本文關(guān)鍵詞：哈欠（睡意）與睡眠的相關(guān)性及四逆散凍干粉干預(yù)作用的研究

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【摘要】：目的：明確哈欠(睡意)與睡眠的相關(guān)性并對四逆散凍干粉對哈欠(睡意)與睡眠相關(guān)性的干預(yù)作用進行研究。方法：1.哈欠模型的復(fù)制選取雄性SD大鼠30只,隨機分為空白對照組與模型組。兩組實驗動物在腦立體定位和麻醉條件下,將微量注射導(dǎo)管埋植于其腦內(nèi)的PVN區(qū)域內(nèi),術(shù)后動物恢復(fù)2天,于第三天9：00-13：00,將微量注內(nèi)管插入導(dǎo)管內(nèi),向模型組大鼠腦內(nèi)PVN區(qū)域微量注射0.3μL含有50ng NMDA的林格氏溶液,空白組大鼠給予相同劑量的林格氏溶液,以0.3 μL/min的速度注射1 min,留針1 min后,取出微量注射內(nèi)管。利用高清錄像儀分別記錄給藥后1h內(nèi)空白組與模型組大鼠的哈欠次數(shù),復(fù)制大鼠哈欠的模型。2.哈欠與睡眠的相關(guān)性研究2.1哈欠對大鼠腦內(nèi)VLPO區(qū)神經(jīng)元中Fos蛋白表達的影響選取雄性SD大鼠30只,隨機分為空白對照組與模型組,灌胃給予蒸餾水(10 mL/kg)7天。兩組實驗動物于第5天在腦立體定位和麻醉條件下,將微量注射導(dǎo)管埋植于其腦內(nèi)的PVN區(qū)域內(nèi),術(shù)后動物恢復(fù)2天,于第8天9：00-13：00,將微量注射內(nèi)管插入導(dǎo)管內(nèi),向模型組大鼠腦內(nèi)PVN區(qū)域微量注射0.3 μL含有50 ng NMDA的林格氏溶液,空白對照組大鼠給予相同劑量的林格氏溶液,以0.3μL/min的速度注射1min,留針1 min后,取出微量注射內(nèi)管。利用高清錄像儀分別記錄給藥后1h內(nèi)空白對照組與模型組大鼠的哈欠次數(shù)。記錄完成后,兩組大鼠立即以生理鹽水及4%多聚甲醛灌流取腦,經(jīng)脫水(5%、10%、20%蔗糖溶液)、固定(4%多聚甲醛)、OCT包埋后,用冷凍切片機將大鼠腦組織切片,利用免疫組化技術(shù)(SP法)分別測定空白對照組與模型組大鼠腦內(nèi)VLPO區(qū)神經(jīng)元中Fos蛋白的表達水平。2.2哈欠對大鼠腦內(nèi)促睡眠相關(guān)因子含量的影響選取雄性SD大鼠30只,隨機分為空白對照組與模型組,灌胃給予蒸餾水(10 mL/kg)7天。兩組實驗動物于第5天在腦立體定位和麻醉條件下,將微量注射導(dǎo)管埋植于其腦內(nèi)的PVN區(qū)域內(nèi),術(shù)后動物恢復(fù)2天,于第8天9：00-13：00,將微量注射內(nèi)管插入導(dǎo)管內(nèi),向模型組大鼠腦內(nèi)PVN區(qū)域微量注射0.3μL含有50 ng NMDA的林格氏溶液,空白對照組大鼠給予相同劑量的林格氏溶液,以0.3μL/min的速度注射1min,留針1 min后,取出微量注射內(nèi)管。利用高清錄像儀分別記錄給藥后1h內(nèi)空白對照組與模型組大鼠的哈欠次數(shù)。記錄完成后,立即取大鼠新鮮腦組織,冰水中研磨、勻漿,經(jīng)低溫離心機(3000 r/min, 10min)離心后,取上清液,利用酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)測定空白對照組與模型組大鼠腦內(nèi)一氧化氮合酶(NOS)、白介素-2(IL-2)等促睡眠相關(guān)因子含量,利用硝酸還原酶法測定兩組大鼠腦內(nèi)一氧化氮(NO)含量。3.四逆散凍干粉對哈欠與睡眠相關(guān)性的影響3.1 四逆散凍干粉對哈欠模型大鼠哈欠次數(shù)與腦內(nèi)VLPO區(qū)神經(jīng)元中Fos蛋白表達的影響選取雄性SD大鼠15只,作為給藥組,灌胃給予四逆散凍干粉劑(10mL/kg)7天。兩組實驗動物于第5天在腦立體定位和麻醉條件下,將微量注射導(dǎo)管埋植于其腦內(nèi)的PVN區(qū)域內(nèi),術(shù)后動物恢復(fù)2天,于第8天9：00-13：00,將微量注射內(nèi)管插入導(dǎo)管內(nèi),向給藥組大鼠腦內(nèi)PVN區(qū)域微量注射0.3 μL含有50ng NMDA的林格氏溶液,以0.3μL/min的速度注射1 min,留針1 min后,取出微量注射內(nèi)管。利用高清錄像儀分別記錄給藥后1h內(nèi)給藥組大鼠的哈欠次數(shù)。記錄完成后,動物立即以生理鹽水及4%多聚甲醛灌流取腦,經(jīng)脫水(5%、10%、20%蔗糖溶液)、固定(4%多聚甲醛)、OCT包埋后,用冷凍切片機將大鼠腦組織切片,利用免疫組化技術(shù)(SP法)測定給藥組大鼠腦內(nèi)VLPO區(qū)神經(jīng)元中Fos蛋白的表達水平。3.2 四逆散凍干粉對哈欠模型大鼠腦內(nèi)促睡眠相關(guān)因子含量的影響選取雄性SD大鼠15只,作為給藥組,灌胃給予四逆散凍干粉劑(10nL/kg)7天。兩組實驗動物于第5天在腦立體定位和麻醉條件下,將微量注射導(dǎo)管埋植于其腦內(nèi)的PVN區(qū)域內(nèi),術(shù)后動物恢復(fù)2天,于第8天9：00-13：00,將微量注射內(nèi)管插入導(dǎo)管內(nèi),向模型組大鼠腦內(nèi)PVN區(qū)域微量注射0.3 gL含有50 ng NMDA的林格氏溶液,空白對照組大鼠給予相同劑量的林格氏溶液,以03μL/min的速度注射1 min,留針1 min后,取出微量注射內(nèi)管。利用高清錄像儀分別記錄給藥后1h內(nèi)給藥組大鼠的哈欠次數(shù)。記錄完成后,動物立即以生理鹽水及4%多聚甲醛灌流取腦,經(jīng)脫水(5%、10%、20%蔗糖溶液)、固定(4%多聚甲醛)、OCT包埋后,用冷凍切片機將大鼠腦組織切片,利用免疫組化技術(shù)(SP法)測定給藥組大鼠腦內(nèi)VLPO區(qū)神經(jīng)元中Fos蛋白的表達水平。結(jié)果：1.哈欠模型的復(fù)制實驗結(jié)果表明,與空白組相比,模型組大鼠腦內(nèi)PVN中注射NMDA后1h內(nèi),哈欠次數(shù)極顯著增加,二者之間存在著極顯著的差異(P0.01)。2.哈欠與睡眠的相關(guān)性研究2.1哈欠對大鼠腦內(nèi)VLPO區(qū)神經(jīng)元中Fos蛋白表達的影響實驗結(jié)果表明,經(jīng)7天灌胃給予蒸餾水后,與空白組相比,模型組大鼠腦內(nèi)PVN中注射NMDA后1h內(nèi),哈欠次數(shù)極顯著增加,二者之間存在著極顯著的差異(P0.01)；實驗結(jié)果表明,與空白組相比,模型組大鼠腦內(nèi)PVN中注射NMDA后1 h,VLPO區(qū)神經(jīng)元中Fos蛋白表達量極顯著增加,二者之間存在著極顯著的差異(P0.01)2.2哈欠對大鼠腦內(nèi)促睡眠相關(guān)因子含量的影響實驗結(jié)果表明,與空白組相比,模型組大鼠腦內(nèi)PVN中注射NMDA后1 h,腦內(nèi)NO含量極顯著增加,二者之間存在著極顯著的差異(P0.01)；腦內(nèi)NOS含量無明顯變化,二者之間無顯著的差異(P0.05)；腦內(nèi)IL-2含量極顯著降低,二者之間存在著極顯著的差異(P0.01)。3.四逆散凍干粉對哈欠與睡眠相關(guān)性干預(yù)作用的研究3.1四逆散凍干粉對哈欠模型大鼠哈欠次數(shù)與腦內(nèi)VLPO區(qū)神經(jīng)元中Fos蛋白表達的影響實驗結(jié)果表明,與模型組相比,給藥組大鼠腦內(nèi)PVN中注射NMDA后1h內(nèi),哈欠次數(shù)顯著增加,二者之間存在著顯著的差異(P0.05)；實驗結(jié)果表明,與模型組相比,給藥組大鼠腦內(nèi)PVN中注射NMDA后1 h,VLPO區(qū)神經(jīng)元中Fos蛋白表達量顯著增加,二者之間存在著顯著的差異(P0.05)。3.2四逆散凍干粉對哈欠模型大鼠腦內(nèi)促睡眠相關(guān)因子含量的影響實驗結(jié)果表明,與模型組相比,給藥組大鼠腦內(nèi)PVN中注射NMDA后1h,腦內(nèi)NO含量顯著增加,二者之間存在著顯著的差異(P0.05)；腦內(nèi)NOS含量極顯著增加,二者之間存在著極顯著的差異(P0.01)；IL-2含量無明顯變化,二者之間無顯著的差異(P0.05)。結(jié)論：1、哈欠(睡意)與睡眠之間存在著相關(guān)性。其相關(guān)性表現(xiàn)為：哈欠(睡意)能提高睡眠中樞(VLPO)區(qū)域神經(jīng)元的活性,同時也能提高具有誘導(dǎo)睡眠發(fā)生作用的相關(guān)因子(NO)的含量。2、四逆散凍干粉能顯著地增加哈欠(睡意)的發(fā)生,并能提高睡眠中樞(VLPO)區(qū)域神經(jīng)元的活性,同時也能提高具有誘導(dǎo)睡眠發(fā)生作用的相關(guān)因子(NO、NOS)的含量。
【關(guān)鍵詞】：哈欠 睡意 四逆散 VLPO 睡眠
【學(xué)位授予單位】：黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R285.5
【目錄】：

• 縮略語表4-5
• 中文摘要5-9
• ABSTRACT9-13
• 前言13-14
• 文獻綜述14-26
• 1. 哈欠的簡介14-18
• 2. 睡意的簡介18
• 3. 哈欠與睡意18-19
• 4. 睡意與睡眠19-20
• 5. 睡眠中樞(VLPO)與促睡眠相關(guān)因子的簡介20-21
• 6. 四逆散的研究現(xiàn)狀21-24
• 7. 本課題研究思路與技術(shù)路線24-26
• 實驗部分26-54
• 第一部分 大鼠哈欠模型的復(fù)制26-31
• 1. 實驗材料26-27
• 2. 實驗條件27
• 3. 實驗方法27-29
• 4. 結(jié)果29-30
• 5. 小結(jié)30-31
• 第二部分 哈欠與睡眠的相關(guān)性研究31-44
• 一、哈欠對大鼠腦內(nèi)VLPO區(qū)神經(jīng)元中Fos蛋白表達的影響31-37
• 1. 實驗材料31-32
• 2. 實驗條件32
• 3. 實驗方法32-35
• 4. 結(jié)果35-36
• 5. 小結(jié)36-37
• 二、哈欠對大鼠腦內(nèi)睡眠相關(guān)因子含量的影響37-44
• 1. 實驗材料37-38
• 2. 實驗條件38
• 3. 實驗方法38-40
• 4. 結(jié)果40-43
• 5. 小結(jié)43-44
• 第三部分 四逆散凍干粉對哈欠(睡意)與睡眠相關(guān)性的影響44-54
• 一、四逆散凍干粉對哈欠模型大鼠哈欠次數(shù)與腦內(nèi)VLPO區(qū)神經(jīng)元中Fos蛋白表達的影響44-49
• 1. 實驗材料44-46
• 2. 實驗條件46
• 3. 實驗方法46-47
• 4. 結(jié)果47-48
• 5. 小結(jié)48-49
• 二、四逆散凍干粉促進大鼠哈欠(睡意)與睡眠的機制研究49-54
• 1. 實驗材料49-50
• 2. 實驗條件50
• 3. 實驗方法50-51
• 4. 結(jié)果51-52
• 5. 小結(jié)52-54
• 討論54-57
• 結(jié)論57-58
• 參考文獻58-62
• 致謝62-63
• 攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表的論文63-65
• 個人簡歷65

【參考文獻】

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