發(fā)布時間：2017-09-11 19:36

  本文關鍵詞：潰腸寧對潰瘍性結腸炎大鼠結腸粘膜TLR2、NF-κB、IKK-β及IL-13等細胞因子影響的研究

  更多相關文章： 潰腸寧方 潰瘍性結腸炎 大鼠模型 實驗研究 NF-κB TLR2 IKK-β TNF-α IL-13 IL-1β

【摘要】：研究目的通過運用三硝基苯磺酸灌腸,建立大鼠潰瘍性結腸炎動物模型,研究中藥方劑潰腸寧對潰瘍性結腸炎模型大鼠結腸粘膜TLR2、NF-κB、IKK-β和細胞因子IL-13、TNF-α和IL-1β等的影響,探尋潰腸寧治療潰瘍性結腸炎的機理機制,可為其更深入的藥理及相應的臨床研究奠定下確切的實驗方面的基礎。研究方法階段一:實驗大鼠分組:SPF級成年Wistar大鼠40只,雌雄各半,體重(170-200)g,隨機分配成4組,分別為空白對照組、模型組、中藥組(潰腸寧組)、西藥組(柳氮磺胺吡啶組),各組10只。階段二:潰瘍性結腸炎的大鼠模型建立及給藥:采用TNBS復合50%乙醇法造模。除空白對照組,其他各組用戊巴比妥鈉麻醉大鼠后,將鈍頭導管從肛門插至距肛門8cm處,按80mg/kg三硝基苯磺酸(TNBS)復合50%的乙醇量緩慢灌腸,誘導急性結腸炎.15天后再次給予30 mg/kg TNBS溶液灌腸,造成復發(fā)性結腸炎。于第二次造模日,即第一次造模后16天開始灌胃給藥,正常組和模型組分別給予0.9%的生理鹽水1ml/100g灌胃,中藥組給予中藥方潰腸寧1ml/100g(1.35g/ml)灌胃,西藥組給予柳氮磺胺吡啶1ml/100g(0.03g/ml)灌胃。以上各組每日灌胃1次,連續(xù)7天。階段三:指標檢測:大鼠禁食24h,0.3%戊巴比妥鈉腹腔方式注射以麻醉大鼠,剖取全結腸以冰冷鹽水清洗完全,先以肉眼觀察大鼠結腸黏膜之充血、腫脹、潰瘍或穿孔流血等的病變情況,取1cm左右結腸組織于4%多聚甲酸固定,脫水后石蠟包埋切片,常規(guī)HE染色,光學顯微鏡下觀察結腸形態(tài)及組織學變化,剩下結腸組織運用免疫組化法(IHC-P)檢測NF-κB及Toll樣受體2的蛋白表達水平量,另外用Real-time PCR檢測IKK-β的基因表達變化,用酶聯反應吸附試驗(ELISA法)檢測大鼠結腸中腫瘤壞死因子α(TNF-α)、白介素1β(IL-1β)、白介素-13(il-13)的表達水平。研究結果1.大鼠一般情況空白對照組大鼠精神佳,毛發(fā)濃密白亮有光澤,飲食狀況佳、活動正常,大便成形,無膿血便和粘液便,體重明顯增加。余三組于第二次造模出現大便不成形,伴有粘液或膿血便,毛發(fā)不同程度的失去光澤,反應遲鈍,精神萎靡,活動減少,體重減輕。經治療后,潰腸寧方組與模型組相比較:大鼠的一般情況明顯好轉,體重增加,活動靈敏,食欲好轉,大便成形,無粘液及膿血。2.大鼠結腸中tlr2的含量與空白對照組比較,模型組大鼠tlr2表達顯著增高,具有非常顯著性差異(p0.01);與模型組相比較,潰腸寧方組可降低大鼠結腸tlr2的含量,有明顯顯著性差異(p0.01);與柳氮磺胺吡啶組比較,潰腸寧方組大鼠結腸粘膜tlr2含量與之無明顯差異。(p0.05)。3.大鼠結腸中nf-κb的含量與空白對照組比較,模型組大鼠核因子-κb表達顯著增高,具有較明顯的差異(p0.01);與模型組相比,潰腸寧方組可明顯降低大鼠結腸nf-κb的含量,有十分顯著性差異(p0.01);與柳氮磺胺吡啶組比較,潰腸寧方組大鼠結腸粘膜nf-κb與之無明顯差異。(p0.05)。4.大鼠結腸中ikk-β的表達量與空白對照組比較,模型組大鼠結腸中ikk-β表達顯著增高,具有非常顯著性差異(p0.01);與模型組相比較,潰腸寧方組可降低大鼠結腸ikk-β的含量,有顯著性差異(p0.01);潰腸寧方組與西藥治療組比較無顯著性差異(p0.05)。5.tnf-α在大鼠結腸中的表達變化與空白對照組比較,模型組大鼠結腸中tnf-α表達顯著增高,具有明顯顯著性差異(p0.01);與模型組相比較,潰腸寧方組可降低大鼠結腸tnf-α的含量,有顯著性差異(p0.01);潰腸寧方組大鼠結腸粘膜tnf-α含量與西藥組比較降低,具有顯著差異(p0.01)。6.il-13在大鼠結腸中的表達變化與空白對照組比較,模型組大鼠結腸中il-13表達顯著降低,具有明顯顯著性差異(p0.01);與模型組相比較,潰腸寧方組可顯著增加大鼠結腸中il-13的含量,有顯著性差異(p0.01);潰腸寧方組與西藥組比較,大鼠結腸粘膜中il-13含量顯著增加,具有顯著差異(p0.01)。7.il-1β在大鼠結腸中的表達變化與空白對照組比較大鼠結腸粘膜中il-1β表達,模型組顯著增高,具有相當顯著的差異(p0.01);與模型組相比較,潰腸寧方組可降低大鼠結腸il-1β的含量,有顯著性差異(p0.01);潰腸寧方組大鼠結腸粘膜中il-1β含量比西藥組顯著性降低,具有明顯的差異(p0.01)。結論1潰腸寧方對潰潰瘍性結腸炎的療效確切,本課題uc模型建立成功,潰腸寧方可抑制uc的炎性浸潤,并促進結腸粘膜的修復,起到治療uc的作用。2潰腸寧方可降低uc大鼠結腸粘膜中tlr2的表達水平,調節(jié)腸道炎癥介質的產量及免疫反應,減輕uc大鼠結腸粘膜的損傷程度,tlr-2可能是潰腸寧方治療uc大鼠過程中較重要的靶位。3潰腸寧方可抑制uc大鼠模型中過度激活的nf-κb,nf-κb的表達水平在一定程度上可反應uc的粘膜損害程度。潰腸寧方可有效下調nf-κb的表達水平,并可減輕其結腸粘膜的炎癥反應,這可能為本方治療uc大鼠的機理之一。4潰腸寧方可下調uc大鼠結腸粘膜中ikk-β的表達量,這可能是潰腸寧方抑制nf-κb的活性,治療uc的作用機理之一。5潰腸寧方可降低結腸中tnf-α的含量,從而減輕結腸粘膜的損傷。6潰腸寧方可增加UC大鼠結腸組織中IL-13的含量,從而促進結腸損傷粘膜的修復。7潰腸寧方可降低結腸中IL-1β的含量,進而減輕結腸粘膜的損傷,抑制炎癥反應的發(fā)生發(fā)展。
【關鍵詞】：潰腸寧方 潰瘍性結腸炎 大鼠模型 實驗研究 NF-κB TLR2 IKK-β TNF-α IL-13 IL-1β
【學位授予單位】：湖北中醫(yī)藥大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R285.5
【目錄】：

• 摘要5-9
• ABSTRACT9-13
• 縮略詞表13-14
• 前言14-16
• 實驗研究16-24
• 1. 實驗動物16
• 2. 實驗試劑16-17
• 3. 實驗方法17-24
• 4. 統(tǒng)計學方法24
• 實驗結果24-28
• 1. 大鼠一般情況觀察結果24
• 2. 各項指標檢測結果24-28
• 理論研究28-51
• （一）祖國醫(yī)學對應西醫(yī)命名潰瘍性結腸炎相關的文獻研究28-33
• 1 古代醫(yī)籍有關潰瘍性結腸炎的相關認識與研究28-31
• 2 現代中醫(yī)對UC發(fā)病機制的認識31-33
• 3 現代中醫(yī)對潰瘍性結腸炎的辨證分型33
• （二）現代醫(yī)學對潰瘍性結腸炎發(fā)病機制的相關研究33-38
• 1 結腸粘膜屏障功能與炎癥的發(fā)生33-34
• 2 結腸粘膜改變與潰瘍性結腸炎發(fā)生的相關研究34-38
• （三）中西醫(yī)治療潰瘍性結腸炎的相關研究38-51
• 1 現代醫(yī)學防治潰瘍性結腸炎的研究進展38-42
• 2 UC的中醫(yī)治療42-48
• 3 中醫(yī)藥治療潰瘍性結腸炎的相關實驗研究48-51
• 討論51-56
• 1 潰腸寧的立法依據及方藥分析51-53
• 1.1 潰腸寧的立法依據51-52
• 1.2 潰腸寧的方藥分析52-53
• 2 潰腸寧對UC的治療作用機制探討53-56
• 2.1 潰腸寧對機體免疫力的調節(jié)作用53-54
• 2.2 潰腸寧對腸道菌群的調節(jié)作用54-55
• 2.3 腸寧對UC患者精神心理的調節(jié)55
• 2.4 改善微循環(huán)，，促進結腸粘膜修復55-56
• 結語56-57
• 參考文獻57-63
• 附錄63-66
• 致謝66

【參考文獻】

中國期刊全文數據庫 前9條

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本文編號：832670