本文關(guān)鍵詞：過表達(dá)CRMP2對(duì)彌漫性軸索損傷后α7nAChR及Aβ的影響

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【摘要】：目的研究過表達(dá)腦衰反應(yīng)調(diào)節(jié)蛋白2(collapsin response-mediator protein 2,CRMP2)對(duì)大鼠彌漫性軸索損傷(diffuse axonal injury,DAI)后β-淀粉樣前體蛋白(β-amyloid precursor protein,β-APP)及β-淀粉樣蛋白(amyloidβ,Aβ)表達(dá)的影響。方法1.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分組:實(shí)驗(yàn)分為正常對(duì)照組、DAI組、AAV組及CRMP2組。正常對(duì)照組動(dòng)物入組即處死。AAV組及CRMP2組分別注射空白AAV病毒和AAV-CRMP2病毒,10天后予以DAI損傷。DAI組僅致傷,不注射病毒。各損傷組大鼠分別于傷后7、14、30天處死,取標(biāo)本保存待測(cè)。2.DAI大鼠模型建立:利用本課題組自行研制的DAI致傷裝置建立大鼠DAI模型,該裝置可通過產(chǎn)生復(fù)合線加速和角加速運(yùn)動(dòng)致傷(專利號(hào):ZL200920067463.4、ZL 200910056452.0、ZL 201520430079.1)。3.病毒制備及注射:采用基因重組技術(shù)將CRMP2基因插入AAV表達(dá)載體,構(gòu)建AAV重組質(zhì)粒。通過重組AAV載體包裝系統(tǒng)共轉(zhuǎn)染HEK293細(xì)胞包裝病毒,并測(cè)定病毒滴度。AAV組和CRMP2組的大鼠采用立體定向技術(shù)分別注射2ul空白AAV病毒及AAV-CRMP2病毒至右側(cè)海馬區(qū)。4.組織學(xué)研究:各組大鼠深麻醉后處死取腦,腦組織固定24小時(shí)后石蠟包埋,利用免疫熒光技術(shù)定性觀察不同時(shí)間點(diǎn)海馬組織α7n ACh R和Aβ的表達(dá)情況。5.α7n ACh R和Aβ檢測(cè):各組大鼠深麻醉后處死取腦,取右側(cè)海馬組織。采用Western blot、Real-time PCR技術(shù)定量評(píng)估α7n ACh R蛋白及m RNA的動(dòng)態(tài)變化,采用Elisa方法檢測(cè)Aβ蛋白的表達(dá)變化。6.統(tǒng)計(jì)學(xué)處理:使用SPSS 18.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析,組間均數(shù)比較采用方差分析,p0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性。結(jié)果1.組織學(xué)研究:α7n ACh R和Aβ在大鼠海馬組織中均有表達(dá)。在免疫熒光顯微鏡下海馬組織中α7n ACh R和Aβ免疫熒光反應(yīng)呈陽性,發(fā)出紅色熒光,胞核發(fā)出藍(lán)色熒光。2.海馬組織中α7n ACh R表達(dá):與正常對(duì)照組相比,DAI組與AAV組海馬組織中α7n ACh R蛋白及m RNA水平在傷后各時(shí)間點(diǎn)均明顯降低(p0.05),但這兩組之間無明顯差異。CRMP2組較以上兩組明顯升高,具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05),但仍低于正常組(p0.05)。3.海馬組織中Aβ表達(dá):與正常對(duì)照組相比,在傷后各時(shí)間點(diǎn)DAI組和AAV組海馬組織中Aβ的表達(dá)均明顯升高(p0.05)。但DAI組和AAV組之間無明顯差異(P?0.05)。與DAI組和AAV組相比,CRMP2組Aβ的表達(dá)在損傷7、14天均明顯減低(p0.05),而在損傷30天無明顯差異;但DAI組、AAV組及CRMP2組Aβ的表達(dá)均高于正常組(p0.05)。結(jié)論1.大鼠DAI后海馬組織內(nèi)α7n ACh R表達(dá)降低,Aβ表達(dá)增加。2.大鼠DAI后過表達(dá)CRMP2可引起α7n ACh R表達(dá)升高及Aβ表達(dá)降低。
【關(guān)鍵詞】：彌漫性軸索損傷 腦衰反應(yīng)調(diào)節(jié)蛋白2 海馬β-淀粉樣蛋白 α7煙堿型乙酰膽堿受體
【學(xué)位授予單位】：蚌埠醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R651.15
【目錄】：

• 中文摘要5-7
• 英文摘要7-9
• 前言9-11
• 材料和方法11-29
• 結(jié)果29-40
• 討論40-43
• 結(jié)論43-44
• 參考文獻(xiàn)44-47
• 附錄A 英文縮寫詞一覽表47-48
• 附錄B 綜述48-55
• 參考文獻(xiàn)52-55
• 致謝55-56
• 攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文56

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前5條

1 孫兆良;尹義國(guó);戚睿;徐楠杰;馮東福;;大鼠彌漫性軸索損傷后腦干內(nèi)α7煙堿型乙酰膽堿受體的表達(dá)變化[J];中國(guó)臨床神經(jīng)外科雜志;2013年05期

2 趙麗琴;席斌;彭華松;;腺相關(guān)病毒(AAV)載體研究進(jìn)展[J];生物技術(shù)進(jìn)展;2012年02期

3 劉燕燕;楊璇;韓松;蘇吉兒;羅宏;李俊發(fā);;cPKCγ參與低氧預(yù)適應(yīng)對(duì)小鼠腦缺血皮質(zhì)內(nèi)CRMP2水解和磷酸化的調(diào)節(jié)[J];基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)與臨床;2012年01期

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本文編號(hào)：929718