儀器24
• 2.1.3 實驗試劑24-26
• 2.1.4 實驗藥品26
• 2.2 實驗方法26-34
• 2.2.1 實驗動物分組及處置26-27
• 2.2.2 實驗動物樣品采集27
• 2.2.3 不同腦區(qū)LKB1mRNA含量的測定27-30
• 2.2.4 不同腦區(qū)LKB1和p-LKB1蛋白的測定30-34
• 2.3 數(shù)據(jù)處理與分析34-36
• 2.3.1 基因數(shù)據(jù)處理34
• 2.3.2 蛋白數(shù)據(jù)處理34-35
• 2.3.3 統(tǒng)計學分析35-36
• 3 實驗結(jié)果36-53
• 3.1 XFM及其頡頏劑對大鼠不同腦區(qū)LKB1 MRNA含量的影響36-41
• 3.1.1 RNA濃度測定36
• 3.1.2 樣品總RNA完整性檢驗36
• 3.1.3 RT-PCR檢測條件結(jié)果36-38
• 3.1.4 XFM對大鼠不同腦區(qū)LKB1 mRNA含量的影響38-39
• 3.1.5 小型豬復合麻醉頡頏劑對大鼠不同腦區(qū)LKB1 mRNA含量的影響39-40
• 3.1.6 XFM及其頡頏劑交互作用對大鼠不同腦區(qū)LKB1 mRNA含量的影響40-41
• 3.2 XFM及其頡頏劑對大鼠不同腦區(qū)LKB1和P-LKB1蛋白含量的影響41-53
• 3.2.1 Western blot方法檢測條件結(jié)果41-42
• 3.2.2 XFM對大鼠不同腦區(qū)LKB1蛋白含量的影響42-44
• 3.2.3 XFM對大鼠不同腦區(qū)p-LKB1蛋白含量的影響44
• 3.2.4 小型豬復合麻醉頡頏劑對大鼠不同腦區(qū)LKB1蛋白含量的影響44-46
• 3.2.5 小型豬復合麻醉頡頏劑對大鼠不同腦區(qū)p-LKB1蛋白含量的影響46-48
• 3.2.6 XFM及其頡頏劑交互作用對大鼠不同腦區(qū)LKB1蛋白含量的影響48-50
• 3.2.7 XFM及其頡頏劑交互作用對大鼠不同腦區(qū)p-LKB1蛋白含量的影響50-53
• 4 討論53-62
• 4.1 實驗總體設(shè)計53-56
• 4.1.1 實驗思路確立53-54
• 4.1.2 實驗因素控制54
• 4.1.3 實驗方法確立54-56
• 4.2 XFM及其頡頏劑與LKB1的關(guān)系56-59
• 4.2.1 XFM及其頡頏劑對LKB1 mRNA表達的影響56-57
• 4.2.2 XFM及其頡頏劑對LKB1蛋白表達的影響57-58
• 4.2.3 XFM及其頡頏劑對P-LKB1蛋白表達的影響58-59
• 4.3 全身麻醉與催醒過程中LKB1作用機制探討59-62
• 5 結(jié)論62-63
• 致謝63-64
• 參考文獻64-71
• 攻讀碩士學位期間發(fā)表的學術(shù)論文71

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本文編號：993735