發(fā)布時間：2017-09-22 15:43

  本文關(guān)鍵詞：富硒芪云抗腫瘤作用及其機制的實驗研究

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【摘要】：目的本課題研究微波消解-ICP-MS檢測富硒芪云硒的含量,含藥血清對體外SGC-7901細胞抑制增殖作用及Se-AMWE對體內(nèi)H22腹水瘤小鼠生存時間和S180實體瘤小鼠抑瘤作用,并探討其影響氧化還原微環(huán)境抗腫瘤機制。評價富硒芪云用于腫瘤治療的可能性,為開發(fā)新型抗腫瘤或輔助抗腫瘤藥提供合理、安全、有效的理論基礎(chǔ)和方法學依據(jù)。方法1、富硒芪云(Se-enriched Astragalus Milk vetch water extract,Se-AMWE)按照不同比例混合后提取,使用微波消解-電感耦合等離子體質(zhì)譜(Inductively coupled plasma mass spectrometry,ICP-MS)檢測Se-AMWE微量元素硒的含量;2、SGC-7901細胞分別在空白血清和含藥血清中培養(yǎng)24h,顯微鏡下觀察細胞形態(tài);SGC-7901細胞貼壁后換用10%含藥血清分別培養(yǎng)24h、48h和72h,臺盼藍染色觀察Se-AMWE含藥血清對SGC-7901細胞的藍染率及MTT法檢測觀察Se-AMWE含藥血清對SGC-7901細胞增殖抑制作用。3、復制H22腹水瘤小鼠模型和S180實體瘤小鼠模型,造模后分別將各模型小鼠隨機分8組,模型組(等容量生理鹽水)、環(huán)磷酰胺陽性對照組(cyclophosphamide,CTX)(60mg/kg)、硒酵母陽性對照組(26μg/kg)、黃芪水提物組(3.9g/kg)、紫云英水提物組(3.9g/kg)和Se-AMWE低、中、高劑量組(1.95g/kg、3.9g/kg、7.8g/kg)每組12只。另取12只KM小鼠為正常對照組(等容量生理鹽水)。末次給藥后,H22腹水瘤模型試驗:各實驗組停止給藥,觀察Se-AMWE對H22腹水瘤小鼠生存時間的影響。S180實體瘤模型實驗:用3.5%水合氯醛腹腔麻醉小鼠,取瘤塊、胸腺、胰腺、脾腺。觀察Se-AMWE對S180實體瘤小鼠抑瘤率、體質(zhì)量、免疫臟器指數(shù)的影響;腹主動脈取血,分離血清,采用酶聯(lián)免疫吸附測定法(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)測定血清硒結(jié)合蛋白1(Selenium-binding protein1,SBP1)、谷胱甘肽過氧化物酶(Glutathione peroxidase1,GPX1)、腺苷酸活化蛋白激酶(adenosine 5‘-monophosphate(AMP)-activated protein kinase,AMPK)、活性氧(reactive oxygen species,ROS)的含量。結(jié)果1、Se-AMWE經(jīng)微波消解儀消解后ICP-MS檢測硒含量,黃芪與紫云英1:1配伍水提物中硒含量最高,平均為9.35μg/ml。2、10%含藥血清培養(yǎng)SGC-7901細胞24h能明顯改變細胞生長形態(tài);細胞正常培養(yǎng)24h后,改用含藥血清繼續(xù)培養(yǎng)24h、48h和72h,與空白對照組比較,Se-AMWE含藥血清組細胞藍染率變化不明顯;MTT檢測發(fā)現(xiàn)Se-AMWE能明顯抑制降低OD值、抑制細胞增殖。3、各小鼠分別用H22細胞復制腹水瘤模型和S180腫瘤細胞復制實體瘤模型,給藥10天后,H22腹水瘤模型:與模型組比較,Se-AMWE各劑量組H22腹水瘤小鼠生存時間延長。S180實體瘤模型:與模型組比較,Se-AMWE各劑量組能明顯抑制腫瘤組織生長,體質(zhì)量沒有出現(xiàn)明顯下降,免疫臟器指數(shù)得到改善;與模型組比較,各給藥組SBP1蛋白表達增多,GPX l活性提高,體內(nèi)有機硒含量升高;與模型組比較,各藥物組能提高AMPK水平、減少ROS含量。結(jié)論1、黃芪和紫云英按照1:1比例混合提取,提取物中硒含量最高。2、Se-AMWE含藥血清能明顯抑制體外SGC-7901細胞增殖。3、Se-AMWE延長H22腹水瘤小鼠的生存時間。Se-AMWE能顯著抑制體內(nèi)S180實體瘤細胞的增殖,提高胸腺、胰腺、脾腺等免疫系統(tǒng)臟器指數(shù)。各劑量組能明顯增加S180小鼠血清SBP1蛋白表達,提高GPX l活性,提高AMPK水平、減少ROS含量,其機制可能與其升高腫瘤細胞中硒水平,影響腫瘤細胞能量代謝改變微環(huán)境而發(fā)揮抗腫瘤作用。
【關(guān)鍵詞】：富硒芪云 硒 微環(huán)境 含藥血清 氧化還原
【學位授予單位】：安徽中醫(yī)藥大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R285.5
【目錄】：

• 中文摘要7-9
• ABSTRACT9-12
• 英文縮略詞（Abreviation）12-13
• 前言13-17
• 第一部分 微波消解-ICP-MS檢測富硒芪云硒含量的實驗研究17-20
• 1 實驗材料17
• 1.1 藥品及試劑17
• 1.2 主要儀器17
• 2 實驗方法17-19
• 2.1 分組及藥品制備17-18
• 2.2 供試品溶液的制備18
• 2.3 標準品溶液的制備18
• 2.4 內(nèi)標溶液的制備18
• 2.5 ICP-MS工作參數(shù)18-19
• 3 檢測結(jié)果19-20
• 3.1 線性關(guān)系考察19
• 3.2 硒含量檢測19-20
• 第二部分 含藥血清對胃癌細胞SGC-7901的實驗研究20-29
• 1 實驗材料20-22
• 1.1 細胞株20
• 1.2 動物20
• 1.3 藥品20
• 1.4 主要試劑20
• 1.5 主要儀器20-21
• 1.6 主要溶液的配制21-22
• 2 實驗方法22-25
• 2.1 含藥血清的制備22
• 2.1.1 給藥劑量計算22
• 2.1.2 受試藥制備22
• 2.1.3 含藥血清制備22
• 2.2 SGC-7901細胞培養(yǎng)22-23
• 2.2.1 傳代22-23
• 2.2.2 培養(yǎng)23
• 2.2.3 凍存23
• 2.2.4 復蘇23
• 2.3 指標檢測23-25
• 2.3.1 細胞形態(tài)學觀察23
• 2.3.2 細胞藍染率測定23-24
• 2.3.3 細胞增殖抑制檢測24-25
• 2.4 數(shù)據(jù)統(tǒng)計25
• 3 實驗結(jié)果25-29
• 3.1 形態(tài)學觀察25
• 3.2 細胞藍染率檢測25-26
• 3.3 細胞增殖抑制檢測26-29
• 第三部分 富硒芪云對H22腹水瘤及S180實體瘤小鼠實驗研究29-42
• 1 實驗材料29-30
• 1.1 細胞株29
• 1.2 動物29
• 1.3 藥品及試劑29
• 1.4 主要儀器29-30
• 1.5 條件30
• 2 實驗方法30-34
• 2.1 藥物提取30
• 2.2 細胞株傳代30
• 2.3 荷瘤鼠模型的建立30-31
• 2.4 實驗分組與給藥31
• 2.5 動物處理及指標檢測31-34
• 2.5.1 血清SBP1、GXP-1 含量的測定31-33
• 2.5.2 血清AMPK含量的測定33-34
• 2.5.3 血清ROS含量的測定34
• 2.6 統(tǒng)計學分析34
• 3 結(jié)果34-42
• 3.1 Se-AMWE對H22腹水瘤小鼠的生存時間的影響34-35
• 3.2 Se-AMWE對S180實體瘤小鼠的抑瘤作用35-36
• 3.3 Se-AMWE對S180實體瘤小鼠臟器指數(shù)的影響36-38
• 3.4 Se-AMWE對S180實體瘤小鼠血清SBP1含量及GXP1活性的影響38-39
• 3.5 Se-AMWE對S180實體瘤小鼠血清AMPK活性的影響39-41
• 3.6 Se-AMWE對S180實體瘤小鼠血清ROS含量的影響41-42
• 討論42-51
• 1 中醫(yī)藥抗腫瘤作用機制的研究現(xiàn)狀42-44
• 1.1 抑制腫瘤細胞增殖42-43
• 1.2 誘導腫瘤細胞凋亡43-44
• 1.3 抑制腫瘤血管生長44
• 1.4 增強機體免疫力44
• 2 硒與腫瘤44-47
• 2.1 降低化學物質(zhì)的致癌作用45
• 2.2 調(diào)節(jié)轉(zhuǎn)錄因子45-46
• 2.3 誘導細胞凋亡46
• 2.4 抗氧化作用46-47
• 3 AMPK有關(guān)信號通路與腫瘤47-48
• 4 Se-AMWE抗腫瘤實驗研究48-51
• 4.1 Se-AMWE對腫瘤細胞微環(huán)境的影響49-50
• 4.2 Se-AMWE對腫瘤細胞能量代謝的影響50-51
• 結(jié)論51-52
• 參考文獻52-61
• 綜述61-71
• 參考文獻67-71
• 附錄71-72
• 致謝72-73

【參考文獻】

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本文編號：901677