本文關(guān)鍵詞：葉酸干預(yù)對(duì)神經(jīng)管畸形鼠Pax3基因及H3K27me3的作用研究

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【摘要】：目的構(gòu)建全反式維甲酸(all-trans retinoic acid,ATRA)誘導(dǎo)的神經(jīng)管畸形鼠模型,了解神經(jīng)管畸形(neural tube defects,NTDs)形成過(guò)程中Pax3基因表達(dá)及H3K27三甲基化狀態(tài)的情況,明確葉酸干預(yù)對(duì)這一現(xiàn)象的影響,探討葉酸干預(yù)對(duì)神經(jīng)管畸形的預(yù)防作用及可能的發(fā)生機(jī)制,為神經(jīng)管畸形的早期診療提供可靠的理論依據(jù)。方法1.動(dòng)物模型的建立:將18只性成熟健康雌性SD大鼠隨機(jī)均分為3組:正常組、畸形組、葉酸干預(yù)組。其中,葉酸干預(yù)組于孕前2周喂食葉酸添加飼料(60μg/kg),直至終止妊娠;畸形組、葉酸干預(yù)組于E10d時(shí)給予ATRA 100mg/kg一次性灌胃,正常組給予相同劑量橄欖油。2.形態(tài)學(xué)觀察:E15d剖宮取胎,對(duì)胎鼠進(jìn)行形態(tài)學(xué)觀察,記錄胚胎總數(shù)、活胎數(shù)、死胎數(shù)、吸收胎數(shù)、畸形胎數(shù)、正常胎數(shù),統(tǒng)計(jì)并分析伴發(fā)畸形率。3.病理學(xué)觀察:胚胎固定、梯度酒精脫水、二甲苯透明、石蠟包埋、常規(guī)切片、HE染色,顯微鏡下觀察各組胚胎病理學(xué)改變并攝影。4.血清葉酸、同型半胱氨酸(homocysteine,Hcy)的測(cè)定:孕鼠腹部麻醉,胸部常規(guī)消毒,心臟穿刺采血于離心管靜止30min后,以3000rpm離心,取上清。以磷酸鹽緩沖液10:1稀釋,分裝至100?l離心管上機(jī)檢測(cè)。5.Pax3基因表達(dá)量的測(cè)定:運(yùn)用Western bloting技術(shù)和QRT-PCR技術(shù)對(duì)各組胚胎組織Pax3基因表達(dá)量進(jìn)行定量分析。6.H3K27me3表達(dá)的檢測(cè):運(yùn)用免疫組織化學(xué)技術(shù)和Western bloting技術(shù)對(duì)各組胚胎組織H3K27me3表達(dá)量進(jìn)行定性、定量分析。結(jié)果1.胎鼠畸形率統(tǒng)計(jì)顯示正常組胎鼠未見(jiàn)畸形,畸形組神經(jīng)管畸形的發(fā)生率98.61%,葉酸干預(yù)組35.09%。其中,正常組胎鼠總數(shù)為61只,活胎60只,死胎1只,正常胎61只,未見(jiàn)吸收胎及畸形胎。畸形組總數(shù)72只,活胎72只,畸形胎71,其中包括吸收胎2只,正常胎1只。葉酸干預(yù)組總數(shù)57只,活胎57只,正常胎37只,畸形胎20只,未見(jiàn)吸收胎;2.病理學(xué)觀察可發(fā)現(xiàn)正常組胎鼠發(fā)育正常,組織結(jié)構(gòu)層次清晰。畸形組顯性脊柱裂胎鼠背側(cè)皮膚及皮下組織出現(xiàn)卵圓形缺損,深部脊髓結(jié)構(gòu)紊亂,向外膨出,常伴有炎性細(xì)胞浸潤(rùn)。葉酸干預(yù)組脊柱裂位置較畸形組低,缺損面積小,損害程度低;3.正常組、畸形組、葉酸干預(yù)組孕鼠血清葉酸含量分別(62.350±10.678)ng/ml、(46.650±6.143)ng/ml、(117.375±6.564)ng/ml,血清Hcy含量分別為(2.875±0.419)μmol/l、(4.825±0.448)μmol/l、(3.500±0.265)μmol/l;4.免疫組化陽(yáng)性結(jié)果顯示,正常組有(-)表達(dá)2例,(+)表達(dá)10例;畸形組(++)表達(dá)1例,(+++)表達(dá)11例;葉酸干預(yù)組(++)表達(dá)9例,(+++)表達(dá)3例,正常組H3K27me3處于低表達(dá)狀態(tài),而畸形組呈現(xiàn)強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá)(P0.05)。葉酸干預(yù)組表達(dá)量比畸形組有所下降,但是并沒(méi)有表現(xiàn)出差異性,與正常組相比,差異性明顯,有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);5.Western bloting蛋白檢測(cè)顯示畸形組Pax3基因表達(dá)量顯著降低,而葉酸干預(yù)組表達(dá)量明顯上調(diào),并恢復(fù)至正常水平,H3K27三甲基化水平呈現(xiàn)負(fù)相關(guān)性;6.QRT-PCR檢測(cè)Pax3基因表達(dá)量所得結(jié)果與Western bloting蛋白檢測(cè)結(jié)果呈現(xiàn)一致性。結(jié)論1.葉酸能夠有效降低全反式維甲酸誘導(dǎo)的鼠神經(jīng)管畸形發(fā)生率;2.神經(jīng)管畸形鼠中Pax3基因表達(dá)下調(diào),H3K27三甲基化水平升高,葉酸干預(yù)可以有效糾正這一現(xiàn)象;3.神經(jīng)管畸形的發(fā)生及葉酸的保護(hù)與Pax3基因表達(dá)及H3K27三甲基化狀態(tài)存在緊密的聯(lián)系。
【關(guān)鍵詞】：神經(jīng)管畸形 葉酸 全反式維甲酸 Pax3 H3K27me3
【學(xué)位授予單位】：寧夏醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R715.3
【目錄】：

• 摘要4-6
• ABSTRACT6-9
• 中英文縮略詞9-13
• 前言13-17
• 材料與方法17-28
• 1 實(shí)驗(yàn)材料與儀器17-20
• 1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物17
• 1.2 主要儀器與設(shè)備17-18
• 1.3 實(shí)驗(yàn)藥品與試劑18-19
• 1.4 試劑的配制19-20
• 2 實(shí)驗(yàn)方法20-28
• 2.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分組及模型構(gòu)建20
• 2.2 組織標(biāo)本制備20
• 2.3 實(shí)驗(yàn)標(biāo)本處理20-27
• 2.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理27-28
• 結(jié)果28-37
• 1 胎鼠形態(tài)學(xué)觀察及畸形率統(tǒng)計(jì)結(jié)果28-29
• 1.1 胎鼠形態(tài)學(xué)觀察及描述28-29
• 1.2 胎鼠畸形發(fā)生率29
• 2 孕鼠血清葉酸、Hcy含量29-30
• 2.1 孕鼠血清葉酸含量29-30
• 2.2 孕鼠血清Hcy含量30
• 3 病理學(xué)觀察30-33
• 3.1 神經(jīng)管組織切片HE染色30-31
• 3.2 神經(jīng)管組織H3K27me3免疫組化染色31-33
• 4 Western bloting檢測(cè)結(jié)果33-35
• 5 Pax3基因熒光定量PCR檢測(cè)結(jié)果35-37
• 討論37-42
• 結(jié)論42-43
• 參考文獻(xiàn)43-48
• 綜述48-57
• 綜述參考文獻(xiàn)54-57
• 致謝57-58
• 個(gè)人簡(jiǎn)介58

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前4條

1 隋淑娟;;同型半胱氨酸的研究進(jìn)展[J];中國(guó)醫(yī)療前沿;2010年20期

2 丁媛元,李曉紅;神經(jīng)管畸形的預(yù)防[J];中國(guó)優(yōu)生與遺傳雜志;2004年05期

3 張化民;;血液同型半胱氨酸測(cè)定在急性腦血管病的初步研究[J];臨床急診雜志;2002年01期

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本文編號(hào)：756687