本文關(guān)鍵詞：枸杞籽油對慢性應(yīng)激小鼠抑郁樣行為和認知障礙的改善作用與機制研究

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【摘要】：目的本研究采用小鼠慢性不可預知應(yīng)激模型(Chronic unpredictable stress,CUS),研究枸杞籽油(Lycium barbarum seed oil,LBSO)對慢性應(yīng)激引起的抑郁樣行為(Depression-like behavior)和認知能力障礙(Cognitive deficits)的影響;并以中樞海馬(Hippocampus)為研究對象,以期揭示LBSO的應(yīng)激保護作用是否涉及抑制海馬神經(jīng)元的損傷及BDNF信號通路的調(diào)制。方法采用小鼠慢性不可預知應(yīng)激模型(Chronic unpredictable stress,CUS)。雄性ICR小鼠90只,適應(yīng)性喂養(yǎng)3天后隨機分為6組:正常組、模型組、陽性藥物組(氟西汀,Fluoxetine,20mg/kg)、枸杞籽油低、中、高(2.5ml/kg,5ml/kg,10ml/kg)劑量組,每組15只,藥物干預時間35天。除正常組群養(yǎng)于獨立的實驗室外,其余5組小鼠獨籠飼養(yǎng),并接受28天慢性不可預知刺激造模,這些刺激包括夾尾1 min、4℃冰水游泳刺激5 min、噪音刺激10 min、禁食禁水24h、束縛1h、足底電擊5 min(30V,0.5Hz)、通宵照明、潮濕墊料。造模完成后所有小鼠依次接受曠場實驗(Open field test,OFT)、懸尾實驗(Tail suspension test,TST)、強迫游泳實驗(Forced swim test,FST)、Morris水迷宮(Morris water maze,MWM)四種行為學檢驗,共計7天。行為學檢驗完成后用4%水合氯醛麻醉小鼠,待角膜反射消失后眶叢取血,經(jīng)離心后得血清用于Elisa法測定血清皮質(zhì)酮含量。小鼠經(jīng)取血后,分兩種方式取材。每組10只小鼠取血后處死,開顱取海馬,液氮速凍后轉(zhuǎn)入超低溫冰箱凍存。小鼠海馬用于免疫印跡實驗(Western Blot,WB),每組剩余小鼠心臟依次灌注生理鹽水和4%多聚甲醛,灌注完成后開顱取全腦,石蠟包埋后切片。腦切片用于組織形態(tài)學實驗(包括HE染色和尼氏染色)和免疫組織化學實驗(Immunohistochemistry,IM)。結(jié)果1.枸杞籽油對慢性應(yīng)激小鼠抑郁樣行為的影響:a.在曠場實驗(OFT)中。與正常組相比,模型組小鼠穿越的格數(shù)降低(p0.01);與模型組相比,氟西汀組和枸杞籽油高劑量組小鼠穿越的格數(shù)升高(p0.01)。b.在懸尾實驗(TST)中。與正常組相比,模型組小鼠的不動時間升高(p0.05);與模型組相比,除枸杞籽油中劑量組無明顯統(tǒng)計學差異外,各試驗藥物組小鼠的不動時間顯著降低(p0.01,p0.05)。c.在強迫游泳實驗(FST)中。與正常組相比,模型組小鼠的不動時間顯著升高(p0.01);與模型組相比,枸杞籽油低、中、高三個劑量組小鼠的不動時間均顯著降低(p0.01)。以上實驗結(jié)果表明:枸杞籽油可改善慢性應(yīng)激小鼠的抑郁樣行為。2.枸杞籽油對慢性應(yīng)激小鼠認知障礙的影響:a.在Morris水迷宮(MWM)的空間記憶采集實驗中。與正常組相比,模型組小鼠的逃逸潛伏期顯著升高(p0.05);與模型組相比,氟西汀組和枸杞籽油高劑量組小鼠的逃逸潛伏期顯著降低(p0.01)。與正常組相比,模型組小鼠的平均潛伏距離顯著升高(p0.05);與模型組相比,除枸杞籽油中劑量組無明顯統(tǒng)計學差異外,各試驗藥物組小鼠的平均潛伏距離顯著降低(p0.01,p0.05)�？臻g記憶采集實驗結(jié)果表明:枸杞籽油能緩解慢性應(yīng)激小鼠的學習能力下降。b.在Morris水迷宮(MWM)的空間探索實驗中。與正常組相比,模型組小鼠的原平臺象限游程比率顯著降低(p0.01);與模型組相比,枸杞籽油高劑量組小鼠的原平臺象限游程比率顯著身高(p0.05)。與正常組相比,模型組小鼠的原平臺象限時間比率顯著降低(p0.01)。與模型組相比,各試驗藥物組與模型組的差異無統(tǒng)計學意義。與正常組相比,模型組小鼠的原平臺有效穿越次數(shù)顯著降低(p0.01);與模型組相比,枸杞籽油高劑量組小鼠的原平臺有效穿越次數(shù)顯著升高(p0.01)。與正常組在第三象限極有目的性的探索軌跡相比,模型組小鼠在整個迷宮中的探索是無傾向性、無目的性的。與模型組無目的性的軌跡相比,除枸杞籽油中劑量組無明顯差異外,各試驗藥物組小鼠的探索軌跡有較強的目的性�？臻g探索實驗結(jié)果表明:枸杞籽油可能緩解慢性應(yīng)激小鼠的記憶障礙。3.枸杞籽油對慢性應(yīng)激小鼠血清皮質(zhì)酮的影響:在Elisa測定小鼠血清皮質(zhì)酮的實驗中。與正常組相比,模型組小鼠的血清皮質(zhì)酮顯著升高(p0.01);與模型組相比,氟西汀組和枸杞籽油高劑量組小鼠的血清皮質(zhì)酮顯著降低(p0.01、p0.05)。Elisa結(jié)果表明:枸杞籽油可以改善慢性應(yīng)激小鼠的血清皮質(zhì)酮含量升高。4.組織形態(tài)學結(jié)果:a.HE染色結(jié)果:相比于正常組,模型組小鼠CA1區(qū)錐體細胞數(shù)量顯著低于正常組(p0.05)與模型組相比,氟西汀和枸杞籽油低、高劑量組小鼠的CA1區(qū)錐體細胞數(shù)量均顯著高于模型組(p0.05,p0.01)。表明枸杞籽油可改善慢性應(yīng)激小鼠的神經(jīng)元細胞丟失。b.尼式染色結(jié)果:與正常組比較,模型組小鼠海馬CA1區(qū)錐體細胞排列不規(guī)則,細胞間隙增大,細胞胞體內(nèi)的尼氏小體減少或完全消失,細胞固縮。與模型組相比,氟西汀組和枸杞籽油高劑量組小鼠的CA1區(qū)錐體細胞排列整齊緊湊,其胞體內(nèi)部的尼氏小體清晰可見。表明枸杞籽油可改善慢性應(yīng)激小鼠的神經(jīng)元損傷。5.免疫組織化學結(jié)果:a.BDNF:與正常組相比,模型組小鼠BDNF在海馬組織CA1、CA3和DG三個區(qū)的表達較弱,BDNF的平均光密度在CA1、CA3和DG三個區(qū)均顯著降低(p0.01)。與模型組相比,各試驗藥物組DNF在海馬組織CA1和DG兩個區(qū)的表達顯著增強,BDNF的平均光密度在CA1和DG兩個區(qū)均顯著升高(p0.01)。氟西汀組(20mg/kg)和枸杞籽油高劑量組在海馬組織CA1、CA3和DG三個區(qū)的表達均顯著增強。BDNF的平均光密度在CA1、CA3和DG三個區(qū)均顯著升高(p0.01)。b.p-CREB:與正常組相比,模型組小鼠p-CREB在海馬CA1、CA3和DG三個區(qū)的表達較弱。p-CREB的平均光密度在CA1、CA3和DG三個區(qū)均顯著降低(p0.05、p0.01),與模型組相比,除枸杞籽油中劑量組小鼠p-CREB只在海馬CA1區(qū)表達顯著增強;光密度顯著升高(p0.01)外。其余各實驗組小鼠p-CREB海馬CA1、CA3和DG三個區(qū)的表達均顯著增強,平均光密度在CA1、CA3和DG三個區(qū)均顯著升高(p0.01)。c.CREB磷酸化比率:與正常組相比,模型組小鼠CREB磷酸化比率在海馬CA1、CA3和DG三個區(qū)均顯著低于正常組。p-CREB/CREB在CA1、CA3和DG三個區(qū)均顯著低于正常組(p0.01、p0.05)。與模型組相比,除枸杞籽油中劑量組小鼠CREB磷酸化比率只在海馬CA1區(qū)顯著上升;p-CREB/CREB顯著升高(p0.01)外。其余各實驗組小鼠磷酸化比率在海馬CA1、CA3和DG三個區(qū)均顯著上升,p-CREB/CREB在CA1、CA3和DG三個區(qū)均顯著升高(p0.01)。6.Western blot結(jié)果a.BDNF:與正常組相比,模型組小鼠海馬組織BDNF表達量顯著降低(p0.05);與模型組相比,氟西汀組和枸杞籽油高劑量組小鼠海馬組織BDNF表達量顯著升高(p0.01)。b.p-CREB:與正常組相比,模型組小鼠海馬組織p-CREB表達量與正常組無明顯統(tǒng)計學差異;與模型組相比,枸杞籽油高劑量組小鼠海馬組織p-CREB表達量顯著升高(p0.05);氟西汀組無明顯統(tǒng)計學差異。c.CREB:與正常組相比,模型組小鼠海馬組織CREB表達量與正常組無明顯統(tǒng)計學差異;與模型組相比,氟西汀組和枸杞籽油高劑量組小鼠海馬組織CREB表達量均無明顯統(tǒng)計學差異。d.CREB磷酸化比率:與正常組相比,模型組小鼠海馬組織中的CREB磷酸化比率顯著降低(p0.05)。與模型組相比,氟西汀組和枸杞籽油高劑量組小鼠海馬組織中的CREB磷酸化比率顯著升高(p0.05)。結(jié)論1.枸杞籽油具有改善慢性應(yīng)激小鼠抑郁樣行為和認知障礙的作用。2.枸杞籽油的應(yīng)激保護作用涉及海馬神經(jīng)元的損傷的保護和BDNF信號通路的調(diào)制。
【關(guān)鍵詞】：枸杞籽油 慢性應(yīng)激 抑郁樣行為 認知障礙 海馬 BDNF CREB
【學位授予單位】：寧夏醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R285.5
【目錄】：

• 摘要4-9
• ABSTRACT9-12
• 中英文縮略詞對照表12-14
• 前言14-16
• 材料與方法16-37
• 1.材料16-20
• 2.方法20-37
• 結(jié)果37-55
• 1. 行為學實驗結(jié)果37-43
• 2. 血清皮質(zhì)酮Elisa法測定結(jié)果43-44
• 3. 組織形態(tài)學結(jié)果44-48
• 4. 枸杞籽油對CUS小鼠海馬組織中BDNF、CREB、p-CREB蛋白表達的免疫組化法檢測結(jié)果48-51
• 5. 枸杞籽油對CUS小鼠海馬組織中BDNF、CREB、p-CREB蛋白表達的Westernblot法檢測結(jié)果51-55
• 討論55-60
• 結(jié)論60-61
• 參考文獻61-67
• 文獻綜述67-75
• 綜述參考文獻71-75
• 致謝75-76
• 攻讀學位期間發(fā)表的學術(shù)論文目錄76-77
• 個人簡歷77

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中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前8條

1 劉晨;王文蘋;戴貴東;;不同方法制備枸杞籽油微乳的比較研究[J];中國藥房;2012年19期

2 姜怡鄧,董曉薇,毛忠英,董泉洲;枸杞籽油對小鼠耐缺氧抗疲勞作用的實驗研究[J];寧夏醫(yī)學院學報;2004年01期

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5 姜怡鄧;曹軍;董泉洲;王樹人;;PKC和MMPs在枸杞籽油抗動脈粥樣硬化中的作用和機制[J];華西藥學雜志;2007年01期

6 楊文博;李紅兵;吳t，

本文編號：862845