本文關(guān)鍵詞：潰腸寧對潰瘍性結(jié)腸炎大鼠結(jié)腸粘膜TLR2、NF-κB、IKK-β及IL-13等細(xì)胞因子影響的研究

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【摘要】：研究目的通過運(yùn)用三硝基苯磺酸灌腸,建立大鼠潰瘍性結(jié)腸炎動(dòng)物模型,研究中藥方劑潰腸寧對潰瘍性結(jié)腸炎模型大鼠結(jié)腸粘膜TLR2、NF-κB、IKK-β和細(xì)胞因子IL-13、TNF-α和IL-1β等的影響,探尋潰腸寧治療潰瘍性結(jié)腸炎的機(jī)理機(jī)制,可為其更深入的藥理及相應(yīng)的臨床研究奠定下確切的實(shí)驗(yàn)方面的基礎(chǔ)。研究方法階段一:實(shí)驗(yàn)大鼠分組:SPF級成年Wistar大鼠40只,雌雄各半,體重(170-200)g,隨機(jī)分配成4組,分別為空白對照組、模型組、中藥組(潰腸寧組)、西藥組(柳氮磺胺吡啶組),各組10只。階段二:潰瘍性結(jié)腸炎的大鼠模型建立及給藥:采用TNBS復(fù)合50%乙醇法造模。除空白對照組,其他各組用戊巴比妥鈉麻醉大鼠后,將鈍頭導(dǎo)管從肛門插至距肛門8cm處,按80mg/kg三硝基苯磺酸(TNBS)復(fù)合50%的乙醇量緩慢灌腸,誘導(dǎo)急性結(jié)腸炎.15天后再次給予30 mg/kg TNBS溶液灌腸,造成復(fù)發(fā)性結(jié)腸炎。于第二次造模日,即第一次造模后16天開始灌胃給藥,正常組和模型組分別給予0.9%的生理鹽水1ml/100g灌胃,中藥組給予中藥方潰腸寧1ml/100g(1.35g/ml)灌胃,西藥組給予柳氮磺胺吡啶1ml/100g(0.03g/ml)灌胃。以上各組每日灌胃1次,連續(xù)7天。階段三:指標(biāo)檢測:大鼠禁食24h,0.3%戊巴比妥鈉腹腔方式注射以麻醉大鼠,剖取全結(jié)腸以冰冷鹽水清洗完全,先以肉眼觀察大鼠結(jié)腸黏膜之充血、腫脹、潰瘍或穿孔流血等的病變情況,取1cm左右結(jié)腸組織于4%多聚甲酸固定,脫水后石蠟包埋切片,常規(guī)HE染色,光學(xué)顯微鏡下觀察結(jié)腸形態(tài)及組織學(xué)變化,剩下結(jié)腸組織運(yùn)用免疫組化法(IHC-P)檢測NF-κB及Toll樣受體2的蛋白表達(dá)水平量,另外用Real-time PCR檢測IKK-β的基因表達(dá)變化,用酶聯(lián)反應(yīng)吸附試驗(yàn)(ELISA法)檢測大鼠結(jié)腸中腫瘤壞死因子α(TNF-α)、白介素1β(IL-1β)、白介素-13(il-13)的表達(dá)水平。研究結(jié)果1.大鼠一般情況空白對照組大鼠精神佳,毛發(fā)濃密白亮有光澤,飲食狀況佳、活動(dòng)正常,大便成形,無膿血便和粘液便,體重明顯增加。余三組于第二次造模出現(xiàn)大便不成形,伴有粘液或膿血便,毛發(fā)不同程度的失去光澤,反應(yīng)遲鈍,精神萎靡,活動(dòng)減少,體重減輕。經(jīng)治療后,潰腸寧方組與模型組相比較:大鼠的一般情況明顯好轉(zhuǎn),體重增加,活動(dòng)靈敏,食欲好轉(zhuǎn),大便成形,無粘液及膿血。2.大鼠結(jié)腸中tlr2的含量與空白對照組比較,模型組大鼠tlr2表達(dá)顯著增高,具有非常顯著性差異(p0.01);與模型組相比較,潰腸寧方組可降低大鼠結(jié)腸tlr2的含量,有明顯顯著性差異(p0.01);與柳氮磺胺吡啶組比較,潰腸寧方組大鼠結(jié)腸粘膜tlr2含量與之無明顯差異。(p0.05)。3.大鼠結(jié)腸中nf-κb的含量與空白對照組比較,模型組大鼠核因子-κb表達(dá)顯著增高,具有較明顯的差異(p0.01);與模型組相比,潰腸寧方組可明顯降低大鼠結(jié)腸nf-κb的含量,有十分顯著性差異(p0.01);與柳氮磺胺吡啶組比較,潰腸寧方組大鼠結(jié)腸粘膜nf-κb與之無明顯差異。(p0.05)。4.大鼠結(jié)腸中ikk-β的表達(dá)量與空白對照組比較,模型組大鼠結(jié)腸中ikk-β表達(dá)顯著增高,具有非常顯著性差異(p0.01);與模型組相比較,潰腸寧方組可降低大鼠結(jié)腸ikk-β的含量,有顯著性差異(p0.01);潰腸寧方組與西藥治療組比較無顯著性差異(p0.05)。5.tnf-α在大鼠結(jié)腸中的表達(dá)變化與空白對照組比較,模型組大鼠結(jié)腸中tnf-α表達(dá)顯著增高,具有明顯顯著性差異(p0.01);與模型組相比較,潰腸寧方組可降低大鼠結(jié)腸tnf-α的含量,有顯著性差異(p0.01);潰腸寧方組大鼠結(jié)腸粘膜tnf-α含量與西藥組比較降低,具有顯著差異(p0.01)。6.il-13在大鼠結(jié)腸中的表達(dá)變化與空白對照組比較,模型組大鼠結(jié)腸中il-13表達(dá)顯著降低,具有明顯顯著性差異(p0.01);與模型組相比較,潰腸寧方組可顯著增加大鼠結(jié)腸中il-13的含量,有顯著性差異(p0.01);潰腸寧方組與西藥組比較,大鼠結(jié)腸粘膜中il-13含量顯著增加,具有顯著差異(p0.01)。7.il-1β在大鼠結(jié)腸中的表達(dá)變化與空白對照組比較大鼠結(jié)腸粘膜中il-1β表達(dá),模型組顯著增高,具有相當(dāng)顯著的差異(p0.01);與模型組相比較,潰腸寧方組可降低大鼠結(jié)腸il-1β的含量,有顯著性差異(p0.01);潰腸寧方組大鼠結(jié)腸粘膜中il-1β含量比西藥組顯著性降低,具有明顯的差異(p0.01)。結(jié)論1潰腸寧方對潰潰瘍性結(jié)腸炎的療效確切,本課題uc模型建立成功,潰腸寧方可抑制uc的炎性浸潤,并促進(jìn)結(jié)腸粘膜的修復(fù),起到治療uc的作用。2潰腸寧方可降低uc大鼠結(jié)腸粘膜中tlr2的表達(dá)水平,調(diào)節(jié)腸道炎癥介質(zhì)的產(chǎn)量及免疫反應(yīng),減輕uc大鼠結(jié)腸粘膜的損傷程度,tlr-2可能是潰腸寧方治療uc大鼠過程中較重要的靶位。3潰腸寧方可抑制uc大鼠模型中過度激活的nf-κb,nf-κb的表達(dá)水平在一定程度上可反應(yīng)uc的粘膜損害程度。潰腸寧方可有效下調(diào)nf-κb的表達(dá)水平,并可減輕其結(jié)腸粘膜的炎癥反應(yīng),這可能為本方治療uc大鼠的機(jī)理之一。4潰腸寧方可下調(diào)uc大鼠結(jié)腸粘膜中ikk-β的表達(dá)量,這可能是潰腸寧方抑制nf-κb的活性,治療uc的作用機(jī)理之一。5潰腸寧方可降低結(jié)腸中tnf-α的含量,從而減輕結(jié)腸粘膜的損傷。6潰腸寧方可增加UC大鼠結(jié)腸組織中IL-13的含量,從而促進(jìn)結(jié)腸損傷粘膜的修復(fù)。7潰腸寧方可降低結(jié)腸中IL-1β的含量,進(jìn)而減輕結(jié)腸粘膜的損傷,抑制炎癥反應(yīng)的發(fā)生發(fā)展。
【關(guān)鍵詞】：潰腸寧方 潰瘍性結(jié)腸炎 大鼠模型 實(shí)驗(yàn)研究 NF-κB TLR2 IKK-β TNF-α IL-13 IL-1β
【學(xué)位授予單位】：湖北中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R285.5
【目錄】：

• 摘要5-9
• ABSTRACT9-13
• 縮略詞表13-14
• 前言14-16
• 實(shí)驗(yàn)研究16-24
• 1. 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物16
• 2. 實(shí)驗(yàn)試劑16-17
• 3. 實(shí)驗(yàn)方法17-24
• 4. 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法24
• 實(shí)驗(yàn)結(jié)果24-28
• 1. 大鼠一般情況觀察結(jié)果24
• 2. 各項(xiàng)指標(biāo)檢測結(jié)果24-28
• 理論研究28-51
• （一）祖國醫(yī)學(xué)對應(yīng)西醫(yī)命名潰瘍性結(jié)腸炎相關(guān)的文獻(xiàn)研究28-33
• 1 古代醫(yī)籍有關(guān)潰瘍性結(jié)腸炎的相關(guān)認(rèn)識(shí)與研究28-31
• 2 現(xiàn)代中醫(yī)對UC發(fā)病機(jī)制的認(rèn)識(shí)31-33
• 3 現(xiàn)代中醫(yī)對潰瘍性結(jié)腸炎的辨證分型33
• （二）現(xiàn)代醫(yī)學(xué)對潰瘍性結(jié)腸炎發(fā)病機(jī)制的相關(guān)研究33-38
• 1 結(jié)腸粘膜屏障功能與炎癥的發(fā)生33-34
• 2 結(jié)腸粘膜改變與潰瘍性結(jié)腸炎發(fā)生的相關(guān)研究34-38
• （三）中西醫(yī)治療潰瘍性結(jié)腸炎的相關(guān)研究38-51
• 1 現(xiàn)代醫(yī)學(xué)防治潰瘍性結(jié)腸炎的研究進(jìn)展38-42
• 2 UC的中醫(yī)治療42-48
• 3 中醫(yī)藥治療潰瘍性結(jié)腸炎的相關(guān)實(shí)驗(yàn)研究48-51
• 討論51-56
• 1 潰腸寧的立法依據(jù)及方藥分析51-53
• 1.1 潰腸寧的立法依據(jù)51-52
• 1.2 潰腸寧的方藥分析52-53
• 2 潰腸寧對UC的治療作用機(jī)制探討53-56
• 2.1 潰腸寧對機(jī)體免疫力的調(diào)節(jié)作用53-54
• 2.2 潰腸寧對腸道菌群的調(diào)節(jié)作用54-55
• 2.3 腸寧對UC患者精神心理的調(diào)節(jié)55
• 2.4 改善微循環(huán)，，促進(jìn)結(jié)腸粘膜修復(fù)55-56
• 結(jié)語56-57
• 參考文獻(xiàn)57-63
• 附錄63-66
• 致謝66

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前9條

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中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前1條

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本文編號：832670