發(fā)布時(shí)間：2017-07-27 09:23

  本文關(guān)鍵詞：超聲對大鼠血腦屏障通透性的影響

  更多相關(guān)文章： 多普勒超聲 甲氨蝶呤 滲透性 血腦屏障

【摘要】：目的：探究常用的安全性良好的不同超聲設(shè)備開放大鼠血腦屏障的可行性；對超聲設(shè)備進(jìn)行初步篩,并對可行的超聲參數(shù)從設(shè)備的頻率、強(qiáng)度、輻照時(shí)長、微泡的種類和劑量等方面進(jìn)行優(yōu)化篩選；探究不同超聲條件下大鼠血腦屏障通透性的改變,并進(jìn)行定量分析；探究超聲后血腦屏障的開放是否具有可逆性,并確定不同參數(shù)的超聲的安全性。以有望用于腦腫瘤的藥物甲氨蝶呤為例,探究超聲是否能促進(jìn)這一藥物透過血腦屏障。方法：1可行性評估大鼠稱重,麻醉固定,頭部剃毛,涂以超聲耦合劑,尾靜脈置入帶肝素的留置針。使用不同的超聲設(shè)備進(jìn)行輻照,同時(shí)經(jīng)尾靜脈留置針按體重推注微泡懸液,劑量為2mL/kg大鼠。追注1 mL生理鹽水沖管并開始計(jì)時(shí),20 min后結(jié)束立即推注2%的EB,劑量為2.5 mL/kg大鼠。4h后,開胸灌注,斷頭取腦,稱重,甲酰胺提取腦組織中的EB,酶標(biāo)儀定量分析。2實(shí)驗(yàn)參數(shù)優(yōu)化脈沖超聲,胎心儀分別使用已有的頻率和最大強(qiáng)度的超聲輻照大鼠。多普勒超聲設(shè)備分別使用頻率3.5 MHz和7.5 MHz的探頭分別配合使用第5、10、15檔的聲功率輻照大鼠進(jìn)行超聲參數(shù)的篩選。使用前面實(shí)驗(yàn)選出的最佳超聲參數(shù),輻照大鼠時(shí)長分別為5min、20 min、40 min、60 min,篩選最優(yōu)的輻照時(shí)間。將臨床常用的超聲造影劑聲諾維根據(jù)人與大鼠的體表面積比換算,配制成0.5、1.0、2.0mg/mL的濃度梯度；食品藥品監(jiān)督管理局(Food and Drug Administration, FDA)批準(zhǔn)的生物醫(yī)學(xué)材料聚乳酸-羥基乙酸共聚物(Poly lactic-co-glycolic acid, PLGA)合成的微泡配制成2.5、5.0、10.0 mg/mL的濃度梯度,探究不同種類和劑量的微泡對血腦屏障通透性的影響。3血腦屏障閉合時(shí)間的探究大鼠超聲輻照后,分別于0 h、0.5 h、1.0 h、2.0 h、3.0 h、4.0 h后經(jīng)尾靜脈注射EB,使用甲酰胺提取大腦皮層中的EB,測定含量,考察血腦屏障開放的可逆性。4超聲促進(jìn)藥物透過血腦屏障的定量分析大鼠的準(zhǔn)備方法同前,超聲使用之前篩選出的最優(yōu)參數(shù),高效液相色譜法(high performance liquid chromatography, HPLC)測定腦組織中甲氨蝶呤(methotrexate, MTX)的含量。5安全性評價(jià)對腦組織進(jìn)行常規(guī)切片,HE染色觀察組織細(xì)胞是否有損傷損傷。超薄切片,常規(guī)鈾-鉛染色,透射電鏡下觀察血管附近的超微結(jié)構(gòu)是否有變化。6統(tǒng)計(jì)學(xué)方法應(yīng)用Microsoft Excel, GraphPad Prism 5等統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行分析,計(jì)量資料用x±s表示,多組間比較采用單因素方差分析。結(jié)果：1設(shè)備初選僅多普勒設(shè)備的兩組DUS-3.5組和DUS.7.5組與對照組相比具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異P0.01,與其他組比較也具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異P0.05。其他組相互比較或與對照組比均無差異。2多普勒診斷超聲參數(shù)優(yōu)化3.5MHz的超聲功率設(shè)為5和10相比具有顯著性差異,P0.05。3.5.15和3.5-5組相比也具有顯著性差異,P0.01。3.5.10和3.5.15組之間則沒有顯著性差異。說明3.5 MHz時(shí),聲功率10時(shí)對血腦屏障的影響有一個(gè)顯著性提升。7.5 MHz組僅功率設(shè)為15時(shí)與功率5時(shí)相比有顯著性差異,P0.01。7.5.15與7.5.10間,P0.05。說明7.5 MHz時(shí),聲功率15時(shí)對血腦屏障的影響有一個(gè)顯著性提升。對輻照時(shí)長的結(jié)果分析發(fā)現(xiàn)輻照20 min時(shí)相比于5 min具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。40 min和60 min與20 min相比均不存在差異。3血腦屏障開放的可逆性0.2 h時(shí)間內(nèi)血腦屏障的滲透性與對照組相比均有顯著性差異,P0.01。到3 h時(shí)與對照組相比無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異,說明血腦屏障通透性恢復(fù)正常水平。4安全性HE染色未見組織細(xì)胞的損傷和異常出血點(diǎn),超微結(jié)構(gòu)觀察發(fā)現(xiàn)腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞及周圍組織細(xì)胞結(jié)構(gòu)正常,無明顯損傷或水腫。MTX組與未進(jìn)行超聲輻照的對照組相比具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異,P0.05。結(jié)論：1三種常用超聲設(shè)備中多普勒彩超設(shè)備成功改變了大鼠血腦屏障的滲透性,成功增加了伊文思藍(lán)染料透過大鼠血腦屏障的量。2在不予大鼠開顱手術(shù)的情況下,多普勒超聲設(shè)備增強(qiáng)大鼠血腦屏障通透性的最優(yōu)參數(shù)為機(jī)械指數(shù)設(shè)為最大值、頻率7.5 MHz、微泡使用PLGA,劑量為10 mg/kg大鼠,輻照時(shí)間20 min,且初步確定該參數(shù)的超聲具有較好的安全性。3超聲開放大鼠血腦屏障是可逆的,在3h左右通透性恢復(fù)正常水平。4超聲能夠促進(jìn)抗腫瘤藥甲氨蝶呤透過大鼠血腦屏障。
【關(guān)鍵詞】：多普勒超聲 甲氨蝶呤 滲透性 血腦屏障
【學(xué)位授予單位】：北京中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R445.1
【目錄】：

• 摘要6-8
• Abstract8-11
• 中英文縮略詞對照11-12
• 文獻(xiàn)綜述12-20
• 1.1 血腦屏障的結(jié)構(gòu)和功能12-14
• 1.1.1 腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞13
• 1.1.2 緊密連接13-14
• 1.1.3 星型膠質(zhì)細(xì)胞14
• 1.1.4 周細(xì)胞14
• 1.2 開放血腦屏障的方法14-15
• 1.3 藥物跨血腦屏障轉(zhuǎn)運(yùn)的方式15
• 1.3.1 擴(kuò)散作用15
• 1.3.2 載體轉(zhuǎn)運(yùn)15
• 1.3.3 主動(dòng)運(yùn)輸15
• 1.4 超聲聯(lián)合微泡對血腦屏障的作用15-17
• 1.4.1 超聲的特性及生物學(xué)作用15-16
• 1.4.2 聚焦超聲對血腦屏障通透性的影響16-17
• 1.4.3 診斷超聲聯(lián)合微泡開放血腦屏障17
• 1.5 血腦屏障通透性變化的檢測方法17-20
• 1.5.1 血腦屏障體外模型的建立及功能測定17-18
• 1.5.2 動(dòng)物模型血腦屏障開放的檢測方法18-20
• 前言20-21
• 第一部分 可行性研究及超聲設(shè)備的初步篩選21-31
• 1.1 概述21
• 1.2 材料與方法21-25
• 1.2.1 主要試劑21
• 1.2.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物21
• 1.2.3 實(shí)驗(yàn)設(shè)備與儀器21-22
• 1.2.4 主要溶液的配制及設(shè)備的準(zhǔn)備22-23
• 1.2.5 分組及實(shí)驗(yàn)方法23-24
• 1.2.6 制備透射電鏡超薄切片24-25
• 1.2.7 灌注25
• 1.2.8 評價(jià)血腦屏障是否開放25
• 1.2.9 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法25
• 1.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果25-29
• 1.3.1 超聲聯(lián)合微泡作用的影像學(xué)分析25-27
• 1.3.2 伊文思藍(lán)標(biāo)準(zhǔn)曲線27
• 1.3.3 各組伊文思藍(lán)含量的測定結(jié)果27-28
• 1.3.4 透射電鏡下各組的腦組織超微結(jié)構(gòu)28-29
• 1.4 討論29-31
• 第二部分 開放血腦屏障的條件優(yōu)化及安全性評價(jià)31-42
• 2.1 概述31
• 2.2 材料與方法31-34
• 2.2.1 主要試劑31
• 2.2.2 主要設(shè)備與儀器31-32
• 2.2.3 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物準(zhǔn)備32
• 2.2.4 主要溶液的配制及設(shè)備的準(zhǔn)備32
• 2.2.5 實(shí)驗(yàn)分組32-33
• 2.2.6 超聲輻照過程33
• 2.2.7 灌注33-34
• 2.2.8 評價(jià)血腦屏障是否開放34
• 2.2.9 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法34
• 2.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果34-40
• 2.3.1 不同超聲功率和頻率對血腦屏障的影響34-35
• 2.3.2 輻照時(shí)長35-36
• 2.3.3 緊密連接和周圍腦組織超微結(jié)構(gòu)變化36-38
• 2.3.4 伊文思藍(lán)濃度38
• 2.3.5 HE染色結(jié)果38-39
• 2.3.6 血腦屏障閉合時(shí)間39-40
• 2.4 討論40-42
• 第三部分 多普勒診斷超聲促進(jìn)抗腫瘤藥甲氨蝶呤透過血腦屏障的實(shí)驗(yàn)42-48
• 3.1 概述42
• 3.2 材料與方法42-44
• 3.2.1 主要試劑42
• 3.2.2 主要設(shè)備與儀器42
• 3.2.3 主要溶液的配制及設(shè)備的準(zhǔn)備42-43
• 3.2.4 實(shí)驗(yàn)分組及方法43
• 3.2.5 灌注43-44
• 3.2.6 制作冰凍切片的方法同前一部分44
• 3.2.7 高效液相色譜法測定腦內(nèi)MTX濃度44
• 3.2.8 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法44
• 3.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果44-46
• 3.3.1 EB熒光強(qiáng)度44-45
• 3.3.2 甲氨蝶呤標(biāo)準(zhǔn)曲線45-46
• 3.3.3 高效液相測定腦組織MTX含量46
• 3.4 討論46-48
• 結(jié)果與討論48-50
• 參考文獻(xiàn)50-56
• 致謝56-57
• 個(gè)人簡歷57

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前3條

1 韋馨;唐紅;;靶向超聲造影劑在制備領(lǐng)域中的研究進(jìn)展[J];臨床超聲醫(yī)學(xué)雜志;2012年12期

2 劉平;高云華;譚開彬;劉政;張萍;朱小虎;;經(jīng)顱腦超聲造影對血腦屏障通透性的影響[J];中華超聲影像學(xué)雜志;2006年07期

3 宋_g;程遠(yuǎn);楊延慶;梅杰;李發(fā)琪;王智彪;劉映江;王志剛;;MRI溫度圖監(jiān)控聚焦超聲開放家兔血腦屏障的作用[J];中國醫(yī)學(xué)影像技術(shù);2008年03期

中國重要報(bào)紙全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 記者 陳丹;[N];科技日報(bào);2014年

中國博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 鄧金木;聚焦超聲聯(lián)合微泡開放血腦屏障的機(jī)制研究[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2013年

，

本文編號：580748