本文關(guān)鍵詞：SHP2抑制劑PHPS1對動脈粥樣硬化的保護作用及機制研究

  更多相關(guān)文章： 動脈粥樣硬化 SHP2 PHPS1 IL-1β P-ERK

【摘要】：心血管疾病由于發(fā)病人數(shù)多并且逐漸年輕化,危險因素廣泛,病程時間長,并發(fā)癥多,縮短人類的壽命和降低人民生活質(zhì)量。動脈粥樣硬化(Atherosclerosis,AS)是導致心血管疾病的主要病理學基礎(chǔ)。在AS形成發(fā)展過程中,血管內(nèi)皮細胞損傷、泡沫細胞沉積、血管平滑肌細胞(Vascular smooth muscle cells,VSMC)增殖和血管局部的炎癥反應(yīng)等是AS疾病發(fā)生發(fā)展的關(guān)鍵病理環(huán)節(jié)。蛋白酪氨酸磷酸酶N11(protein tyrosine phosphatase N 11,SHP2)是蛋白酪氨酸磷酸酶(protein tyrosine phosphatase,PTP)的其中一種,表達于機體的各種組織和細胞,能夠催化酪氨酸去磷酸化。SHP2參與多條重要信號通路,處于多條信號通路的交匯處,具有傳導信號和起到中間媒介的作用,能夠直接或間接地指導細胞生長分化等生命活動。PHPS1(phenylhydrazonopyrazolone sulfonate1)是一種具有細胞滲透性的SHP2抑制劑,能夠有效抑制SHP2磷酸化并阻斷其參與的細胞活動和疾病進程。PHPS1對AS的影響及其相關(guān)機制目前尚未有研究。PHPS1在高脂飲食誘導的動脈粥樣硬化小鼠模型中有何作用,它能否降低AS的發(fā)病率和減慢病程的進展?其作用機制是通過影響脂質(zhì)代謝,或是抑制炎癥反應(yīng),再或者是減少VSMC的增殖?SHP2在AS的發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮什么作用?這些都是本實驗所要解決的研究內(nèi)容。研究目的:1.通過建立高脂誘導的動脈粥樣硬化小鼠模型,探討PHPS1對動脈粥樣硬化發(fā)生發(fā)展的作用,以及對動脈粥樣硬化的炎癥反應(yīng)和血管平滑肌細胞增殖的影響。2.探討SHP2在ox LDL刺激血管平滑肌細胞增殖中的作用,并檢測SHP2抑制劑PHPS1是否可抑制SHP2所誘導的細胞增殖。3.初步探討PHPS1抑制SHP2介導的血管平滑肌細胞增殖的信號轉(zhuǎn)導途徑。通過研究SHP2和PHPS1在AS的發(fā)生發(fā)展中的作用及闡述這種作用的具體機制,為AS的發(fā)病機制提供一種新的理論,將SHP2作為治療靶點,為臨床上AS患者的治療提供新思路。研究方法:體內(nèi)實驗:30只Ldlr-/-小鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)一周后,按體重大小隨機分為三組:動脈粥樣硬化組(AS組)、動脈粥樣硬化+抑制劑組(AS+PHPS1組)、動脈粥樣硬化+溶劑組(AS+Vehicle組)。高脂飲食(含1.25%膽固醇)喂養(yǎng),持續(xù)4周。1.生命體征、體重、血糖:每天觀察小鼠毛發(fā)、飲食排便及活動度,每周監(jiān)測小鼠體重,檢測隨機血糖。2.血脂:4周后取血,離取上清。測定TG、TC、HDL-C、LDL-C的水平。3.斑塊面積評價:戊巴比妥鈉麻醉小鼠,顯微鏡下觀察主動脈根部斑塊形成情況。分離出心臟和主動脈。部分主動脈進行大體油紅O染色。部分主動脈檢測細胞因子、蛋白表達水平。石蠟切片觀察主動脈起始處斑塊病理形態(tài)學,分別采用Movat染色、免疫組化、天狼星紅染色分析AS中斑塊、平滑肌細胞、膠原的比例。4.RT-PCR:抽提小鼠心臟總RNA,檢測主動脈血管中IL-1β、IL-6、IL-10、TNF-α、TGF-β等細胞因子的m RNA水平。5.Western blot:小鼠心臟勻漿后,抽提總蛋白,檢測SHP2主要信號通路中各蛋白磷酸化水平的改變。體外實驗:1.分離培養(yǎng)小鼠主動脈血管平滑肌細胞,ox LDL刺激刺激后Western blot檢測SHP2蛋白表達水平。2.Brd U實驗檢測SHP2介導血管平滑肌細胞的增殖以及PHPS1的抑制作用。3.采用Western blot技術(shù),檢測SHP2與ERK信號轉(zhuǎn)導通路的相關(guān)性,以及PHPS1抑制SHP2后對ERK通路激活的影響。研究結(jié)果:體內(nèi)實驗:顯微鏡下三組小鼠均可見內(nèi)膜明顯增厚,管腔狹窄,粥樣斑塊形成。斑塊表層有大小不等纖維帽,部分可見破裂。纖維帽內(nèi)可見脂質(zhì)沉積,大量泡沫細胞及壞死組織,說明成功建立Ldlr-/-小鼠動脈粥樣硬化模型。1.各組小鼠生長正常,毛發(fā)濃密,色澤黝黑,無出現(xiàn)脫毛、皮膚炎癥,飲食及分泌物正常。體重、血糖、血脂水平差異無統(tǒng)計學意義。2.AS+PHPS1組較AS組和AS+Vehicle組斑塊面積減小。3.RT-PCR結(jié)果顯示,PHPS1能夠降低IL-1β的表達水平。蛋白檢測結(jié)果顯示,應(yīng)用PHPS1后,P-ERK表達水平下降,總ERK的蛋白表達水平不變。體外實驗:1.ox LDL可激活小鼠主動脈平滑肌細胞的SHP2/ERK信號通路促進平滑肌細胞增殖。2.PHPS1可有效的抑制SHP2介導的平滑肌細胞的增殖;3.PHPS1能夠抑制SHP2磷酸化水平和減降低P-ERK的表達水平。研究結(jié)論:1.PHPS1可在一定程度上減輕冠狀動脈粥樣硬化的形成和延緩病程進展。2.PHPS1不影響動脈粥樣硬化小鼠的體重、血糖、血脂。通過降低細胞因子IL-1β的表達水平減輕炎癥反應(yīng)。3.PHPS1能夠通過降低信號通路中P-ERK的表達水平,從而抑制血管平滑肌細胞細胞的增殖。4.SHP2介導血管平滑肌細胞增殖與ERK通路級聯(lián)活化相關(guān)5.PHPS1在體外可抑制由SHP2介導的血管平滑肌細胞的增殖。6.PHPS1可以降低SHP2介導的ERK的磷酸化水平而抑制血管平滑肌細胞的增殖。
【關(guān)鍵詞】：動脈粥樣硬化 SHP2 PHPS1 IL-1β P-ERK
【學位授予單位】：第二軍醫(yī)大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R543.5
【目錄】：

• 摘要5-8
• Abstract8-10
• 縮略詞表10-11
• 前言11-13
• 第一部分 SHP2抑制劑PHPS1干預小鼠動脈粥樣硬化的研究13-31
• 前言13-14
• 一、試劑和材料14-17
• 二、實驗方法17-21
• 三、實驗結(jié)果21-27
• 四、討論27-30
• 五、小結(jié)30-31
• 第二部分 探討SHP2抑制劑PHPS1對血管平滑肌細胞增殖作用及分子機制31-41
• 前言31-32
• 一、試劑和材料32-33
• 二、實驗方法33-34
• 三、實驗結(jié)果34-38
• 四、討論38-40
• 五、小結(jié)40-41
• 綜述41-47
• 一、炎性反應(yīng)與動脈粥樣硬化的形成41-43
• 二、炎性反應(yīng)的觸發(fā)43-44
• 三、炎癥反應(yīng)與疾病44-46
• 四、炎癥反應(yīng)標記物與心血管事件的預防46-47
• 結(jié)語47-49
• 參考文獻49-60
• 在讀期間發(fā)表論文及獲獎情況60-61
• 致謝61-62

【共引文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前8條

1 田峰;陳韻岱;王晶;張_";楊俊杰;;光學相干斷層成像技術(shù)評價動脈粥樣硬化斑塊纖維帽的結(jié)構(gòu)特征[J];中國動脈硬化雜志;2013年09期

2 潘玉婷;郭春雨;馬曉娟;劉欣;孫明月;殷惠軍;;氧化低密度脂蛋白損傷血管內(nèi)皮細胞的機制及雌激素保護作用[J];中華老年心腦血管病雜志;2014年02期

3 王正斌;邱春光;黃振文;韓戰(zhàn)營;孫國舉;;阿托伐他汀對不穩(wěn)定型心絞痛PCI術(shù)后患者MMP-9和TIMP-1的影響[J];河南職工醫(yī)學院學報;2014年03期

4 趙國玉;耿學斌;李莉;趙碧瓊;田美榮;;血脂康預防急性心肌梗死冠脈支架置入術(shù)后冠脈再狹窄療效及安全性評價[J];河北聯(lián)合大學學報(醫(yī)學版);2015年04期

5 王健;王蕾;盧惠茹;;老年血脂異常與Klotho蛋白的相關(guān)性研究[J];中華老年心腦血管病雜志;2015年10期

6 司權(quán);孫躍民;;胰島素樣生長因子1與原發(fā)性高血壓關(guān)系的研究進展[J];天津醫(yī)科大學學報;2013年06期

7 尉紅巖;;丹參酮ⅡA磺酸鈉聯(lián)合辛伐他汀治療不穩(wěn)定型心絞痛療效觀察[J];山東醫(yī)藥;2014年13期

8 范春暉;孫書珍;;辛伐他汀對哮喘急性發(fā)作患者血清轉(zhuǎn)化生長因子β1和白介素17水平的影響研究[J];實用心腦肺血管病雜志;2015年05期

中國博士學位論文全文數(shù)據(jù)庫 前8條

1 王雨;褪黑素對大鼠血糖、血脂代謝和動脈粥樣硬化相關(guān)因素影響及機制研究[D];北京協(xié)和醫(yī)學院;2013年

2 王健仰;高敏C反應(yīng)蛋白對冠狀動脈搭橋手術(shù)近期和中期預后的預測作用[D];北京協(xié)和醫(yī)學院;2010年

3 劉宏;EMMPRIN單克隆抗體抑制ApoE缺陷小鼠動脈粥樣硬化的實驗研究[D];第三軍醫(yī)大學;2013年

4 陳炳偉;Th17細胞相關(guān)炎癥因子與冠心病及動脈硬化關(guān)系的研究[D];北京協(xié)和醫(yī)學院;2014年

5 劉昱;Toll樣受體2(TLR2)在系統(tǒng)性紅斑狼瘡發(fā)病機制中的作用及其分子機制[D];中南大學;2014年

6 謝曉柳;冠狀動脈粥樣硬化與舌底脈絡(luò)的相關(guān)性及中醫(yī)藥干預研究[D];新疆醫(yī)科大學;2013年

7 胡昕嬰;瑞舒伐他汀促大鼠急性心梗后心肌組織修復的實驗研究[D];復旦大學;2011年

8 馬懿;阿托伐他汀對大鼠主動脈自然衰老的干預作用及機制探討[D];南方醫(yī)科大學;2015年

中國碩士學位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 郭小易;關(guān)于他汀序貫治療對中國PCI患者預后的影響的薈萃分析[D];山東大學;2013年

2 高聰慧;擇期經(jīng)皮冠狀動脈介入術(shù)前單次、負荷量氟伐他汀鈉緩釋片對圍手術(shù)期心肌損傷的影響[D];河北醫(yī)科大學;2013年

3 衣洋;阿托伐他汀預處理對SD大鼠局部腦缺血再灌注損傷后IL-6、IL-1β、c-fos表達的影響[D];大連醫(yī)科大學;2012年

4 吳清華;不同劑量阿托伐他汀對急性心肌梗死患者PCI圍術(shù)期血清高遷移率組蛋白B1的作用[D];天津醫(yī)科大學;2013年

5 仝惠民;辛伐他汀對豚鼠哮喘模型氣道炎癥和重塑的影響及機制[D];天津醫(yī)科大學;2013年

6 李潔;C反應(yīng)蛋白、同型半胱氨酸和左房內(nèi)徑與心房顫動的關(guān)系[D];天津醫(yī)科大學;2013年

7 崔青;頸部血管超聲、CT血管造影對檢測頸動脈狹窄病變的對比分析[D];寧夏醫(yī)科大學;2013年

8 雷鵬;抑制性寡脫氧核苷酸對染矽塵小鼠早期炎癥的影響及其機制探討[D];重慶醫(yī)科大學;2013年

9 蔣群龍;HCY、MMP-9/TIMP-1失衡與頸動脈粥樣硬化斑塊穩(wěn)定性的關(guān)系[D];泰山醫(yī)學院;2013年

10 付冰;益氣活血復方對慢性心衰大鼠心肌MMP-9影響的研究[D];遼寧中醫(yī)藥大學;2013年

，

本文編號：931857