本文關(guān)鍵詞：五子衍宗丸對幼年雄性大鼠睪丸Ki67、AR表達以及性激素的影響

  更多相關(guān)文章： 五子衍宗丸 雄激素受體 雄性生殖 支持細胞

【摘要】：研究背景和目的：近年來,男性不育的比例逐年上升,全世界不育夫婦約占育齡夫婦的15%,其中男方因素約占50%。多種原因可以導(dǎo)致男性不育,其中無精,少精,弱精或者畸形精子均屬精子發(fā)生障礙中最常見的原因。中醫(yī)理論認為腎藏精,主生殖,腎精的充盛與否決定著生殖能力的強弱。歷代醫(yī)家都很重視補腎填精法在治療男性生殖系統(tǒng)疾病中的重要作用,認為腎精虧虛是導(dǎo)致男性生殖能力減弱的主要原因。五子衍宗丸具有補腎填精、促進生殖的功能,由枸杞子、覆盆子、車前子、菟絲子、五味子組成,是中醫(yī)治療男性不育的經(jīng)典方劑。目前臨床和動物實驗研究以不育患者或者各種造模后的實驗動物作為研究對象,探討病理狀態(tài)下五子衍宗丸對生殖功能異常的改善或治療作用,而生理狀態(tài)下,五子衍宗丸能否促進幼年大鼠生殖功能發(fā)育成熟還不清楚。此外,前期的研究多局限于精子功能的概述,比如精子的數(shù)量和活動度,而尚未發(fā)現(xiàn)從曲細精管中支持細胞與生精細胞功能的變化來探討幼年大鼠睪丸生殖功能的研究。本研究的目的是以幼年雄性大鼠為研究對象,從FSH、LH、T的變化,Ki67、AR和CK-18的變化以及睪丸間質(zhì)細胞、精子細胞變化來探討五子衍宗丸是否能促進幼年大鼠的生殖功能,為腎主生殖的中醫(yī)理論提供現(xiàn)代科學(xué)依據(jù)。研究方法：實驗一：(1)20d齡Wistar雄性大鼠40只,隨機分為5組：20d組、30d組、40d組、50d組、60d組,每組8只。給予正常的飲食和水,分別在第Od、10d、20d、30d、40d后腹主動脈取血、睪丸取材。(2)放射性免疫法測定大鼠血清激素水平：卵泡刺激素(FSH)、黃體生成素(LH)、睪酮(T)。(3) RT-PCR:Ki67、AR、CK-18基因表達。實驗二：(1)20d齡Wistar雄性大鼠16只,隨機分為正常組和給藥組2組,每組8只。給藥組每天給予五子衍宗丸灌胃,正常組給予等體積生理鹽水,連續(xù)灌胃10d,每天一次。10%水合氯醛麻醉后,腹主動脈取血,雙側(cè)睪丸取材。(2)放射性免疫法測定大鼠血清激素水平：FSH、LH、T。(3)HE染色：觀察睪丸曲細精管內(nèi)形態(tài),并做形態(tài)計量。(4)免疫組織化學(xué)方法：Ki67蛋白的表達。(5) RT-PCR:CK-18、AR、Ki67基因表達。(6) Western-Blot:CK-18、AR蛋白的表達。研究結(jié)果：實驗一：(1)血清激素檢測結(jié)果：與20d組相比,30d組血清T水平顯著降低(P0.05),40d組、50d組、60d組均沒有明顯變化(P0.05)；與20d組相比,30d組、40d組、50d組、60d組血清FSH水平和LH水平均沒有明顯變化(P0.05)。(2) RT-PCR檢測結(jié)果：與20d組相比,30d組Ki67mRNA的表達沒有明顯變化(P0.05),40d組、50d組、60d組Ki67mRNA的表達明顯降低,(P0.05)；與20d組相比,30d組、40d組、50d組、60d組ARmRNA和CK-18mRNA的表達均明顯降低(P0.05)。實驗二：(1)血清激素檢測結(jié)果：與正常組相比,給藥組血清T水平顯著升高(P0.05)；給藥組血清FSH水平和LH水平有升高的趨勢(P0.05)。(2)HE染色結(jié)果：30d齡大鼠均沒有變形的精子細胞和精子出現(xiàn),其曲細精管出現(xiàn)兩種明顯不同的形態(tài)：Ⅰ型只包含有精原細胞和精母細胞；Ⅱ型還出現(xiàn)了圓形的精子細胞。與正常組相比,給藥組Ⅰ型曲細精管占總曲細精管個數(shù)比明顯降低(P0.05)；Ⅱ型曲細精管占總曲細精管個數(shù)比明顯升高(P0.05)；Ⅰ型和Ⅱ型曲細精管平均細胞個數(shù)均明顯升高(P0.05)；間質(zhì)細胞平均個數(shù)明顯升高(P0.05)。(3)免疫組化結(jié)果：Ⅰ型曲細精管中,Ki67主要在精原細胞和初級精母細胞表達；而在Ⅱ型曲細精管中,Ki67主要在精原細胞中表達。和正常組比較,給藥組Ⅰ型和Ⅱ型曲細精管內(nèi)的Ki67表達水平都明顯升高(P0.05)。(4) RT-PCR檢測結(jié)果：與正常組相比,給藥組Ki67 mRNA和AR mRNA表達量明顯增高(P0.05),CK-18的表達沒有明顯變化(P0.05)。(5) Western blot檢測結(jié)果：與正常組比較,給藥組AR蛋白水平明顯升高(P0.05)；CK-18的蛋白水平?jīng)]有明顯變化(P0.05)。研究結(jié)論：(1)幼年雄性大鼠在發(fā)育過程中,可能通過T和AR的變化調(diào)控支持細胞的成熟和生精細胞的增殖,促進生殖功能的完善。其中雄性大鼠30d齡時可能是調(diào)控的關(guān)鍵時期。(2)五子衍宗丸的作用靶點之一在睪丸,可能通過促進未成熟睪丸間質(zhì)細胞的增殖,進而使睪酮合成增多。(3)五子衍宗丸在生理狀態(tài)下,可能通過上調(diào)T和AR水平,促進幼年雄性大鼠支持細胞發(fā)育,促進早期精原細胞和初級精母細胞增殖,從而促進雄性生殖功能。
【關(guān)鍵詞】：五子衍宗丸 雄激素受體 雄性生殖 支持細胞
【學(xué)位授予單位】：北京中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R285.5
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• ABSTRACT6-9
• 英文縮略詞表9-10
• 第一部分 文獻綜述10-29
• 綜述一 五子衍宗丸的藥理作用及臨床應(yīng)用研究進展10-21
• 1 五子衍宗丸的藥理作用10-13
• 2 五子衍宗丸的臨床應(yīng)用13-16
• 3 結(jié)語16-17
• 參考文獻17-21
• 綜述二 睪丸支持細胞的中西醫(yī)研究進展21-29
• 1 支持細胞的作用21-22
• 2 環(huán)境以及理化因素對支持細胞的損害22-24
• 3 中藥對支持細胞的作用24-25
• 4 結(jié)語25-26
• 參考文獻26-29
• 第二部分 實驗研究29-51
• 實驗一 幼年雄性大鼠發(fā)育過程中睪丸Ki67、AR表達以及性激素的變化29-37
• 前言29
• 1 材料及方法29-32
• 2 結(jié)果32-34
• 3 討論34-37
• 實驗二 五子衍宗丸對幼年雄性大鼠睪丸Ki67、AR表達以及性激素的影響37-51
• 前言37
• 1 材料及方法37-44
• 2 結(jié)果44-48
• 3 討論48-51
• 參考文獻51-54
• 結(jié)語54-55
• 致謝55-56
• 個人簡歷56

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 石之虎;廖曉崗;鄒聰;毛勝艷;范京川;;黃芪對鎘致大鼠睪丸支持細胞超微結(jié)構(gòu)及波形蛋白、E-鈣粘蛋白表達改變的保護作用[J];中國組織化學(xué)與細胞化學(xué)雜志;2012年03期

2 李軒;白勇;鐘樹懷;廖敦;張若愚;蕭漢達;;五子衍宗丸對不育患者附睪功能和精子活力的影響[J];光明中醫(yī);2009年07期

3 王志強;梁兵;黃耀全;;五子衍宗丸治療男性不育少弱精子癥的療效觀察[J];廣西醫(yī)科大學(xué)學(xué)報;2010年02期

4 余光菊;譚華儒;;九子生精湯治療腎精虧虛型少弱精子癥40例臨床研究[J];西部中醫(yī)藥;2013年01期

5 高雅靜;胡海翔;羅少波;徐少強;丁浩浩;張啟龍;沈傳運;謝亞蘭;;高功率微波輻射對雄性大鼠生殖系統(tǒng)的影響及補腎生精中藥復(fù)方的干預(yù)作用研究[J];中華中醫(yī)藥雜志;2014年09期

6 朱秀芬;王慧琴;朱志斌;;辨證、分期治療不孕癥的臨床觀察[J];北方藥學(xué);2014年05期

7 毛勝艷;廖曉崗;姜蓉;劉燕;姚志勇;;黃芪甲苷對鎘致大鼠支持細胞損傷的保護作用[J];激光雜志;2011年04期

8 楊阿民;劉保興;張圣強;謝春雨;李蘭群;周強;王傳航;姚懷國;;五子衍宗丸改善腎精虧虛大鼠支持細胞功能的機理研究[J];北京中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報;2010年06期

9 趙龍坡;徐錚;張梅;孫輝臣;湯菲;;枸杞、黃芪對大鼠睪丸支持細胞功能的影響[J];中華男科學(xué)雜志;2007年01期

10 郝偉玉;邵翠華;馮友亮;胡建聽;李強;王洪強;王沛濤;;低氧對原代支持細胞增殖能力和occludin蛋白表達的影響[J];中華男科學(xué)雜志;2013年01期

，

本文編號：714953