本文關(guān)鍵詞：促紅細(xì)胞生成素對(duì)心肌梗死后小鼠心臟結(jié)構(gòu)和功能的影響

  更多相關(guān)文章： EPO 心肌梗死 心室肌細(xì)胞 纖維化 心臟功能 細(xì)胞凋亡

【摘要】：背景:心肌梗死(Myocardial Infarction,MI)是一類由于心肌長(zhǎng)時(shí)間缺血缺氧,最終導(dǎo)致心肌損傷甚至壞死的一類疾病。到2020年,全球心血管病的死亡率將增加50%,其中MI將位于死因榜的首位,MI已給全球醫(yī)療帶來(lái)了沉重的負(fù)擔(dān)。隨著各種醫(yī)療技術(shù)的應(yīng)用,目前MI急性期的死亡率已明顯下降。但是MI后,大量缺血壞死心臟細(xì)胞會(huì)被纖維組織所取代形成瘢痕,直接影響心臟的舒縮功能,最終導(dǎo)致心力衰竭的發(fā)生。目前藥物治療、介入治療以及外科冠狀動(dòng)脈旁路搭橋術(shù)也只能恢復(fù)局部心肌血液供應(yīng),延緩不利的心肌重塑,而不能從根本上解決心肌梗死后心肌數(shù)目減少、心功能進(jìn)行性下降這一根本問(wèn)題。因此,針對(duì)性防治各類心肌細(xì)胞死亡或促進(jìn)心肌細(xì)胞再生,一直是MI治療領(lǐng)域的熱點(diǎn)問(wèn)題。促紅細(xì)胞生成素(Erythropoietin,EPO)是由腎臟分泌的一類糖蛋白類激素,臨床上已經(jīng)將它廣泛用于貧血的治療,現(xiàn)在已逐步發(fā)現(xiàn)它在心血管系統(tǒng)的獨(dú)特作用:它具有抗凋亡、抗炎、抗氧化、促干細(xì)胞遷移、增殖、分化和促進(jìn)血管生成的作用,因此,我們推測(cè):EPO在一定程度上可能對(duì)于損傷心肌具有保護(hù)作用。但有研究表明,其全身用藥會(huì)帶來(lái)許多副作用,如:發(fā)熱、腹瀉、嘔吐、氣喘和上呼吸道感染,甚至?xí)霈F(xiàn)高血壓、癲癇和血栓等。因此,如何選擇EPO的給藥方式至關(guān)重要。綜上所述,為深入觀察EPO對(duì)梗死后心臟的治療作用,我們建立了小鼠心肌梗死模型,并于術(shù)后3天給予EPO心肌注射治療,隨后動(dòng)態(tài)檢測(cè)了術(shù)后1周、2周、4周的心臟結(jié)構(gòu)和功能的變化情況及心肌細(xì)胞凋亡的動(dòng)態(tài)變化規(guī)律。通過(guò)以上研究,以期發(fā)現(xiàn)EPO對(duì)MI的療效,為臨床治療MI提供新的思路和方法。目的:(1)建立成年小鼠心肌細(xì)胞分離的有效方法;(2)觀察EPO對(duì)心梗后心臟結(jié)構(gòu)和功能,以及心肌細(xì)胞凋亡的動(dòng)態(tài)影響。方法:(1)改良成年小鼠心室肌細(xì)胞(Adult Mouse Ventricular Cardiomyoctyes,AVCMS)分離方法。使用本實(shí)驗(yàn)獨(dú)創(chuàng)的手術(shù)方法,給未成年雄性C57小鼠心臟行在體冠脈逆行插管,經(jīng)Langendorff灌流沖洗干凈心臟,膠原酶液充分酶解消化心臟,將其撕碎并吹打成細(xì)胞懸浮液后,置于細(xì)胞培養(yǎng)液中進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。與經(jīng)典離體插管分離方法對(duì)比了插管時(shí)間,細(xì)胞成活率和細(xì)胞收獲量。(2)新式小鼠AMI模型建造方法。麻醉小鼠后,仰臥位固定,于左胸前壁剪一微型斜切口,鈍性分離肌肉,將心臟擠壓至胸腔外,結(jié)扎冠狀動(dòng)脈左主降支,見(jiàn)心尖處變灰白后,迅速將心臟復(fù)位,擠出胸腔中的氣體,荷包縫合術(shù)閉合肌肉和皮膚。偽手術(shù)組是在冠狀動(dòng)脈下方穿過(guò)手術(shù)線而不結(jié)扎。(3)心肌內(nèi)注射EPO或PBS。確定建模成功的小鼠,MI術(shù)后三天,再次打開胸腔,暴露心臟,在心臟缺血區(qū)的邊緣3點(diǎn)注射20 ul EPO或PBS。實(shí)驗(yàn)小鼠分為五組:偽手術(shù)組、sham+EPO組、sham+PBS組、MI+EPO組和MI+PBS組,分別于手術(shù)后7天、14天、28天,用天平稱重法、TTC染色、Masson染色和小動(dòng)物超聲觀察心臟的重量、心梗面積、心肌纖維化程度和心功能的動(dòng)態(tài)變化。(4)觀察EPO對(duì)心肌細(xì)胞凋亡的影響。MI手術(shù)后7天取心室肌組織制備石蠟切片,通過(guò)TUNEL染色來(lái)對(duì)比兩組心肌細(xì)胞凋亡的動(dòng)態(tài)變化。結(jié)果:(1)AVCMS的分離:急性分離小鼠心室肌細(xì)胞,呈長(zhǎng)桿狀,條紋清晰,快速在體主動(dòng)脈插管基礎(chǔ)上,每只小鼠可以獲得6.1±0.27×106個(gè)AVCMS,且培養(yǎng)24h后細(xì)胞的成活率為58.4±10.92%。(2)EPO對(duì)心梗后心臟結(jié)構(gòu)和功能的影響:MI+EPO組較對(duì)照MI+PBS組,在術(shù)后1、2、4周,小鼠存活率高,心梗面積明顯縮小;心肌纖維化程度較低,且心臟功能均優(yōu)于對(duì)照組。(3)EPO對(duì)心梗心肌細(xì)胞凋亡的動(dòng)態(tài)影響:在MI術(shù)后1周,通過(guò)TUNEL染色發(fā)現(xiàn),EPO能顯著降低細(xì)胞的凋亡率。結(jié)論:(1)在體分離成年小鼠心室肌細(xì)胞法較離體法,用時(shí)較短、細(xì)胞收獲量更多、細(xì)胞存活率更高。(2)EPO能夠明顯改善心肌梗死后心臟的結(jié)構(gòu)和功能,同時(shí)能夠降低心肌細(xì)胞凋亡率。
【關(guān)鍵詞】：EPO 心肌梗死 心室肌細(xì)胞 纖維化 心臟功能 細(xì)胞凋亡
【學(xué)位授予單位】：山西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R542.22
【目錄】：

• 中文摘要6-9
• 英文摘要9-12
• 第一部分 改良成年小鼠心室肌細(xì)胞分離方法12-23
• 前言12-13
• 1 材料與方法13-18
• 1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物13
• 1.2 主要試劑和儀器13-14
• 1.3 實(shí)驗(yàn)方法14-18
• 2 結(jié)果18-20
• 2.1 在體插管法的平均插管時(shí)間明顯短于離體插管法18
• 2.2 在體插管法的平均細(xì)胞收獲量明顯高于在體插管法18
• 2.3 在體插管法分離的心室肌細(xì)胞存活率明顯高于離體插管法18-20
• 3 討論20-22
• 4 結(jié)論22-23
• 第二部分 EPO對(duì)心梗后心臟結(jié)構(gòu)和功能的動(dòng)態(tài)影響23-45
• 前言23
• 1 材料與方法23-32
• 1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物23-24
• 1.2 主要試劑和儀器24-25
• 1.3 實(shí)驗(yàn)方法25-32
• 2 結(jié)果32-39
• 2.1 AMI的建模標(biāo)準(zhǔn)32-33
• 2.2 心臟功能檢測(cè)33-36
• 2.3 MI后心臟的結(jié)構(gòu)改變36-37
• 2.4 細(xì)胞凋亡情況37-39
• 3 討論39-44
• 4 結(jié)論44-45
• 參考文獻(xiàn)45-55
• 綜述55-72
• 參考文獻(xiàn)67-72
• 附表72-76
• 致謝76-78
• 在學(xué)期間承擔(dān)/參與的科研課題與研究成果78-79
• 個(gè)人簡(jiǎn)歷79

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