本文關(guān)鍵詞：三黃益腎膠囊對糖尿病大鼠腎臟基質(zhì)金屬蛋白酶（MMP-9）及腫瘤壞死因子（TNF-α）影響的實驗研究

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【摘要】：三黃益腎膠囊(制劑準字號:Z20050795)是滄州中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院院內(nèi)制劑,用于早期糖尿病腎病臨床,前期已進行了部分作用機制的研究,本課題是在前期研究的基礎上,進行作用機制的深入研究。目的:觀察三黃益腎膠囊對糖尿病大鼠腎臟基質(zhì)金屬蛋白酶-9(MMP-9)及腫瘤壞死因子-α(TNF-α)的影響,從而了解基于此方面的作用機制,為臨床應用三黃益腎膠囊治療糖尿病腎病提供理論依據(jù)。方法:將60只清潔級成年雄性Wistar大鼠隨機分為兩組,正常組10只,造模組50只。造模組大鼠禁食12h后,一次性腹腔注射鏈脲佐菌素(STZ)60mg/kg(STZ臨用前用0.1M檸檬酸鈉緩沖液配成濃度為1%、pH=4.2的溶液),正常組腹腔注射等量的檸檬酸鈉緩沖液。72h后尾靜脈取血,血糖值≥16.7mmol/L,確定為糖尿病大鼠。造模成功后大鼠隨機抽取40只,分為模型組(10只)及三黃益腎膠囊低劑量治療組(10只)、三黃益腎膠囊中劑量治療組(10只)、三黃益腎膠囊高劑量治療組(10只)。成模后一周,中藥治療組劑量按人體-大鼠體表面積比值表換算出大鼠的等效劑量。三黃益腎膠囊低劑量治療組給予0.4g/(kg·d)灌胃、三黃益腎膠囊中劑量治療組給予0.8g/(kg·d)灌胃、三黃益腎膠囊高劑量治療組給予1.6g/(kg·d)灌胃,每日灌胃1次,連續(xù)8周。正常組和模型組每日給予同等劑量生理鹽水灌胃。實驗期間大鼠自由飲水,喂標準飼料,環(huán)境溫度為22℃~26℃,濕度45%-65%,實驗期間未使用胰島素和其它降糖藥物。給藥8周后,尾靜脈取血測血糖。腹腔注射麻醉大鼠,腹部正中切口,腹主動脈采血,離心分離血清。全自動生化分析儀檢測血清甘油三脂(TG)、膽固醇(TC)、肌酐(SCr)、尿素氮(BUN)、血清C反應蛋白(CRP)。大鼠取血后取雙腎,去除腎包膜及腎門結(jié)締組織并用生理鹽水洗凈后稱重,得出腎重/體重指數(shù)(腎重/體重×1000)。將腎臟切割成小于0.5cm×0.5cm×0.1cm的組織塊,置于4%中性福爾馬林溶液中固定、脫水、石蠟包埋、切片厚4μm,采用免疫組織化學法檢測mmp-9及tnf-α,蘇木精-伊紅(hematoxylin-eosinstaininghe)染色在光鏡下觀察腎小球及腎小管間質(zhì)的病理變化。應用spss16.0分析軟件進行統(tǒng)計處理,檢驗水準α=0.05。計量資料數(shù)據(jù)以?x±sd表示,組間比較采用單因素方差分析,組內(nèi)治療前后比較采用配對t檢驗。計數(shù)資料用x2檢驗。結(jié)果:1大鼠一般狀態(tài)的影響正常組大鼠毛色純白,精神狀態(tài)良好,飲水量、進食量及尿量均正常,動作靈活。各糖尿病組大鼠毛色晦暗無光澤,明顯消瘦,精神狀態(tài)較差,飲水量、進食量及尿量明顯增多,活動減少。2體重的變化造模前各組大鼠的體重相比無差異(p0.05);治療前,與正常組相比,模型組及三黃益腎膠囊低、中、高劑量治療組體重無明顯變化(p0.05),模型組及三黃益腎膠囊低、中、高劑量治療組間大鼠體重均無明顯差異(p0.05);經(jīng)灌胃治療8周后,與正常組相比,模型組及三黃益腎膠囊低、中、高劑量治療組體重明顯降低(p0.05),模型組及三黃益腎膠囊低、中、高劑量治療組間體重比較無差異(p0.05);正常組大鼠治療后體重比治療前明顯增加(p0.05),模型組及三黃益腎膠囊低、中、高劑量治療組間大鼠治療后體重比治療前明顯降低(p0.05)。3對腎重/體重比的影響經(jīng)灌胃治療8周后,與正常組比較,模型組及三黃益腎膠囊低、中、高劑量治療組腎重/體重比明顯升高(p0.05);與模型組比較,三黃益腎膠囊低劑量治療組腎重/體重比無明顯差別(p0.05);中、高劑量治療組腎重/體重比明顯降低(p0.05);與三黃益腎膠囊低劑量治療組比較,中、高劑量治療組腎重/體重明顯降低(p0.05);中、高劑量治療組比較腎重/體重比無明顯差別(p0.05)。4生化指標的影響4.1血糖的影響治療前糖尿病各組大鼠血糖與正常組比較,均明顯升高(p0.05),而糖尿病各組間血糖差異無統(tǒng)計學意義(p0.05),具有可比性。經(jīng)灌胃治療8周后,各組治療前后血糖相比變化無明顯差異(p0.05);模型組及三黃益腎膠囊低、中、高劑量治療組組間對比變化無明顯差異(p0.05),與正常組相比較有顯著差異(p0.05)。4.2血清膽固醇、甘油三脂的影響8周后,與正常組比較,模型組、治療組各組大鼠血清甘油三脂、膽固醇水平明顯升高(p0.05)。三黃益腎膠囊低、中、高劑量治療組與模型組比較,甘油三脂、膽固醇水平無明顯差異(p0.05)。模型組、三黃益腎膠囊低、中、高劑量治療組間比較膽固醇、甘油三脂無明顯差異(p0.05)。三黃益腎膠囊低劑量治療組與三黃益腎膠囊中、高劑量治療組比較,甘油三脂、膽固醇水平無明顯差異(p0.05)。三黃益腎膠囊中、高劑量治療組間比較,甘油三脂、膽固醇水平無明顯差異(p0.05)。4.3血清肌酐、尿素氮的影響8周后,與正常組比較,模型組大鼠血清肌酐、尿素氮水平明顯升高(p0.05);三黃益腎膠囊低劑量治療組血清肌酐、尿素氮水平明顯升高(p0.05);三黃益腎膠囊中、高劑量治療組血清肌酐、尿素氮水平無明顯差異(p0.05)。與模型組比較,三黃益腎膠囊低劑量治療組血清肌酐、尿素氮水平無明顯差異(p0.05);三黃益腎膠囊中、高劑量治療組血清肌酐、尿素氮水平明顯降低(p0.05)。與三黃益腎膠囊低劑量治療組比較,三黃益腎膠囊中、高劑量治療組血清肌酐、尿素氮水平有明顯差異(p0.05)。三黃益腎膠囊中、高劑量治療組間比較,血清肌酐、尿素氮水平無明顯差異(p0.05)。4.4血清超敏c反應蛋白的影響8周后,與正常組比較,模型組大鼠血清c反應蛋白水平明顯升高(p0.05);三黃益腎膠囊低劑量治療組血清c反應蛋白水平明顯升高(p0.05);三黃益腎膠囊中、高劑量治療組血清c反應蛋白水平無明顯差異(p0.05)。與模型組比較,三黃益腎膠囊低劑量治療組血清c反應蛋白水平無明顯差異(p0.05);三黃益腎膠囊中、高劑量治療組血清c反應蛋白水平明顯降低(p0.05)。與三黃益腎膠囊低劑量治療組比較,三黃益腎膠囊中、高劑量治療組血清c反應蛋白水平明顯降低(p0.05)。三黃益腎膠囊中、高劑量治療組間比較,血清c反應蛋白水平無明顯差異(p0.05)。5大鼠腎臟mmp-9及tnf-α的影響mmp-9在正常大鼠腎臟正常表達,與正常組大鼠比較,模型組表達明顯降低(p0.05);三黃益腎膠囊低劑量治療組表達明顯降低(p0.05);三黃益腎膠囊中、高劑量治療組表達無明顯差異(p0.05)。與模型組大鼠比較,三黃益腎膠囊低劑量治療組表達無明顯差異(p0.05);中、高劑量治療組表達明顯升高(p0.05)。與三黃益腎膠囊低劑量治療組比較,中、高劑量治療組表達明顯升高(p0.05)。三黃益腎膠囊中、高劑量治療組間比較,表達無明顯差異(p0.05)。tnf-α在正常大鼠腎臟有少量表達,與正常組大鼠比較,模型組表達明顯升高(p0.05);三黃益腎膠囊低劑量治療組表達明顯升高(p0.05);三黃益腎膠囊中、高劑量治療組表達無明顯差異(p0.05)。與模型組比較,三黃益腎膠囊低劑量治療組表達無明顯差異(p0.05);三黃益腎膠囊中、高劑量治療組表達明顯降低(p0.05)。與三黃益腎膠囊低劑量治療組比較,三黃益腎膠囊中、高劑量治療表達明顯降低(p0.05)。三黃益腎膠囊中、高劑量治療組組間比較無明顯差異(p0.05)。6腎臟組織病理學的觀察光鏡下顯示,正常組大鼠腎臟腎小球、腎小管結(jié)構(gòu)正常,腎間質(zhì)無炎性細胞浸潤,血管無擴張充血;模型組腎小球內(nèi)皮細胞腫脹、系膜細胞增多;腎小管上皮腫脹,甚至壞死;腎間質(zhì)有炎性細胞浸潤,血管擴張充血。三黃益腎膠囊低劑量治療組大鼠腎小球系膜細胞及基質(zhì)輕度彌漫性增生,局灶節(jié)段性加重,內(nèi)皮細胞增生、腫脹,基底膜空泡變性;腎小管上皮空泡及顆粒變性,灶狀萎縮,腎間質(zhì)灶狀淋巴單核細胞浸潤,灶狀纖維化,小動脈管壁輕度增厚,與模型組比較無明顯變化。三黃益腎膠囊中、高劑量治療組腎小球系膜細胞及基質(zhì)輕度節(jié)段性增生,上皮細胞未見著變;腎小管上皮空泡及顆粒變性,未見萎縮,腎間質(zhì)小灶淋巴單核細胞浸潤,未見纖維化,小動脈管壁未見增厚,但中、高劑量組間比較無明顯差異。結(jié)論:1三黃益腎膠囊對紊亂的糖脂代謝無治療作用。2三黃益腎膠囊能夠降低血尿素氮、肌酐、血清c反應蛋白的水平。3三黃益腎膠囊能夠抑制mmp-9在腎臟表達的下降,抑制tnf-α在腎臟的表達,減輕糖尿病大鼠腎臟的肥大。4本實驗表明三黃益腎膠囊中、高劑量對糖尿病腎病有治療作用,而中、高劑量治療結(jié)果組間無明顯差異,說明其治療作用存在劑量依賴性,但不存在線性關(guān)系,從藥物經(jīng)濟學的角度考量,中劑量為臨床上合適的治療劑量。5本實驗復制的糖尿病大鼠模型8周后血尿素氮、肌酐升高,血清CRP明顯升高,腎臟MMP-9表達降低,TNF-α表達升高,但經(jīng)三黃益腎膠囊治療8周后血尿素氮、肌酐明顯下降,腎損害減輕,血清CRP明顯下降,腎臟MMP-9表達上升,TNF-α表達下降,從而表明三黃益腎膠囊通過以上機制延緩糖尿病大鼠的腎臟損害。
【關(guān)鍵詞】：糖尿病腎病 三黃益腎膠囊 基質(zhì)金屬蛋白酶-9(MMP-9) 腫瘤壞死因子-α(TNF-α) 血清C反應蛋白(CRP)
【學位授予單位】：河北醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R285.5
【目錄】：

• 中文摘要4-9
• 英文摘要9-16
• 英文縮寫16-17
• 前言17-18
• 材料與方法18-21
• 結(jié)果21-25
• 附圖25-35
• 附表35-40
• 討論40-44
• 結(jié)論44
• 參考文獻44-47
• 綜述 中醫(yī)藥治療糖尿病腎病的研究進展47-54
• 參考文獻51-54
• 致謝54-55
• 個人簡歷55

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本文編號：725797