本文關(guān)鍵詞：黃芩苷對糖尿病腎病大鼠腎臟縫隙連接蛋白43磷酸化的影響

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【摘要】：目的糖尿病腎病(Diabetic Nephropathy,DN)是糖尿病最常見和最嚴(yán)重并發(fā)癥之一,其發(fā)病機(jī)制復(fù)雜。本實驗通過研究黃芩苷對DN大鼠腎臟縫隙連接蛋白43磷酸化(p-Cx43)介導(dǎo)的縫隙連接(GJ)通訊功能影響,來探討GJ通訊在DN發(fā)生發(fā)展中的作用機(jī)制,為中醫(yī)藥防治DN開辟新道路。方法(1)動物實驗,在SPF環(huán)境下,飼養(yǎng)雄性SD大鼠70只,周齡8w,體重約180-220g。所有動物先適應(yīng)飼養(yǎng)兩天,接著隨機(jī)分10只為正常組和60只為DN造模組。正常大鼠給與普通飼料飼養(yǎng),造模大鼠給與高脂飼料飼養(yǎng)。一個月后,造模大鼠給與單次腹腔注射1%鏈脲佐菌素(Streptozotocin,STZ),注射量按35mg/kg計算,同時,正常大鼠腹腔注射按此計量折算出的濃度為0.1mol/L枸櫞酸-枸櫞酸鈉緩沖液,注射前全部大鼠均禁食不禁水12h。5-7天后,采取剪尾取血法來測隨機(jī)血糖,測得隨機(jī)血糖值≥16.7 mmol/L,則糖尿病(DM)大鼠造模成功。此后,所有大鼠繼續(xù)給與普通飼料飼養(yǎng),8周后,若DM大鼠隨機(jī)血糖≥16.7 mmol/L,尿蛋白出現(xiàn)陽性,24h尿量大于正常組的50%,則診斷糖尿病腎病模型(Diabetic Nephropathy,DN)成功。將DN大鼠分成模型組、黃芩苷組和依那普利組,并分別以蒸餾水2ml/kg/d,黃芩苷0.16g/kg/d,依那普利1.05mg/kg/d進(jìn)行灌胃,6周末,所有大鼠稱重測血糖,麻醉后斷頭處死,取出雙腎,剔除包膜,左腎放入10%中性甲醛液中固定,病理HE常規(guī)法觀察腎臟病理改變,免疫組化法檢測蛋白激酶C(protein kinase C,PKC)與縫隙連接蛋白43磷酸化(p-Cx43)表達(dá),右腎放到液氮中速凍后-80℃保存,用Western blot法檢測Cx43的磷酸化表達(dá)。(2)在細(xì)胞水平,采用低糖濃度(5.5mmol/L,LG),高糖濃度(25mmol/L, HG),高糖+黃芩苷(100μmol/L),高糖+依那普利(100μmol/L),分別和HK-2共同培養(yǎng),并觀察24h、48h、72h三個不同時間點細(xì)胞的增殖變化,運(yùn)用MTT法檢測各組HK-2的生長狀況。結(jié)果(1)血糖值給藥前,所有DM大鼠血糖都明顯高于正常大鼠,比較差異,有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。給藥后,黃芩苷組、依那普利組血糖值較模型組降低,比較差異,有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。且黃芩苷較依那普利降糖更明顯。(2)腎指數(shù)治療后,模型組、黃芩苷組和依那普利組三組大鼠腎指數(shù)均比正常組高,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。同時,黃芩苷組和依那普利組腎指數(shù)比模型組均低,比較差異,無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05),且黃芩苷組較依那普利組略低。(3)腎臟病理觀察治療后,模型組、黃芩苷組和依那普利組大鼠腎小球體積增大,腎系膜細(xì)胞有增生,腎小管上皮細(xì)胞水腫,與正常組有明顯區(qū)別。同時,黃芩苷組與模型組比較,腎臟病變減輕,且治療效果優(yōu)于依那普利組。(4)腎臟PKC表達(dá)正常組腎小管上皮細(xì)胞膜未見PKC表達(dá)。模型組腎小管上皮細(xì)胞膜可見PKC棕黃色顆粒,為強(qiáng)陽性表達(dá)。黃芩苷組和依那普利組較模型組PKC棕黃色顆粒數(shù)量明顯減少,著色程度減輕,為中度陽性表達(dá)。且黃芩苷組較依那普利組PKC陽性表達(dá)更低。(5)腎臟p-Cx43表達(dá)正常組腎小管上皮細(xì)胞膜可見p-Cx43弱陽性表達(dá)。模型組腎小管上皮細(xì)胞膜可見p-Cx43棕褐色顆粒,為強(qiáng)陽性表達(dá)。黃芩苷組和依那普利組較模型組p-Cx43棕褐色顆粒數(shù)量明顯減少,著色程度減輕,為中度陽性表達(dá)。且黃芩苷組p-Cx43陽性表達(dá)較依那普利組減弱。另外,腎臟p-Cx43蛋白表達(dá)的結(jié)果也同腎小管上p-Cx43陽性表達(dá)的趨勢一致。(6)平均增殖率分別測定HK-2在24h,48h,72h的生長情況,發(fā)現(xiàn)高糖環(huán)境下HK-2細(xì)胞生長呈雙重效應(yīng),高糖干預(yù)24h,細(xì)胞增殖增加；高糖干預(yù)48-72h,細(xì)胞明顯受到抑制,抑制率和時間成正比。黃芩苷干預(yù)后,隨著時間增加,細(xì)胞呈時間依賴性出現(xiàn)增殖現(xiàn)象,與模型組比較有統(tǒng)計學(xué)差異(P0.05),且增殖效果優(yōu)于依那普利組。結(jié)論黃芩苷對高糖環(huán)境下糖尿病腎臟有改善作用。在動物水平,黃芩苷能減輕DN大鼠腎臟結(jié)構(gòu)和功能損傷,并能改善腎臟縫隙連接通訊功能,其機(jī)制可能與其下調(diào)DN大鼠腎組織PKC和p-Cx43表達(dá)相關(guān)；在細(xì)胞水平,高糖能誘導(dǎo)HK-2生長受到抑制,黃芩苷可以促進(jìn)高糖環(huán)境下HK-2的增殖,且呈時間依賴性。
【關(guān)鍵詞】：黃芩苷 糖尿病腎病 蛋白激酶C 縫隙連接蛋白43磷酸化
【學(xué)位授予單位】：廣州中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R285.5
【目錄】：

• 摘要3-5
• Abstract5-10
• 引言10-11
• 第一章 研究背景11-18
• 第一節(jié) 傳統(tǒng)中醫(yī)對糖尿病腎病病因病機(jī)研究11-12
• 一、DN的病名研究11
• 二、DN的病因病機(jī)研究11-12
• 第二節(jié) 現(xiàn)代醫(yī)學(xué)對糖尿病腎病發(fā)病機(jī)制探究12-13
• 第三節(jié) 縫隙連接蛋白43與DN關(guān)系13-15
• 一、Cx43的結(jié)構(gòu)和功能13-14
• 二、Cx43與DN關(guān)系14-15
• 第四節(jié) 糖尿病腎病治療現(xiàn)狀研究15-18
• 一、西醫(yī)治療DN研究現(xiàn)狀15-16
• 二、中醫(yī)治療DN研究現(xiàn)狀16
• 三、黃芩苷對DN療效研究16-18
• 第二章 實驗方法18-42
• 第一節(jié) 黃芩苷改善大鼠糖尿病腎病藥效學(xué)研究18-27
• 一、材料與儀器18-19
• 二、實驗方法19-20
• 三、結(jié)果20-22
• 四、討論22-27
• 第二節(jié) 黃芩苷改善大鼠糖尿病腎病相關(guān)機(jī)制研究27-35
• 一、材料與儀器27-28
• 二、實驗方法28-31
• 三、結(jié)果31-32
• 四、討論32-35
• 第三節(jié) 黃芩苷對高糖環(huán)境下人腎小管上皮細(xì)胞(HK-2)的增殖影響35-42
• 一、材料與儀器35-36
• 二、實驗方法36-39
• 三、結(jié)果39
• 四、討論39-42
• 結(jié)語42-43
• 一、實驗結(jié)論42
• 二、實驗意義42
• 三、存在不足42-43
• 參考文獻(xiàn)43-50
• 附錄50-57
• 附錄1：論文中使用的縮略語50-52
• 附錄2：腎臟HE病理檢測及免疫組化檢測52-57
• 在校期間發(fā)表論文情況57-58
• 致謝58

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 王晶晶;陳江華;;DAG/PKC信號通路和糖尿病腎病[J];國際泌尿系統(tǒng)雜志;2006年06期

2 林銳珊;趙平;吳紹鋒;羅海燕;伍趣京;蘇寧;;黃芩苷對高糖環(huán)境下腎小球系膜細(xì)胞縫隙連接蛋白43表達(dá)的影響[J];安徽中醫(yī)學(xué)院學(xué)報;2013年06期

3 鄭國靜,常瑜,程益春;糖尿病腎病的中醫(yī)治療思路和方法[J];湖北中醫(yī)雜志;2004年01期

4 劉海霞;郭明好;劉云;朱永俊;劉向東;許清玉;譚靜;;黃芩苷對人腎小管上皮細(xì)胞轉(zhuǎn)分化的影響[J];中國中西醫(yī)結(jié)合腎病雜志;2011年10期

5 韓喻美，，晏金平;黃芩甙類對海人酸所致神經(jīng)毒性的抑制效應(yīng)[J];江西醫(yī)學(xué)院學(xué)報;1995年01期

6 張玉領(lǐng);孫長顥;;2型糖尿病動物模型的研究進(jìn)展[J];實用糖尿病雜志;2011年04期

7 冷冬;;MTT法簡介及在獸醫(yī)臨床上的應(yīng)用展望[J];現(xiàn)代畜牧獸醫(yī);2012年04期

8 徐維佳;牟姍;王琴;施蓓莉;顧樂怡;倪兆慧;;黃芪甲苷對高糖誘導(dǎo)的腎小管上皮細(xì)胞損傷的保護(hù)作用[J];中國中西醫(yī)結(jié)合腎病雜志;2012年09期

9 朱海峰;;自擬方中藥保留灌腸治療糖尿病腎�、羝诏熜в^察[J];海峽藥學(xué);2014年11期

10 尚媛媛;馬克濤;李麗;司軍強(qiáng);;縫隙連接與糖尿病[J];現(xiàn)代生物醫(yī)學(xué)進(jìn)展;2010年22期

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 趙平;黃芩苷下調(diào)NF-κB表達(dá)抑制高糖環(huán)境下腎小球系膜細(xì)胞增殖的研究[D];廣州中醫(yī)藥大學(xué);2012年

2 聶琳;高糖、AngⅡ?qū)π∈笞慵?xì)胞凋亡及PKC活性、nephrin、CD2AP表達(dá)的影響[D];山西醫(yī)科大學(xué);2012年

本文編號：937350