本文關鍵詞：腹側海馬PCDH1在慢性束縛應激誘導的焦慮抑郁樣行為中的作用

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【摘要】：研究背景：情感障礙是由多種因素誘發(fā)并以情感持續(xù)且顯著地高漲或低落為主要臨床特征的精神障礙。環(huán)境因素和遺傳因素是情感障礙產(chǎn)生的兩大主要因素,應激作為環(huán)境因素,是情感障礙(如焦慮癥和抑郁癥)和學習記憶受損的一個重要誘發(fā)因素。研究表明慢性應激可導致海馬和前額葉體積明顯減少以及神經(jīng)元樹突棘數(shù)目減少、樹突分支減少。慢性應激可通過下丘腦-垂體-腎上腺軸(Hypothalamic-Pituitary-Adrenal, HPA)-.5-羥色胺(5-hydroxytryptamine,5-HT)和去甲腎上腺素(Norepinephrine, NE)等系統(tǒng)改變神經(jīng)元中哺乳動物雷帕霉素靶蛋白(Mammalian target of rapamycin, mTOR),神經(jīng)元型一氧化氮合酶(Neuronal nitric oxide synthase, nNOS)和腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子(Brai n-Derived Neurotrophic Factor, BDNF)等重要蛋白的表達最終導致突觸結構和功能改變,那么是否還有其它分子和機制參與調(diào)節(jié)慢性應激導致的突觸結構和功能改變。細胞粘附分子(Cell Adhesion Molecules, CAMs)是突觸的重要構成成分并且可以調(diào)控突觸活動及突觸可塑性,在突觸形態(tài)構建和精神疾病中發(fā)揮重要作用。文獻報道鈣黏蛋白是一種同型結合、鈣離子依賴的細胞粘附分子,在調(diào)節(jié)樹突棘形態(tài)和調(diào)控突觸功能中發(fā)揮重要作用。鈣黏蛋白超家族包括經(jīng)典鈣黏蛋白家族和原鈣黏蛋白家族。原鈣黏蛋白1(Protocadherin1, PCDH1)是原鈣黏蛋白家族的一員,在海馬和前額葉腦區(qū)高表達,但PCDH1是否參與應激誘導的焦慮或抑郁樣行為還不清楚。在本課題中,我們檢測慢性束縛應激后腹側海馬PCDH1的表達。進一步采用特異性干擾和過表達PCDH1的方法,研究PCDH1對小鼠焦慮樣或抑郁樣行為的作用,明確PCDH1是否參與慢性束縛應激引起的焦慮樣或抑郁樣行為。目的：1.研究慢性束縛應激后海馬PCDH1分子的表達變化。2.研究海馬PCDH1分子對慢性束縛應激導致的焦慮抑郁樣行為的影響。方法：1.慢性束縛應激(Chronic Restraint Stress, CRS)每天上午9點至11點小鼠束縛應激2小時,連續(xù)應激21天。2.腦立體定位和病毒微量注射完全麻醉后,將小鼠頭部固定在腦立體定位儀上。在腹側海馬立體定位注射病毒,每側各1微升,注射定位坐標如下：前后,-2.7毫米；左右,±2.2毫米；背腹側,-2.2毫米。3.行為學測試應用曠場實驗檢測小鼠的自主活動能力和焦慮樣行為。應用高架十字迷宮實驗檢測小鼠的焦慮樣行為。應用懸尾和強迫游泳實驗檢測小鼠的抑郁樣行為。4.實時定量PCR實驗應用實時定量PCR檢測PCDH1 mRNA表達變化。5.蛋白提取和蛋白免疫印跡實驗小鼠腦組織提取總蛋白后用免疫印跡實驗檢測PCDH1蛋白量,用Quantity one軟件進行統(tǒng)計并分析。6.免疫組織化學染色小鼠經(jīng)4%的多聚甲醛(PFA)灌注固定后,冰凍切片,厚度40微米,進行免疫組織化學染色,熒光顯微鏡拍照,觀察病毒表達時程。結果：1.CRS導致小鼠腹側海馬PCDH1的表達降低。應激組和對照組小鼠相比腹側海馬PCDH1 mRNA表達明顯降低,而同亞家族PCDH7,9,11 mRNA表達無明顯變化。背側海馬PCDH1 mRNA表達也降低,但只降低12%。兩組小鼠在杏仁體腦區(qū)PCDH1 mRNA表達無差異。應激組和對照組小鼠相比腹側海馬PCDH1的蛋白表達有明顯降低,但在背側海馬和杏仁體腦區(qū)PCDH1的蛋白表達無差異,以上結果提示應激特異性的導致腹側海馬PCDH1表達降低。2.干擾腹側海馬PCDH1的表達能夠模擬CRS誘導的焦慮樣和抑郁樣行為。干擾PCDH1組與對照組小鼠相比進入曠場中央?yún)^(qū)時間明顯減少,進入高架十字迷宮開臂時間和次數(shù)明顯減少,在懸尾和強迫游泳實驗中不動時間均明顯增加,表明干擾PCDH1能夠導致小鼠焦慮樣和抑郁樣行為增加。3.腹側海馬過表達PCDH1能夠糾正CRS誘導的焦慮樣和抑郁樣行為。CRS后,過表達PCDH1組與對照組小鼠相比,進入曠場中央?yún)^(qū)的時間增加和進入高架十字開臂的時間和次數(shù)增加,懸尾和強迫游泳實驗中不動時間減少,表明過表達PCDH1能夠糾正CRS誘導的焦慮樣和抑郁樣行為。結論：1.CRS特異性的導致腹側海馬PCDH1 mRNA和蛋白表達降低。2.腹側海馬中PCDH1參與CRS引起的焦慮抑郁樣行為。意義：本課題中,我們發(fā)現(xiàn)PCDH1分子參與CRS導致焦慮抑郁樣行為的依據(jù),為將來焦慮癥、抑郁癥的臨床治療提供了新靶點和新思路。
【關鍵詞】：慢性束縛應激 PCDH1 腹側海馬 焦慮 抑郁
【學位授予單位】：山東大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R749
【目錄】：

• 中文摘要6-9
• 英文摘要9-13
• 符號說明13-14
• 前言14-18
• 材料與方法18-29
• 實驗結果29-39
• 討論39-42
• 附圖42-49
• 參考文獻49-54
• 致謝54-56
• 攻讀碩士學位期間發(fā)表的學術論文56-57
• 學位論文評閱及答辯情況表57

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1 姜春玲,王有偉,張萬琴,洪昭雄;癲癇研究中背腹側海馬在功能上的差異[J];國外醫(yī)學(生理、病理科學與臨床分冊);1999年03期

2 王靜 ,李藝影,李小勇,張萬琴;腹側海馬強啡肽在癲癇敏感性增強形成中的表達[J];首都醫(yī)科大學學報;2001年04期

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本文編號：633682