發(fā)布時間：2017-09-20 01:05

  本文關鍵詞：不同長度聚乳酸膜小間隙縫合修復周圍神經損傷的實驗研究

  更多相關文章： 小間隙縫合 周圍神經 損傷 修復 聚乳酸膜

【摘要】：[背景]與中樞神經系統(tǒng)不同,外周神經的再生潛力大,當給予一個合適的微環(huán)境,再生軸突會延伸進入遠端Bungner帶實現(xiàn)神經再生和功能恢復,但是周圍神經損傷修復后功能仍難以得到滿意的恢復。在沒有神經缺損的神經斷裂傷中,神經外膜縫合恢復神經的連續(xù)性是最傳統(tǒng)的治療方法,但是這種技術不能保證神經內數(shù)以百萬計的神經纖維的精確對接。因此,傳統(tǒng)的神經縫合方法神經恢復效果往往不理想是顯而易見的。在二十世紀初,Cajal首先提出神經趨化性再生的概念,即神經元的軸突再生由化學營養(yǎng)物質引導,為神經損傷的治療提供新思路。根據(jù)神經趨化性再生理論,有人提出一種新的縫合方法——在神經斷端之間留一個適當?shù)拈g隙,促進神經的自發(fā)選擇再生。這種小間隙橋接周圍神經的方法在動物實驗及臨床應用中取得良好效果,在修復周圍神經損傷時,有望取代神經外膜縫合和成為推薦的方法。但是,小間隙縫合法修復神經損傷的最佳間隙距離尚無定論,若距離太長,近端再生神經難以穿過間隙延伸至遠端,若距離太短,又不能充分發(fā)揮神經的選擇性再生潛能。因此,探究小間隙縫合法修復外周神經損傷的最適間隙距離對周圍神經損傷的外科治療有重要意義。[目的]為探討小間隙縫合法修復外周神經損傷的最適間隙距離,本實驗采用聚乳酸膜小間隙縫合修復大鼠腓總神經損傷,探討不同間隙縫合修復周圍神經損傷的效果。[方法]1.動物模型的建立：由南方醫(yī)科大學實驗動物中心提供SPF級健康雄性3月齡清潔級Sprague-Dawley(SD)大鼠40只,體重250-300g,用0.1%戊巴比妥鈉對大鼠進行腹腔注射麻醉,劑量為0.1m1/100g。待麻醉充分后,備皮,俯臥位固定于手術操作板上,絡合碘對右下肢手術區(qū)進行消毒,鋪無菌洞巾。按小間隙縫合的間隙距離,實驗大鼠隨機分為4組,每組10只：嚴格按照無菌操作原則,取右膝后外側縱行切口,切開皮膚、皮下組織及筋膜,鈍性分離肌肉,在手術顯微鏡下,顯露腓總神經,用鋒利的顯微組織剪于距肌門近側5mm處橫斷腓總神經,根據(jù)腓總神經兩斷端的形狀、紋理、營養(yǎng)血管的走行等特點將兩斷端準確對齊,防止神經斷端扭轉。剪取約5mm×4mm的矩形聚乳酸膜,將其置于神經斷端中間,分別保持神經斷端有1mm、2mm、3mm、Omm的間隙(分別記為E1組、E2組、E3組及N組),用7-0無損傷縫合線把神經遠、近斷端的神經外膜12點和6點位與聚乳酸膜兩邊縫合2針固定,將聚乳酸膜包繞神經斷端成管狀,縫合聚乳酸膜游離緣,使聚乳酸膜呈一直徑與神經直徑相當?shù)拿荛]套管,于聚乳酸膜套管兩端適當加1到3針將神經外膜與聚乳酸套管縫合固定。用生理鹽水沖洗術野,徹底止血,將實驗神經復還于原來的肌肉組織間隙中,逐層縫合肌膜、筋膜和皮膚。2.觀察指標：①術后觀察實驗大鼠踝關節(jié)及足趾恢復背屈活動情況；②神經電生理檢查：術后6周,用0.1%戊巴比妥鈉0.1ml/100g腹腔注射麻醉大鼠,待麻醉顯效滿意后,備皮,肢體妥善固定,用肌電圖儀測量大鼠再生神經傳導速度；③神經大體觀察：術后6周,暴露右側腓總神經,手術顯微鏡下觀察再生神經解剖形態(tài)；④組織形態(tài)學觀察：縫合口部位取材,分離并切取腓總神經小間隙段及其遠端5mm,4%多聚甲醛固定,石蠟包埋,行橫行、縱行切片,常規(guī)行蘇木素-伊紅染色(HE染色)、Anti-S100 antibody-Astrocyte(標記許旺細胞)及Anti-200kD Neurofilament Heavy(標記神經纖維)免疫組化反應,顯微鏡下觀察,采用Image-Pro Plus 6.0圖像分析軟件測量神經纖維數(shù)；⑤再生神經超微結構觀察：分離并切取縫合口遠端約lmm長再生神經,戊二醛固定,醋酸鈾、枸櫞酸鉛染色,透射電鏡下觀察再生神經超微結構；⑥測量肌肉濕重比：完整分離并切取大鼠雙側小腿前外側肌群,紗布吸干表面血液后立即用電子天平稱量肌肉濕重,精確到0.01g,計算濕重比(濕重比=手術側小腿前外側肌群濕重/非手術側小腿前外側肌群濕重)。3.統(tǒng)計學方法采用SPSS20.0軟件進行統(tǒng)計分析.數(shù)據(jù)以均數(shù)±標準差表示,多組樣本均數(shù)比較采用單因素方差分析(One-Way ANOVA),兩兩比較采用LSD檢驗,P0.05認為差異有統(tǒng)計學意義。[結果]①術后實驗大鼠踝關節(jié)及足趾恢復背屈活動情況：術后大鼠右小腿前外側肌群均癱瘓,呈垂足畸形,右踝背屈障礙,右足趾伸直障礙。Omm無間隙縫合組(N組)平均25日恢復踝關節(jié)及足趾背屈運動,而1、2、3mm小間隙縫合組(E1、E2、E3組)則分別為16日、22日及30日恢復踝關節(jié)及足趾背屈活動。②神經電生理檢查(腓總神經傳導速度)：術后6周,右側腓總神經傳導速度E1組E2N組E3組,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05)。③神經大體觀察：術后6周,暴露右側腓總神經,手術顯微鏡下觀察再生神經解剖形態(tài)可見：聚乳酸膜已完全降解,未見神經與周圍組織粘連。lmm小間隙縫合組(E1組)再生神經較光滑,神經遠段直徑基本正常；2mm小間隙縫合組(E2組)再生神經欠光滑,神經遠段直徑稍變細；3mm小間隙縫合組(E3組)再生神經明顯膨大,神經遠段明顯變細；Omm無間隙縫合組(N組)再生神經膨大,神經遠段變細。④組織形態(tài)學觀察：HE染色后鏡下觀察可見：lmm小間隙縫合組(E1組)再生神經纖維排列整齊有序,神經纖維粗大,許旺細胞數(shù)量多,髓鞘清晰可見,無結締組織增生；2mm小間隙縫合組(E2組)再生神經纖維排列較有序,神經纖維較粗大,許旺細胞數(shù)量較多,髓鞘較清晰,可見結締組織增生；3mm小間隙縫合組(E3組)再生神經呈膨脹性生長,神經卷曲成團,排列明顯紊亂,遠段再生神經數(shù)量最少,直徑最小,髓鞘模糊不清,結締組織增生較多；0mm無間隙縫合組(N組)再生神經纖維較紊亂,神經直徑較小,許旺細胞數(shù)量少,髓鞘不明顯。Anti-S100 antibody-Astrocyte免疫組化觀察發(fā)現(xiàn)：神經形態(tài)觀察結果基本同HE染色所見,由于Anti-S100 antibody-Astrocyte抗體與許旺細胞特異性結合,故其免疫組化反應特異性顯示許旺細胞形態(tài)�？梢奅1組許旺細胞數(shù)量多,髓鞘最厚,分層清晰整齊；E2組許旺細胞數(shù)量較多,髓鞘分層較清晰,髓鞘較厚；E3組許旺細胞數(shù)量最少,髓鞘最薄,未見明顯分層,髓鞘模糊不清；N組再生神經許旺細胞數(shù)量少,髓鞘較薄,髓鞘分層不明顯。Anti-200kD Neurofilament Heavy免疫組化反應觀察發(fā)現(xiàn)：神經形態(tài)觀察結果基本同HE染色所見,由于Anti-200kD Neurofilament Heavy抗體與神經纖維特異性結合,故其免疫組化反應特異性顯示神經纖維形態(tài)�？梢奅1組再生神經纖維數(shù)量最多,排列最為整齊有序,再生神經纖維直徑最粗；E2組再生神經纖維數(shù)量較多,排列較有序,再生神經纖維直徑較粗；E3組再生神經呈膨脹性生長,神經卷曲成團,排列明顯紊亂,再生神經數(shù)量最少,直徑最細；N組再生神經纖維數(shù)量較少,排列較紊亂,可見部分神經卷曲,再生神經纖維直徑較細。采用Image-Pro Plus 6.0圖像分析軟件測量神經纖維數(shù)發(fā)現(xiàn)：E1組E2N組E3組,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05)。⑤再生神經超微結構觀察：E1組再生神經軸突橫截面呈圓形,再生神經纖維數(shù)量最多,排列最為整齊有序,再生神經纖維直徑最粗,髓鞘最厚,板層呈同心圓狀致密、整齊包繞再生神經軸突,髓鞘最為成熟；E2組再生神經軸突橫截面基本呈圓形,偶有扭曲,再生神經纖維數(shù)量較多,排列較為整齊,再生神經纖維直徑較粗,髓鞘較厚,髓鞘板層較整齊、致密；E3組再生神經軸突橫截面形狀明顯不規(guī)則,再生神經纖維數(shù)量最少,排列紊亂,直徑最細,髓鞘最薄,髓鞘可見扭曲及畸形,板層排布極其紊亂、疏松,髓鞘模糊不清；N組再生神經軸突橫截面形狀較不規(guī)則,再生神經纖維數(shù)量較少,排列較紊亂,直徑較細,髓鞘較薄,髓鞘可見扭曲及畸形,板層排布較紊亂、疏松,髓鞘模糊不清。⑥測量肌肉濕重比：術后6周各組大鼠小腿前外側肌群肌肉濕重比結果為：E1組E2N組E3組,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05)。[結論]小間隙縫合法修復周圍神經損傷效果優(yōu)于無間隙縫合法,1mm間隙修復效果最佳,隨著間隙距離逐漸增加,神經修復效果逐漸變差。
【關鍵詞】：小間隙縫合 周圍神經 損傷 修復 聚乳酸膜
【學位授予單位】：南方醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R688
【目錄】：

• 摘要3-8
• ABSTRACT8-17
• 前言17-20
• 第一章 材料與方法20-30
• 1 實驗材料20-21
• 2 實驗方法21-30
• 第二章 結果30-33
• 1 實驗動物右下肢活動情況大體觀察30
• 2 神經電生理檢查(腓總神經傳導速度)30
• 3 再生神經大體觀察30-31
• 4 組織形態(tài)學觀察31-32
• 5 再生神經超微結構觀察32
• 6 測量肌肉濕重比32-33
• 第三章 討論33-49
• 1 周圍神經損傷的分類及其預后33-34
• 2 周圍神經損傷后神經元、靶器官及中樞神經的病理變化34-36
• 3 周圍神經再生的微環(huán)境和再生的主要過程36-38
• 4 周圍神經再生效果的影響因素38-39
• 5 周圍神經損傷的修復方法39-42
• 6 神經趨化性再生理論與神經導管的應用42-43
• 7 神經導管內神經再生的基本過程43-44
• 8 小間隙縫合法的提出及其理論基礎44
• 9 實驗結果分析44-45
• 10 本實驗設計的優(yōu)點45-47
• 11 本實驗的臨床意義47
• 12 聚乳酸膜小間隙吻合法的注意事項47-49
• 第四章 結論49-50
• 參考文獻50-55
• 附圖55-81
• 中英文縮略詞對照表81-82
• 致謝82-84

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