本文關(guān)鍵詞：ADAM8在DEN誘導(dǎo)的小鼠肝細(xì)胞癌發(fā)生發(fā)展過(guò)程中的表達(dá)與功能研究

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【摘要】：目的:本課題重點(diǎn)研究去整合素金屬蛋白酶8(ADAM8)在肝細(xì)胞癌(HCC)的發(fā)生發(fā)展中的具體作用。方法:小鼠被分為5組:每組包含60只小鼠。A組小鼠在24周時(shí)間內(nèi),僅在每周1、3和5接受腹腔注射300μg/100μl抗ADAM8的單克隆抗體。治療組B1、B2、B3和B4小鼠自由飲用含30μg·ml-1DEN的水24周來(lái)誘導(dǎo)肝細(xì)胞癌的發(fā)生。在每周1、3和5,B1、B2、B3和B4組小鼠分別腹腔注射PBS,100μg/100μl,200μg/100μl或300μg/100μl的抗ADAM8單克隆抗體。在實(shí)驗(yàn)結(jié)束的時(shí)候(24周末),小鼠被稱重,然后用乙醚進(jìn)行麻醉,通過(guò)心臟穿刺進(jìn)行采血。我們統(tǒng)計(jì)了小鼠的生存率,即24周后存活小鼠的數(shù)量/開始實(shí)驗(yàn)時(shí)小鼠的數(shù)量×100。然后小鼠被處死,肝臟被取出。新鮮的肝臟用冰的鹽水洗了兩次,在干凈的紙巾上吸干,稱重。相對(duì)肝臟重量,即肝臟重量/最終體重×100,每只小鼠肝臟腫瘤部位的肝臟樣品被分為兩部分,它們分別用來(lái)進(jìn)行組織學(xué)檢測(cè),蛋白印跡檢測(cè)。對(duì)于組織學(xué)檢測(cè),肝臟樣品在10%的甲醛溶液中固定24小時(shí)然后進(jìn)行脫水和石蠟包埋。每個(gè)石蠟包埋的組織塊切成6微米的片子,然后用來(lái)進(jìn)行組織學(xué)檢測(cè)。對(duì)于蛋白印跡檢測(cè),肝臟樣品按照體積比(1:10)的比例加入PBS(0.02M,p H7.4)然后進(jìn)行勻漿,勻漿后的樣品被轉(zhuǎn)移到離心管中,在4°C,10000rpm進(jìn)行離心,中間層的蛋白樣品被收集用作蛋白印跡檢測(cè)。在另外一個(gè)實(shí)驗(yàn)中,60只小鼠僅自由飲用含30μg·ml-1 DEN的水24周來(lái)誘導(dǎo)肝細(xì)胞癌。我們利用蛋白印跡的方法檢測(cè)了誘癌后0、8、16和24周小鼠肝臟ADAM8的表達(dá)水平。結(jié)果:抗ADAM8單克隆抗體的干預(yù)治療顯著提高了誘癌小鼠的生存率,減少了小鼠體重的損失和相對(duì)肝臟重量的增加,它是以一種劑量依賴的方式進(jìn)行干預(yù)治療的(P0.05或P0.01)。用抗ADAM8單克隆抗體進(jìn)行干預(yù)治療后也顯著地降低了小鼠血清中AST和ALT的酶活性及AFP的表達(dá)水平(P0.05或P0.01),延緩了小鼠肝癌的發(fā)生與發(fā)展。與用PBS干預(yù)治療的實(shí)驗(yàn)小鼠相比較,用抗ADAM8單克隆抗體干預(yù)治療后增強(qiáng)了Caspase 3、Bax、P53(P0.05或P0.01)在小鼠肝臟組織中的表達(dá),同時(shí)也抑制了VEGF-A、PCNA、Bcl-2在小鼠肝臟組織中的表達(dá)(P0.05或P0.01),且其表達(dá)情況與抗ADAM8單克隆抗體呈劑量依賴的關(guān)系。結(jié)論:我們的研究提示,ADAM8可能是通過(guò)調(diào)節(jié)這些因子的表達(dá)從而促進(jìn)肝細(xì)胞癌的疾病發(fā)展,抗ADAM8單克隆抗體介入治療可能會(huì)成為一種很有潛力的肝癌治療方法。
【關(guān)鍵詞】：肝癌 ADAM8 單克隆抗體 P53 Bcl-2
【學(xué)位授予單位】：河南科技大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R735.7
【目錄】：

• 摘要3-5
• Abstract5-10
• 第1章 綜述10-25
• 1.1 引言10-15
• 1.1.1 原發(fā)性肝細(xì)胞癌的流行病學(xué)10
• 1.1.2 原發(fā)性肝細(xì)胞癌的病理與病理生理10-11
• 1.1.3 原發(fā)性肝細(xì)胞癌的臨床表現(xiàn)11
• 1.1.4 原發(fā)性肝細(xì)胞癌的診斷11-12
• 1.1.5 原發(fā)性肝細(xì)胞癌的分期與分級(jí)12-13
• 1.1.6 原發(fā)性肝細(xì)胞癌的臨床治療13-14
• 1.1.7 原發(fā)性肝細(xì)胞癌的預(yù)后14-15
• 1.2 原發(fā)性肝細(xì)胞癌形成的分子病理機(jī)制15-17
• 1.2.1 概述15
• 1.2.2 原發(fā)性肝細(xì)胞癌的形成15-17
• 1.3 原發(fā)性肝細(xì)胞癌的主要誘因17-21
• 1.3.1 概述17
• 1.3.2 丙型病毒性肝炎誘發(fā)肝細(xì)胞癌17-18
• 1.3.3 乙型病毒性肝炎誘發(fā)肝細(xì)胞癌18-19
• 1.3.4 黃曲霉毒素誘發(fā)肝細(xì)胞癌19-20
• 1.3.5 酒精誘發(fā)肝細(xì)胞癌20
• 1.3.6 脂肪變性誘發(fā)肝細(xì)胞癌20
• 1.3.7 其它原因誘發(fā)肝細(xì)胞癌20-21
• 1.4 ADAM因子家族與ADAM8因子的研究新進(jìn)展21-23
• 1.4.1 ADAM因子家族的分子構(gòu)成及主要功能研究新進(jìn)展21
• 1.4.2 ADAM8因子家族的分子構(gòu)成及主要功能研究新進(jìn)展21-22
• 1.4.3 ADAM8因子在原發(fā)性肝細(xì)胞癌發(fā)生發(fā)展中的重要作用22-23
• 1.5 二乙基亞硝胺（DEN）誘導(dǎo)的肝癌模型23-25
• 第2章 前言25-27
• 第3章 材料與方法27-39
• 3.1 實(shí)驗(yàn)材料27
• 3.2 主要儀器27-28
• 3.3 主要試劑及配制28-29
• 3.4 實(shí)驗(yàn)具體操作方法及分組29-38
• 3.4.1 實(shí)驗(yàn)組的設(shè)計(jì)29-30
• 3.4.2 小鼠血清AST、ALT、AFP檢測(cè)30-32
• 3.4.3 小鼠肝臟組織病理學(xué)檢查32-33
• 3.4.4 小鼠誘導(dǎo)肝癌后第24周結(jié)束時(shí)PCNA、Caspase 3 的免疫組織化學(xué)染色33-34
• 3.4.5 小鼠誘導(dǎo)肝癌后第24周結(jié)束時(shí)用TUNEL法進(jìn)行肝細(xì)胞凋亡分析34-36
• 3.4.6 用Western blot法測(cè)定VEGF-A、PCNA、Caspase 3、Bcl2、Bax、P53、ADAM8因子的蛋白表達(dá)水平36-38
• 3.5 數(shù)據(jù)分析38-39
• 第4章 結(jié)果39-42
• 4.1 抗ADAM8單克隆抗體在原發(fā)性肝細(xì)胞癌小鼠中的介入治療效果（存活率、體重、相對(duì)肝重量）39
• 4.2 第24周結(jié)束時(shí)原發(fā)性肝細(xì)胞癌小鼠血清中AST、ALT、AFP的水平變化39
• 4.3 用HE染色法分析小鼠誘導(dǎo)為原發(fā)性肝細(xì)胞癌后肝臟的病理變化39-40
• 4.4 通過(guò)PCNA的免疫組織化學(xué)染色方法測(cè)定抗ADAM8單克隆抗體干預(yù)治療對(duì)小鼠肝細(xì)胞增殖的效果40
• 4.5 通過(guò)TUNEL和Caspase 3 的免疫組織化學(xué)染色方法測(cè)定ADAM8單克隆抗體干預(yù)治療后對(duì)小鼠肝細(xì)胞凋亡的效果40
• 4.6 用Western blot法檢測(cè)分析ADAM8在DEN誘導(dǎo)的小鼠原發(fā)性肝細(xì)胞癌病理進(jìn)程中的表達(dá)40
• 4.7 通過(guò)用Western blot法檢測(cè)分析小鼠肝臟組織中的VEGF-A、PCNA、Caspase 3、Bcl-2、Bax、P53的蛋白表達(dá)水平來(lái)測(cè)定抗ADAM8單克隆抗體的干預(yù)治療效果40-42
• 第5章 討論42-46
• 5.1 ADAM8因子對(duì)肝癌組織新生血管的影響作用42-43
• 5.2 ADAM8因子對(duì)原發(fā)性肝癌細(xì)胞增殖的影響作用43-44
• 5.3 ADAM8因子對(duì)肝癌細(xì)胞調(diào)亡的影響作用44-45
• 5.4 ADAM8因子對(duì)腫瘤抑制基因P53的影響作用45
• 5.5 問題與展望45-46
• 第6章 結(jié)論46-47
• 參考文獻(xiàn)47-57
• 縮略語(yǔ)詞匯表57-58
• 附錄 圖表與說(shuō)明58-72
• 致謝72-73
• 攻讀學(xué)位期間的研究成果73

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前1條

1 李果;夏鋒;;肝細(xì)胞癌的分子分型研究進(jìn)展[J];實(shí)用臨床醫(yī)藥雜志;2010年13期

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本文編號(hào)：602797