本文關(guān)鍵詞：制動(dòng)和PTH對動(dòng)物關(guān)節(jié)軟骨自我修復(fù)能力的影響研究

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【摘要】：【目的】探討關(guān)節(jié)制動(dòng)對大鼠膝關(guān)節(jié)軟骨損傷自我修復(fù)的影響以及在PTH干預(yù)下軟骨自我修復(fù)能力是否會(huì)提高�！痉椒ā康谝徊糠�:36只SD大鼠進(jìn)行麻醉后在一側(cè)股骨髁間窩使用角膜環(huán)鉆鉆出直徑2.5mm深2mm的全層軟骨缺損,而后隨機(jī)分為制動(dòng)組和對照組,每組各18只動(dòng)物,對照組單純造模后不作任何處理,而制動(dòng)組造模后立即采用我們設(shè)計(jì)和改良的小動(dòng)物外固定架伸直位進(jìn)行跨關(guān)節(jié)制動(dòng)。分別于2周、4周、8周三個(gè)時(shí)間段取材,行大體觀察、組織學(xué)染色、免疫組化、PCR以及代謝標(biāo)志物檢測等手段對兩組樣本進(jìn)行分析。第二部分:24只日本大耳兔進(jìn)行麻醉后在一側(cè)股骨髁間窩使用角膜環(huán)鉆鉆出直徑4.5mm深3mm的全層軟骨缺損,然后隨機(jī)分為對照組(n=12)和PTH組(n=12),對照組造模后注射生理鹽水,制動(dòng)組皮下注射PTH 40ug/kg/次,每周五次。分別于術(shù)后第2周、4周、8周三個(gè)時(shí)間段取材,行大體觀察、組織學(xué)染色、免疫組化、PCR以及代謝標(biāo)志物檢測等手段對兩組樣本進(jìn)行分析�！窘Y(jié)果】第一部分:大體觀察看制動(dòng)組與對照組的軟骨缺損修復(fù)速度沒有明顯差別,組織學(xué)染色觀察兩組再生組織主要為纖維細(xì)胞,2周時(shí),兩組Wakitani評分和Mankin評分相比無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。4周時(shí),兩組Wakitani評分相比無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。兩組Mankin評分增大,但兩組比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。8周時(shí),制動(dòng)組的Wakitani評分高于對照組(P0.05),制動(dòng)組的Mankin評分高于對照組(P0.05)�；蛩缴峡粗苿�(dòng)2個(gè)月后大鼠關(guān)節(jié)軟骨內(nèi)Aggrecan和Col2 m RNA表達(dá)降低,而Col1a1 m RNA表達(dá)升高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。制動(dòng)組與對照組相比,關(guān)節(jié)軟骨內(nèi)MMP-3m RNA表達(dá)明顯提高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。軟骨代謝標(biāo)志物檢測結(jié)果顯示,制動(dòng)組與對照組相比,大鼠制動(dòng)8周后尿樣中CTX-II水平顯著提高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),其它時(shí)間段CTX-II的表達(dá)量無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。第二部分:肉眼觀察我們發(fā)現(xiàn)PTH組比對照組再生組織覆蓋缺損處要多,PTH注射能明顯促進(jìn)軟骨缺損修復(fù)。2周時(shí),兩組Wakitani評分都很高,但兩組相比無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。兩組Mankin評分較低,兩組比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。4周時(shí),Wakitani評分與對照組相比評分要低。Mankin評分對照組增加的幅度顯著大于PTH組(P0.01)。8周時(shí)對照組Wakitani評分要高于PTH組,周圍軟骨Mankin評分要低于PTH組。早期對照組和PTH組軟骨修復(fù)組織II型膠原免疫組化染色無差別。中后期PTH組軟骨修復(fù)組織II型膠原染色強(qiáng)陽性而對照組II型膠原染色較弱。RT-PCR檢測注射PTH8周后,與對照組相比,關(guān)節(jié)軟骨內(nèi)Aggrecan和Col2a1m RNA表達(dá)升高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),而Col1a1 m RNA表達(dá)變化不明顯,差異沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。關(guān)節(jié)軟骨內(nèi)MMP-3 m RNA表達(dá)明顯降低,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。PTH1R的m RNA表達(dá)量同樣顯著增高,幾乎達(dá)到了對照組表達(dá)量的5倍,二者之間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。軟骨代謝標(biāo)志物檢測結(jié)果顯示,PTH組與對照組相比,大耳兔皮下注射PTH 4周和8周后血清中PIICP水平顯著提高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),2周時(shí)PIICP的表達(dá)量無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。【結(jié)論】1.軟骨有一定的自愈能力,在我們第一部分大鼠膝關(guān)節(jié)軟骨小型缺損實(shí)驗(yàn)和第二部分兔膝關(guān)節(jié)軟骨大型缺損兩部分實(shí)驗(yàn),兩組的空白對照組在4到8周均可完成修復(fù),缺損處有組織填充。2.制動(dòng)不利于軟骨修復(fù),甚至導(dǎo)致周圍軟骨退變,第一部分實(shí)驗(yàn)證實(shí)大鼠在制動(dòng)后,軟骨修復(fù)效果要差,周圍軟骨退變明顯,時(shí)間越長越明顯,尤其是制動(dòng)4周和8周后制動(dòng)組的Wakitani評分和Mankin評分都要高于對照組。可見制動(dòng)對軟骨的自愈能力產(chǎn)生了負(fù)面影響。3.PTH能刺激軟骨修復(fù),保護(hù)軟骨,PTH組的Wakitani和Mankin評分都比對照組要低,說明PTH組軟骨修復(fù)要好,且PTH組II型膠原染色陽性,有透明軟骨生成,PTH直接刺激軟骨修復(fù)以及間接通過刺激軟骨下骨來提高軟骨的自愈能力。
【關(guān)鍵詞】：關(guān)節(jié)軟骨 甲狀旁腺素 軟骨修復(fù) 軟骨退變 關(guān)節(jié)制動(dòng)
【學(xué)位授予單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R684.3
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-11
• 縮略語11-12
• 前言12-15
• 研究現(xiàn)狀、成果12-13
• 研究目的、方法13-15
• 一、制動(dòng)對大鼠膝關(guān)節(jié)軟骨缺損自我修復(fù)的影響研究15-35
• 1.1 對象和方法15-24
• 1.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及試劑15-16
• 1.1.2 動(dòng)物分組及干預(yù)16-17
• 1.1.3 大體觀察17
• 1.1.4 組織學(xué)染色17-19
• 1.1.5 免疫組化19-21
• 1.1.6 尿中軟骨代謝標(biāo)志物測定21
• 1.1.7 軟骨RNA提取及RT-PCR檢測21-24
• 1.1.8 統(tǒng)計(jì)分析24
• 1.2 結(jié)果24-31
• 1.2.1 大體觀察24-25
• 1.2.2 組織學(xué)觀察25-27
• 1.2.3 免疫組化27-30
• 1.2.4 軟骨代謝標(biāo)志物檢測30
• 1.2.5 PCR結(jié)果30-31
• 1.3 討論31-34
• 1.3.1 軟骨的自我修復(fù)能力31-32
• 1.3.2 機(jī)械刺激對軟骨缺損修復(fù)的作用32
• 1.3.3 制動(dòng)對關(guān)節(jié)軟骨缺損修復(fù)的影響32-34
• 1.4 小結(jié)34-35
• 二、PTH在提高兔膝關(guān)節(jié)軟骨缺損自我修復(fù)能力的應(yīng)用研究35-46
• 2.1 對象和方法35-38
• 2.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及試劑35-36
• 2.1.2 動(dòng)物分組及干預(yù)36-37
• 2.1.3 大體觀察37
• 2.1.4 組織學(xué)染色37
• 2.1.5 軟骨免疫組織化學(xué)染色37
• 2.1.6 軟骨RNA提取及RT-PCR檢測37
• 2.1.7 血清軟骨代謝標(biāo)志物測定37
• 2.1.8 統(tǒng)計(jì)分析37-38
• 2.2 結(jié)果38-44
• 2.2.1 大體觀察結(jié)果38
• 2.2.2 組織學(xué)染色38-42
• 2.2.3 免疫組化結(jié)果42
• 2.2.4 標(biāo)本RT-PCR結(jié)果42-43
• 2.2.5 軟骨代謝標(biāo)志物檢測43-44
• 2.3 討論44-45
• 2.4 小結(jié)45-46
• 結(jié)論46-48
• 參考文獻(xiàn)48-55
• 發(fā)表論文和參加科研情況說明55-56
• 附錄56-58
• 綜述 關(guān)節(jié)軟骨修復(fù)的方法及組織工程技術(shù)研究進(jìn)展58-73
• 綜述參考文獻(xiàn)65-73
• 致謝73-74
• 個(gè)人簡歷74

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前6條

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本文編號：705745