本文關(guān)鍵詞：力竭運動及鈍挫傷對大鼠骨骼肌衛(wèi)星細胞體外增殖及AXIN、GSK-3β含量的影響

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【摘要】：研究目的：研究力竭運動及鈍挫傷對大鼠骨骼肌衛(wèi)星細胞體外增殖及AXIN、GSK-3β含量的影響。研究方法：五周齡雄性SD大鼠24只,分為4組：對照組(Control,C);力竭運動即刻組(Exhaustive, EO);力竭運動后24h組(E24)；力竭運動后48h組(E48),一次性力竭下坡跑運動達到力竭狀態(tài)。另取18只SD大鼠,分為三組：鈍挫傷即刻組(contusion, Do);鈍挫傷后24h組(D24)；鈍挫傷后48h組(D48)。對照組、力竭運動組、鈍挫傷組于安靜狀態(tài)、末次力竭后、鈍挫傷后不同時間點,采用20%烏拉坦麻醉,宰殺后從腹主動脈取血5m1以制備血清,測定AXIN、GSK-3β含量的變化；取左側(cè)股四頭肌,一分為二,一份立即進行細胞培養(yǎng)實驗,另一份樣本液氮保存,測定AXIN、GSK-3β含量的變化。同時取左側(cè)腓腸肌用于冰凍切片,觀察肌纖維類型。另取新生鼠三只,亦取股四頭肌進行細胞培養(yǎng)實驗。研究結(jié)果：(1)肌衛(wèi)星細胞培養(yǎng)結(jié)果顯示：通過分離消化大鼠肌肉組織,可在體外培養(yǎng)獲得高純度具有成肌能力的肌衛(wèi)星細胞。培養(yǎng)初期階段,除新生鼠外各組的肌衛(wèi)星細胞增長速度較慢,到第五天時各組開始大量增殖,第七天時達到增殖的高峰,隨后增殖速度下降。各組培養(yǎng)之間結(jié)果比較可見,安靜對照組骨骼肌衛(wèi)星細胞含量最少,增殖速度緩慢；新生鼠的骨骼肌衛(wèi)星細胞含量最高,增殖速度最快；而鈍挫傷組的骨骼肌衛(wèi)星細胞數(shù)量明顯多于力竭運動組,增殖速度也快于力竭運動組。(2)ATP酶染色結(jié)果顯示：骨骼肌快肌纖維呈黑褐色,慢肌纖維呈灰白色；相同視角下慢肌纖維的橫切面積明顯小于快肌纖維橫切面積,并且力竭運動組的肌纖維密度大于鈍挫傷組。與對照組比較,相同視角下,力竭運動組I型肌纖維百分比明顯降低(P0.01),力竭運動組Ⅱ型肌纖維百分比明顯增加(P0.01)；鈍挫傷組Ⅰ型肌纖維百分比降低(P0.01),鈍挫傷組Ⅱ型肌纖維百分比增加(P0.01)。(3) Elisa結(jié)果顯示：力竭運動組、鈍挫傷組骨骼肌、血清中GSK-3β的含量與對照組相比較均顯著下降,且具有顯著性差異,而力竭各組、鈍挫傷各組之間無顯著性差異。研究結(jié)論：(1)力竭運動及鈍挫傷可使肌衛(wèi)星細胞激活增殖分化,數(shù)量增殖變多；并且鈍挫傷組的骨骼肌衛(wèi)星細胞增殖數(shù)量明顯多于力竭運動組,可能由于鈍挫傷的刺激更強所致。新生鼠肌衛(wèi)星細胞活性最強,細胞增殖情況明顯。(2)力竭運動組Ⅰ型肌纖維百分比降低,Ⅱ型肌纖維百分比增加；鈍挫傷組Ⅰ型肌纖維百分比降低,Ⅱ型肌纖維百分比增加,皆有顯著性差異,呈現(xiàn)“由慢變快”的趨勢。(3)與對照組相比,力竭運動組、鈍挫傷組的骨骼肌、血清中GSK-3β的含量均顯著下降,差異性顯著,力竭各組、鈍挫傷各組之間無顯著性差異。力竭運動、鈍挫傷可以下調(diào)AXIN、GSK-3β的含量,AXIN、GSK-3β可能在骨骼肌衛(wèi)星細胞激活及骨骼肌損傷修復(fù)中起負調(diào)節(jié)作用。
【關(guān)鍵詞】：力竭運動 鈍挫傷 肌衛(wèi)星細胞 軸蛋白 糖原合成酶激酶
【學位授予單位】：揚州大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：G804.7
【目錄】：

• 中文摘要2-4
• ABSTRACT4-6
• 縮略詞表6-10
• 前言10-11
• 第一部分 文獻綜述11-23
• 1 骨骼肌損傷與再生概述11-13
• 1.1 骨骼肌損傷的修復(fù)概述11
• 1.2 骨骼肌損傷的病理11-12
• 1.2.1 骨骼肌急性損傷的病理11
• 1.2.2 骨骼肌慢性損傷的病理11-12
• 1.3 力竭運動對骨骼肌超微結(jié)構(gòu)的影響12
• 1.4 鈍挫傷對骨骼肌超微結(jié)構(gòu)的影響12
• 1.5 骨骼肌損傷的修復(fù)12-13
• 2 骨骼肌衛(wèi)星細胞體外培養(yǎng)與骨骼肌損傷修復(fù)13-18
• 2.1 骨骼肌衛(wèi)星細胞概述13-14
• 2.2 骨骼肌衛(wèi)星細胞的培養(yǎng)14-17
• 2.2.1 骨骼肌衛(wèi)星細胞的培養(yǎng)方法14-15
• 2.2.2 骨骼肌衛(wèi)星細胞的培養(yǎng)條件15
• 2.2.3 骨骼肌衛(wèi)星細胞的鑒定15-16
• 2.2.4 骨骼肌衛(wèi)星細胞的激活16
• 2.2.5 骨骼肌衛(wèi)星細胞的增殖與分化16-17
• 2.3 力竭運動和鈍挫傷對肌衛(wèi)星細胞的影響17-18
• 2.3.1 力竭運動對骨骼肌衛(wèi)星細胞的影響17
• 2.3.2 鈍挫傷對骨骼肌衛(wèi)星細胞的影響17-18
• 2.4 骨骼肌衛(wèi)星細胞在骨骼肌損傷修復(fù)中的作用18
• 3 AXIN/GSK-3B/WNT/B-CATENIN信號通路與骨骼肌損傷修復(fù)18-23
• 3.1 WNT信號通路19
• 3.1.1 WNT家族19
• 3.1.2 多條WNT信號途徑19
• 3.2 WNT/B-CATENIN信號通路19-21
• 3.2.1 AXIN、GSK-3B的概述19-21
• 3.2.2 AXIN/GSK-3B對WNT/B-CATENIN信號通路的調(diào)節(jié)作用21
• 3.3 AXIN/GSK-3B/WNT/B-CATENIN信號通路在骨骼肌損傷修復(fù)中的作用21-23
• 第二部分 實驗部分23-48
• 1 實驗動物及方法23-24
• 1.1 實驗動物23
• 1.2 實驗分組23
• 1.3 建模方法23-24
• 1.3.1 力竭運動模型23
• 1.3.2 鈍挫傷實驗?zāi)Ｐ?/span>23-24
• 1.4 動物取材24
• 2 細胞培養(yǎng)實驗儀器、試劑及方法24-27
• 2.1 細胞培養(yǎng)實驗儀器24-25
• 2.2 細胞培養(yǎng)實驗試劑25
• 2.3 試劑配置方法25-26
• 2.4 骨骼肌衛(wèi)星細胞的分離與培養(yǎng)26-27
• 2.4.1 骨骼肌衛(wèi)星細胞培養(yǎng)的條件要求26-27
• 2.4.2 骨骼肌衛(wèi)星細胞的分離與培養(yǎng)27
• 3 腓腸肌肌纖維類型的觀察27-28
• 3.1 實驗試劑及配置27-28
• 3.2 實驗儀器及器械28
• 3.3 冰凍切片及ATP酶染色28
• 3.4 攝像分析28
• 4 酶聯(lián)免疫實驗方法(ELISA)28-29
• 4.1 樣品收集、處理及保存28-29
• 4.2 ELISA操作步驟29
• 5 蛋白含量測定方法29-30
• 5.1 蛋白測定條件29
• 5.2 蛋白含量的測定29-30
• 6 數(shù)據(jù)處理30-31
• 7 實驗結(jié)果與分析31-43
• 7.1 力竭運動組及鈍挫傷組及新生鼠不同時期衛(wèi)星細胞的體外培養(yǎng)結(jié)果31-37
• 7.1.1 各組培養(yǎng)1天后骨骼肌衛(wèi)星細胞生長狀況31-32
• 7.1.2 各組培養(yǎng)3天后骨骼肌衛(wèi)星細胞生長狀況32-34
• 7.1.3 各組培養(yǎng)5天后骨骼肌衛(wèi)星細胞生長狀況34-35
• 7.1.4 各組培養(yǎng)7天后骨骼肌衛(wèi)星細胞生長狀況35-37
• 7.2 力竭運動及鈍挫傷不同時期大鼠腓腸肌肌纖維類型的變化37-40
• 7.3 力竭運動及鈍挫傷不同時期大鼠骨骼肌、血清中GSK-3B含量變化40-41
• 7.4 力竭運動及鈍挫傷不同時期大鼠骨骼肌、血清中AXIN含量變化41-43
• 8 討論與分析43-47
• 8.1 骨骼肌衛(wèi)星細胞的體外培養(yǎng)43-44
• 8.2 力竭運動、鈍挫傷及新生鼠體外培養(yǎng)衛(wèi)星細胞增殖分化情況對比44
• 8.3 力竭運動、鈍挫傷對大鼠腓腸肌肌纖維類型的影響44-45
• 8.4 力竭運動及鈍挫傷對不同時期大鼠GSK-3B、AXIN含量的影響45-47
• 9 研究結(jié)論47-48
• 參考文獻48-55
• 致謝55-56

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本文編號：709160