本文關(guān)鍵詞：靶向肝細(xì)胞癌GPC3受體的新型分子探針的研制及熒光和PET顯像研究

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【摘要】：研究背景：早期發(fā)現(xiàn)原發(fā)性肝細(xì)胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)病灶并積極治療,可以明顯改善患者預(yù)后。常規(guī)的影像診斷技術(shù)B超、CT和MRI,在顯示肝細(xì)胞癌的形態(tài)改變及血流供應(yīng)情況有較好的應(yīng)用價(jià)值,但是在鑒別診斷、全身分期和早期療效評價(jià)中存在不足。新型影像診斷技術(shù)18F-FDG PET/CT顯像雖然在肝細(xì)胞癌診斷和分期方面有一定的臨床應(yīng)用,但是它對高分化肝細(xì)胞癌診斷靈敏度低,很難很好地滿足臨床。研究發(fā)現(xiàn),作為硫酸類肝素蛋白聚糖家族一員的磷酸酯酰肌醇蛋白聚糖-3(GPC3),是特異靶向肝細(xì)胞癌的分子。GPC3在成人正常組織中不表達(dá),在80%以上的人肝細(xì)胞癌中GPC3高表達(dá)。L5(序列為RLNVGGTYFLTTRQ)是最新發(fā)現(xiàn)的GPC3受體特異性、高親和性靶向多肽。采用熒光和正電子核素18氟(18F)標(biāo)記L5有望成為肝細(xì)胞癌特異性靶向分子探針。研究目的：一、合成GPC3受體靶向多肽L5并驗(yàn)證該多肽與肝細(xì)胞癌細(xì)胞的結(jié)合能力,為進(jìn)一步探針制備和肝細(xì)胞癌靶向性顯像研究奠定基礎(chǔ)。二、用5-羧基熒光素(5-carboxyfluorescein, FAM)標(biāo)記L5多肽,制備熒光探針(FAM-L5),并用熒光顯像方法研究該熒光探針的靶向性,評價(jià)該探針能否發(fā)展成為肝細(xì)胞癌的靶向熒光探針。三、用正電子核素18F標(biāo)記靶向多肽L5制備PET分子探針(18F-L5),通過micro-PET/CT顯像,研究該探針用于肝細(xì)胞癌顯像的可行性。研究方法：一、靶向GPC3受體多肽L5及其熒光多肽FAM-L5的合成1.GPC3靶向多肽L5的化學(xué)合成采用固相9-芴甲氧羰基(Fmoc)肽化學(xué)合成方法合成L5。以氯三苯基氯樹脂為載體,采用Fmoc氨基保護(hù)策略,固相合成L5(氨基酸序列為：RLNVGGTYFLTTRQ)。第一個(gè)氨基酸與樹脂的連接采用對稱酸酐法,反應(yīng)結(jié)束后用適量的吡啶和乙酸酐封閉樹脂上剩余的活性位點(diǎn)。后續(xù)氨基酸以HOBt/HBTU/DIEA為縮合劑依次連接。反應(yīng)結(jié)束后,以三氟乙酸為主切割劑將目的肽段從樹脂上裂解下來,合成產(chǎn)物經(jīng)高效液相色譜(High Performance Liquid Chromato graphy, HPLC)分離、純化、分析,質(zhì)譜分析鑒定。2.熒光標(biāo)記靶向肽FAM-L5的合成將5-羧基熒光素(FAM)與多肽L5(RLNVGGTYFLTTRQ)將5-羧基熒光素(FAM)與多肽L5(RLNVGGTYFLTTRQ)的末端氨基進(jìn)行反應(yīng),將FAM結(jié)合和標(biāo)記到多肽L5末端氨基上而制備熒光標(biāo)記多肽探針FAM-L5。反應(yīng)結(jié)束后,以三氟乙酸為主切割劑將目的肽段從樹脂上裂解下來,合成產(chǎn)物經(jīng)高效液相色譜分離、純度,質(zhì)譜分析鑒定。3.NOTA修飾多肽L5由中肽公司合成。二、熒光多肽FAM-L5的體外結(jié)合試驗(yàn)1.免疫熒光檢測肝細(xì)胞癌HepG2細(xì)胞及正常肝細(xì)胞HL-7702細(xì)胞GPC3的表達(dá)選擇對數(shù)期HepG2及HL-7702細(xì)胞做為研究對象,計(jì)數(shù)、鋪板后,4%多聚甲醛固定,用稀釋好的抗GPC3一抗于4℃孵育過夜；洗滌后,加入Cys3標(biāo)記的二抗,洗滌后,觀察熒光表達(dá)。2.體外肝細(xì)胞癌細(xì)胞株HepG2同熒光多肽FAM-L5的結(jié)合及競爭抑制試驗(yàn)1)細(xì)胞培養(yǎng)：腫瘤細(xì)胞株選用GPC3表達(dá)陽性的人肝細(xì)胞癌細(xì)胞株HepG2,對照組選用GPC3表達(dá)陰性的人正常肝細(xì)胞HL-7702。上述細(xì)胞在加有10%胎牛血清、2 mM谷氨酰胺和1%青霉素-鏈霉素的RPMI1640培養(yǎng)基中培養(yǎng),隔天更換培養(yǎng)介質(zhì)。細(xì)胞在含有5%二氧化碳溫度為4℃的潮濕空氣中在組織培養(yǎng)瓶內(nèi)展開,當(dāng)細(xì)胞鋪滿培養(yǎng)瓶后用0.05%胰蛋白酶(EDTA)和0.01 M磷酸緩沖液(pH=7.4)分離用于進(jìn)一步細(xì)胞培養(yǎng)。2)結(jié)合試驗(yàn)：收集對數(shù)期生長的HepG2肝細(xì)胞癌和人正常肝細(xì)胞HL-7702并計(jì)以每孔1×105分別接種在24孔板內(nèi),37℃培養(yǎng)過夜。采用復(fù)孔方式,逐孔加入遞增濃度(0 μM,1 μM,5 μM,10 μM,20 μM,40 μM)的FAM-L5溶液,4℃孵育1h,PBS清洗3次后,用倒置熒光顯微鏡(inverted florescence microscope)進(jìn)行顯像。白光顯示細(xì)胞形態(tài),藍(lán)色激發(fā)光下觀察細(xì)胞的熒光攝取情況,紫光激發(fā)狀態(tài)下觀察細(xì)胞核。3)競爭抑制試驗(yàn)：選擇對數(shù)生長期HepG2肝細(xì)胞癌,每孔1×105置于24孔板內(nèi),采用復(fù)孔的方式,先在每孔內(nèi)加入20mM未標(biāo)記的L5溶液與肝細(xì)胞癌細(xì)胞在4℃環(huán)境中孵育。30min后,逐孔加入遞增濃度(0 μM,1 μM,5 μM, 10 μM,20 μM,40 μM)的FAM-L5溶液,37℃環(huán)境中孵育1h, PBS清洗3次后用熒光顯微鏡觀察細(xì)胞的對熒光多肽的攝取強(qiáng)度4)肝細(xì)胞癌HepG2細(xì)胞和正常肝細(xì)胞HL-7702細(xì)胞對于梯度濃度熒光探針FAM-L5的攝取對比定量分析①肝細(xì)胞癌HepG2細(xì)胞和正常肝細(xì)胞HL-7702培養(yǎng)至細(xì)胞處于對數(shù)期時(shí),將細(xì)胞消化離心重懸后,1×105細(xì)胞傳代于6孔板內(nèi),待貼壁后備用。②新鮮配制濃度分別為0μM、5 μm、10 μM、20 μM、40μM、60μM、80μM、 100μM、120μM FAM-L5的溶液。分別加入上述培養(yǎng)皿中,4℃孵育60min后棄去培養(yǎng)液,PBS溶液沖洗3次,每次5min,胰酶消化離心后,棄上清,所得細(xì)胞團(tuán)內(nèi)加入適量PBS,流式細(xì)胞儀分析相對細(xì)胞熒光強(qiáng)度。三、熒光多肽FAM-L5的體內(nèi)試驗(yàn)1.裸鼠腫瘤模型的建立及確定1)裸鼠腫瘤模型的建立：肝細(xì)胞癌細(xì)胞株采用HepG2,選用對數(shù)生長期HepG2細(xì)胞,經(jīng)胰酶消化及離心后,PBS洗滌細(xì)胞2次后,配置細(xì)胞懸液5×106/0.2ml/只,分別接種于4-6周齡的胸腺缺陷裸鼠右側(cè)腋下。SPF環(huán)境下培養(yǎng),3-4周待腫瘤逐漸增長致1cm時(shí)用于動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究。對照組選用腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞系U87MG,選用對數(shù)生長期HepG2細(xì)胞,經(jīng)胰酶消化及離心后,PBS洗滌細(xì)胞2次后,配置細(xì)胞懸液5×106/0.2ml/只,分別接種于4-6周齡的胸腺缺陷裸鼠右側(cè)腋下。SPF環(huán)境下培養(yǎng),3-4周待腫瘤逐漸增長致1cm時(shí)用于動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究。2)組織病理學(xué)確定：為了確認(rèn)所得到的腫瘤模型符合要求,將荷瘤鼠模型處死,切除腫瘤組織,用福爾馬林固定,石臘包埋,將石臘包埋組織置切片機(jī)的組織支承架上,做3μm厚的組織切片,置于潔凈的載玻片上,37℃干燥過夜,做HE染色。然后用光學(xué)顯微鏡確認(rèn)腫瘤組織試驗(yàn)組是否為肝細(xì)胞癌,對照組是否為腦膠質(zhì)瘤。2.FAM-L5在腫瘤組織及正常組織臟器內(nèi)的攝取及分布研究經(jīng)荷肝細(xì)胞癌HepG2細(xì)胞株和荷人膠質(zhì)瘤U87MG腫瘤裸鼠的尾靜脈注射FAM-L5(1mM,150μL),1小后處死動(dòng)物,分離腫瘤組織及肝臟組織,先用含有DAPI (4',6-diamidino-2-phenylindole)的染色劑對細(xì)胞核進(jìn)行染色,部分切片進(jìn)行GPC3免疫熒光顯像分析,然后在Olympus DP71熒光顯微鏡下(Olympus America, Center Valley, PA, USA)用藍(lán)光觀察FAM-L5在不同組織內(nèi)的分布情況,綠光觀察不同組織內(nèi)GPC3表達(dá)情況。3.FAM-L5在荷肝細(xì)胞癌腫瘤模型體內(nèi)的熒光生物學(xué)分布研究在暗室中,經(jīng)鼠尾靜脈注射FAM-L5(1mM,150μL) 1小時(shí)后,將荷瘤裸鼠麻醉處死,分離腫瘤及各臟器、組織后用生理鹽水多次沖洗,然后將腫瘤和正常臟器置于干凈的玻璃皿上,在Kodak in-Vivo Imaging System F (Kodak, American)下進(jìn)行熒光顯像測量腫瘤及各臟器、組織的熒光攝取量,比較肝細(xì)胞癌HepG2中瘤與正常組織和腦膠質(zhì)瘤U87腫瘤組織對FAM-L5攝取差異的比較。4.熒光顯像分析用熒光顯像儀Kodak in-Vivo Imaging System F配置的Kodak MI分析軟件進(jìn)行圖像分析。在熒光圖像上沿腫瘤和各組織的邊緣勾畫感興趣區(qū)(Region of interest, ROI),測量各感興趣區(qū)內(nèi)的熒光計(jì)數(shù),計(jì)算腫瘤與正常組織的腫瘤／非腫瘤比值(tumor/non-tumor,T/NT ratios)。四、PET分子探針18F-L5的合成和micro PET/CT顯像研究1.PET分子探針的合成利用氨基�；磻�(yīng)合成18F-NFP-L5完成靶向多肽L5的放射性標(biāo)記。18F-NOTA-L5放射性化學(xué)標(biāo)記：應(yīng)用A118F與NOTA-L5發(fā)生螯合反應(yīng),進(jìn)行’8F標(biāo)記。2. Micro PET/CT顯像荷肝細(xì)胞癌HepG2裸鼠經(jīng)尾靜脈注射18F標(biāo)記GPC3受體靶向多肽3.70～5.50MBq(100～150μCi) 1小時(shí)后用水合氯醛麻醉。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物置于俯臥位后行micro PET/CT顯像,實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的體溫用水循環(huán)加熱板使其保持穩(wěn)定。按程序經(jīng)低劑量CT掃描后進(jìn)行micro PET/CT掃描,掃描方式為3D采集,每床位10min,圖像采用3D迭代法(有序子集最大期望值法)進(jìn)行重建。利用Inven Research Workplace(IRW2.2)工作站進(jìn)行數(shù)據(jù)處理,PET數(shù)據(jù)經(jīng)CT衰減校正后利用濾波反投影法,重建冠狀面、橫斷面、矢狀面斷層圖像進(jìn)行分析,并與CT圖像融合,手動(dòng)勾畫腫瘤感興趣區(qū),工作站自動(dòng)計(jì)算SUVave。統(tǒng)計(jì)學(xué)分析采用SPSS 19.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析。HepG2細(xì)胞與HL-7702細(xì)胞與熒光多肽FAM-L5結(jié)合試驗(yàn)的相對熒光強(qiáng)度比較,采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)；熒光多肽活體顯像時(shí),實(shí)驗(yàn)組為荷HepG2腫瘤裸鼠與對照組為荷U87MG腫瘤裸鼠,其腫瘤／正常組織的相對熒光攝取強(qiáng)度比較采用配對樣本t檢驗(yàn)；P0.05認(rèn)為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。結(jié)果一、靶向GPC3受體多肽及其熒光多肽FAM-L5的合成1.GPC3靶向肽L5的合成固相合成的GPC3靶向肽L5呈現(xiàn)為白色粉末。經(jīng)質(zhì)譜分析鑒定,主峰分子量(m/z:Da)為1626.1,與L5理論分子量1625.86相符,證明合成正確。經(jīng)HPLC純化、分析結(jié)果顯示L5的純度為99.15%。2.FAM標(biāo)記熒光多肽FAM-L5的合成FAM-L5為黃色粉末。質(zhì)譜分析鑒定,FAM-L5的主峰分子量(m/z, Da)為1985.0,與FAM-L5理論分子量1984.18相符,證明標(biāo)記合成。經(jīng)HPLC純化、分析結(jié)果顯示,FAM-L5的純度為98.44%。3. NOTA修飾L5的合成NOTA修飾L5為白色粉末,質(zhì)譜分析鑒定,NOTA-L5的主峰分子量(m/z, Da)為1945.3,與NOTA-L5理論分子量2131.0相符,證明標(biāo)記合成。經(jīng)HPLC純化、分析結(jié)果顯示,NOTA-L5的純度為95.4%。4.驗(yàn)證肝細(xì)胞癌HepG2細(xì)胞和人正常肝細(xì)胞HL-7702細(xì)胞表達(dá)GPC3受體的實(shí)驗(yàn)：經(jīng)過細(xì)胞免疫熒光試驗(yàn),共聚焦顯像顯示肝細(xì)胞癌HepG2細(xì)胞高表達(dá)GPC3受體,而人正常肝細(xì)胞HL-7702細(xì)胞低表達(dá)GPC3受體。5.熒光多肽FAM-L5與細(xì)胞的結(jié)合實(shí)驗(yàn)從定性及定量試驗(yàn)結(jié)果分析表明：高表達(dá)GPC3受體的肝細(xì)胞癌細(xì)胞HepG2細(xì)胞膜高攝取熒光多肽FAM-L5,攝取熒光強(qiáng)度隨FAM-L5濃度提高而增強(qiáng)；在反應(yīng)體系中加入未標(biāo)記L5時(shí),未標(biāo)記多肽L5明顯抑制熒光多肽FAM-L5與HepG2的結(jié)合試驗(yàn)。低表達(dá)GPC3受體的人正常肝細(xì)胞HL-7702細(xì)胞低攝取FAM-L5,結(jié)合反應(yīng)的相對熒光強(qiáng)度明顯低于肝細(xì)胞癌HepG2 (14640±4155 vs 5672±2812,t=-4.729,P=0.001)。二、熒光多肽FAM-L5的體內(nèi)試驗(yàn)1.裸鼠腫瘤模型的建立4周齡無胸腺裸鼠皮下接種HepG2細(xì)胞,飼養(yǎng)14天左右可見腫瘤結(jié)節(jié),待4至6周腫瘤增大至1.0cm左右用于試驗(yàn)。共接種6批,每批5只,共30只,其中25只成瘤,5只無腫瘤生長,成瘤率為83.3%。為驗(yàn)證腫瘤模型是否符合要求,將其中1個(gè)腫瘤切下來進(jìn)行病理組織學(xué)檢測,病理結(jié)果顯示符合肝細(xì)胞癌改變。相同條件的無胸腺裸鼠皮下接種U87MG細(xì)胞,飼養(yǎng)14天左右可見腫瘤結(jié)節(jié),待4-6周腫瘤增大至1.0cm進(jìn)行試驗(yàn)。共接種3批,每批5只,共15只,其中12只成瘤,3只無腫瘤生長,成瘤率為80%。為驗(yàn)證腫瘤模型是否符合要求,其中1只腫瘤切下來進(jìn)行病理組織學(xué)檢測,病理結(jié)果顯示符合腦膠質(zhì)瘤改變。2.熒光多肽FAM-L5在腫瘤組織中的攝取及分布研究經(jīng)荷肝細(xì)胞癌裸鼠尾靜脈注射FAM-L5(1mM,150μL)1小時(shí)后,分離腫瘤組織,制作切片觀察熒光標(biāo)記多肽在腫瘤內(nèi)的分布情況,結(jié)果顯示腫瘤組織內(nèi)可見明顯熒光聚集。分離正常肝組織制作切片,觀察到正常肝組織內(nèi)有熒光分布但熒光強(qiáng)度明顯低于腫瘤組織。三、.肝細(xì)胞癌FAM-L5熒光受體顯像研究研究結(jié)果顯示注射FAM-L5 1小時(shí)后,肝細(xì)胞癌HepG2腫瘤組織內(nèi)呈現(xiàn)FAM-L5明顯高攝取,而正常的肝臟組織僅見熒光輕微攝取,相對熒光強(qiáng)度腫瘤／肝臟比值為14.28+7.90。從體內(nèi)分布看,該熒光多肽主要通過膽囊-腸道途徑排泄,注射1小時(shí)后,大部分熒光分布于膽囊及腸道內(nèi)。腦、雙肺、心臟、脾臟、雙腎及肌肉組織內(nèi)熒光分布均很低,提示非特異性攝取低。對照腫瘤人腦膠質(zhì)瘤U87MG,靜脈注射FAM-L5 1小時(shí)后,U87 MG腫瘤部分熒光攝取較低,僅略高于正常肝臟組織,其腫瘤／正常肝臟比值為1.44+0.53。兩種腫瘤攝取FAM-L5的相對熒光強(qiáng)度比較,肝細(xì)胞癌HepG2中瘤攝取FAM-L5的相對熒光強(qiáng)度明顯高于腦膠質(zhì)瘤U87MG(14.28±7.90 vs 1.44±0.53,t=3.69, P=0.008)。四、PET分子探針18F-L5的研制及PET/CT顯像研究1.18F-NFP-L5和18F-AlF-NOTA-L5的放化標(biāo)記18F-NFP-L5的放化標(biāo)記：順利合成了18F-NFP-L5,實(shí)現(xiàn)了靶向多肽L5的放射性標(biāo)記,標(biāo)記產(chǎn)物為約為10%。18F-AlF-NOTA-L5的放化標(biāo)記：以NOTA-L5為反應(yīng)前體,采用Al18F螫合反應(yīng),實(shí)現(xiàn)’8F標(biāo)記NOTA-L5�？倶�(biāo)記時(shí)間為60min,標(biāo)記率為14.6%-69.8%。2.荷瘤裸鼠micro PET/CT顯像研究2.118F-NFP-L5顯像結(jié)果：Micro PET/CT顯像研究,荷肝細(xì)胞癌HepG2裸鼠在注射顯像劑18F-NFP-L560分鐘后,腫瘤組織可見明顯放射性濃聚,且放射性濃聚程度明顯高于周圍軟組織,其中腫瘤／肝臟比值為1.46。2.218F-AlF-NOTA-L5顯像結(jié)果：Micro PET/CT顯像研究,荷肝細(xì)胞癌HepG2裸鼠在注射顯像劑18F-NOTA-L5 60分鐘后,腫瘤組織可見明顯放射性濃聚,且放射性濃聚程度明顯高于周圍軟組織,但是部分圖像中呈現(xiàn)出裸鼠全身骨骼攝取明顯增高,部分圖像顯示雙肺內(nèi)見放射性物質(zhì)沉積。結(jié)論1.本研究成功合成了靶向GPC3受體的多肽L5,合成純度為99.15%,可滿足研究需要。2.成功用FAM標(biāo)記L5,成功制備熒光探針FAM-L5,純度為98.44%,可滿足體內(nèi)及體外反應(yīng)的需求。3.體外熒光探針FAM-L5與細(xì)胞的結(jié)合試驗(yàn)表明FAM-L5能被高表達(dá)GPC3受體的細(xì)胞HepG2大量攝取,其攝取符合受體-配體競爭結(jié)合規(guī)律。4.腫瘤組織熒光顯像研究表明：熒光多肽FAM-L5能在肝細(xì)胞癌腫瘤組織中大量聚集。5.正常裸鼠體內(nèi)FAM-L5的熒光生物學(xué)分布研究顯示FAM-L5主要經(jīng)膽腸系統(tǒng)排泄。6.成功合成了PET探針18F-NFP-L5和18F-NOTA-L5,其中18F-NOTA-L5標(biāo)記率為14.6%-69.8%,標(biāo)記率較高,可以進(jìn)行大量動(dòng)物試驗(yàn)。7.經(jīng)micro PET/CT顯像研究顯示,18F-NFP-L5和18F-NOTA-L5能靶向肝細(xì)胞癌腫瘤組織。8.FAM-L5、18F-NFP-L5及18F-NOTA-L5都能靶向高表達(dá)GPC3受體的肝細(xì)胞癌腫瘤組織,可以作為靶向GPC3受體的熒光探針及PET探針。
【關(guān)鍵詞】：肝細(xì)胞癌 GPC3受體 L5 分子影像 熒光顯像 PET/CT顯像
【學(xué)位授予單位】：南方醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R735.7;R730.44
【目錄】：

• 摘要3-12
• ABSTRACT12-23
• 第一章 研究背景23-29
• 第二章 研究目的29-30
• 第三章 研究材料及相關(guān)儀器30-33
• 第四章 研究內(nèi)容及方法33-40
• 4.1 靶向GPC3受體多肽L5及其熒光多肽FAM-L5的合成33
• 4.2 熒光多肽FAM-L5的體外結(jié)合試驗(yàn)33-36
• 4.3 熒光多肽FAM-L5的體內(nèi)試驗(yàn)36-38
• 4.4 PET分子探針~(18)F-L5的合成和micro PET/CT顯像研究38-40
• 第五章 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析40-41
• 第六章 研究結(jié)果41-62
• 6.1 GPC3靶向肽L5和熒光多肽FAM-L5的合成41-45
• 6.2 熒光多肽FAM-L5的體外結(jié)合試驗(yàn)45-52
• 6.3 熒光標(biāo)記多肽在活體中的研究52-58
• 6.4 GPC3靶向多肽的micro PET/CT顯像研究58-62
• 第七章 討論62-67
• 第八章 研究結(jié)論67-68
• 參考文獻(xiàn)68-74
• 中英文縮略語對照表74-75
• 攻讀學(xué)位期間成果75-76
• 致謝76-77

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6 徐宏勇,李開宗,付由池,竇科峰,李景夢,何揚(yáng)舉;bcl-x,bax基因表達(dá)與肝細(xì)胞癌臨床病理特征的關(guān)系[J];第四軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào);2001年14期

7 蔡端;多中心源肝細(xì)胞癌的特征:與肝內(nèi)轉(zhuǎn)移的比較[J];國外醫(yī)學(xué).外科學(xué)分冊;2002年02期

8 張春平;與白介素-18水平升高有關(guān)的肝細(xì)胞癌自發(fā)性消退[J];國外醫(yī)學(xué)(內(nèi)科學(xué)分冊);2003年03期

9 薛海鷗,岳莉;兒童肝細(xì)胞癌1例報(bào)告[J];錦州醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);2003年04期

10 德力,白志剛,牧榮,賴玉書,金燦浩,夏醫(yī)君;血管內(nèi)皮細(xì)胞生長因子在肝細(xì)胞癌中的表達(dá)和預(yù)后的關(guān)系[J];內(nèi)蒙古醫(yī)學(xué)雜志;2003年04期

中國重要會議論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 卞讀軍;;肝細(xì)胞癌經(jīng)導(dǎo)管動(dòng)脈化療栓塞前后磁共振波譜研究[A];2009中華醫(yī)學(xué)會影像技術(shù)分會第十七次全國學(xué)術(shù)大會論文集[C];2009年

2 賈建偉;趙潔;;肝細(xì)胞癌領(lǐng)域研究現(xiàn)狀與進(jìn)展[A];中醫(yī)藥防治感染病之研究（九）——第九次全國中醫(yī)藥防治感染病學(xué)術(shù)交流大會論文集[C];2009年

3 陳孝平;;肝細(xì)胞癌外科治療進(jìn)展[A];湖北省第21屆腫瘤學(xué)術(shù)大會論文匯編[C];2011年

4 張杰;劉軍建;韓云;張寧;芮靜安;金城;周柔麗;;用熒光差異顯示法篩選肝細(xì)胞癌相關(guān)新基因[A];2000全國腫瘤學(xué)術(shù)大會論文集[C];2000年

5 馮仕庭;李子平;譚國勝;孫燦輝;彭振鵬;;中晚期肝細(xì)胞癌的多層螺旋CT血管造影表現(xiàn)及臨床應(yīng)用[A];中華醫(yī)學(xué)會第十三屆全國放射學(xué)大會論文匯編（下冊）[C];2006年

6 張法標(biāo);方哲平;王義;董輝;叢文銘;;上皮鈣粘素和β-連接素在兒童肝細(xì)胞癌中的表達(dá)及其臨床意義[A];2007年浙江省外科學(xué)學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2007年

7 陳鐘杰;;螺旋CT診斷原發(fā)型肝細(xì)胞癌28例[A];2008年浙江省放射學(xué)年會論文匯編[C];2008年

8 賈克東;;肝細(xì)胞癌的診斷進(jìn)展及治療現(xiàn)狀[A];全國中西醫(yī)結(jié)合肝病新進(jìn)展講習(xí)班、江西省第二次中西醫(yī)結(jié)合肝病學(xué)術(shù)會議資料匯編[C];2010年

9 李秋萍;龍順欽;楊小兵;鄧宏;蔡姣芝;潘宗奇;河文峰;周宇姝;歐陽育樹;廖桂雅;吳萬垠;;癌服靈治療晚期肝細(xì)胞癌的臨床研究[A];2012·中國醫(yī)師協(xié)會中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)師大會第三次會議論文集[C];2012年

10 朱明華;祝峙;劉曉紅;林靜;曲建慧;陳穎;曹曉哲;王力;倪燦榮;;乙型肝炎病毒感染與肝細(xì)胞癌發(fā)生關(guān)系的分子病理學(xué)研究[A];中華醫(yī)學(xué)會病理學(xué)分會2009年學(xué)術(shù)年會論文匯編[C];2009年

中國重要報(bào)紙全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 中國抗癌協(xié)會臨床腫瘤學(xué)協(xié)作專業(yè)委員會主任委員 秦叔逵;治療肝細(xì)胞癌 別只盯著靶向藥[N];健康報(bào);2013年

2 記者 王丹 管九蘋;肝細(xì)胞癌標(biāo)志物研究獲新進(jìn)展[N];健康報(bào);2013年

3 吳一福;四軍醫(yī)大唐都醫(yī)院發(fā)現(xiàn)硒蛋白P與肝細(xì)胞癌發(fā)生有關(guān)[N];中國醫(yī)藥報(bào);2007年

4 黎彬;肝癌研究重要進(jìn)展——預(yù)測肝癌轉(zhuǎn)移成為可能[N];中國醫(yī)藥報(bào);2004年

5 錢文彩;α2δ1陽性細(xì)胞為新的肝細(xì)胞癌干細(xì)胞[N];中國醫(yī)藥報(bào);2013年

6 新美;基礎(chǔ)研究進(jìn)展推動(dòng)肝臟病學(xué)進(jìn)步[N];中國醫(yī)藥報(bào);2008年

7 周金蓮;MIB-1和bcl-2表達(dá)預(yù)測肝癌發(fā)生[N];中國醫(yī)藥報(bào);2004年

8 張金山;要靈活運(yùn)用影像學(xué)提供的方法和手段[N];中國高新技術(shù)產(chǎn)業(yè)導(dǎo)報(bào);2001年

9 李杰;不能手術(shù)切除肝細(xì)胞癌的治療[N];科技日報(bào);2006年

10 ;修復(fù)肝細(xì)胞 改善肝功能[N];人民日報(bào)海外版;2006年

中國博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 白蘭;乙肝病毒捕獲細(xì)胞因子和信號級聯(lián)以逃避宿主免疫并維持持續(xù)感染[D];武漢大學(xué);2014年

2 何洪衛(wèi);肝細(xì)胞癌內(nèi)γδT細(xì)胞浸潤減少及功能缺陷的機(jī)制研究[D];復(fù)旦大學(xué);2014年

3 蔡曉燕;淋巴細(xì)胞在肝細(xì)胞癌和癌旁組織中的差異性表達(dá)研究[D];復(fù)旦大學(xué);2014年

4 向?qū)?細(xì)胞周期因子FoxM1促進(jìn)肝臟再殖的研究[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2015年

5 康富標(biāo);共刺激分子B7-H3在肝細(xì)胞癌的表達(dá)及相關(guān)機(jī)制研究[D];中國人民解放軍醫(yī)學(xué)院;2015年

6 楊純;Gankyrin正反饋調(diào)控Nrf2在肝細(xì)胞癌中發(fā)揮抗氧化作用[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2015年

7 陳媛媛;BTG2與肝細(xì)胞癌放療敏感性的相關(guān)研究[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2015年

8 高霞;PNPLA3基因單核苷酸多態(tài)性及基因表達(dá)與乙肝病毒感染易感性及乙肝相關(guān)肝細(xì)胞癌的關(guān)聯(lián)性研究[D];河北醫(yī)科大學(xué);2016年

9 彭晨星;microRNA結(jié)合位點(diǎn)單核苷酸多態(tài)性對肝細(xì)胞癌預(yù)后影響的相關(guān)性研究[D];河北醫(yī)科大學(xué);2016年

10 田偉;γδT細(xì)胞免疫治療肝細(xì)胞癌的實(shí)驗(yàn)研究[D];山西醫(yī)科大學(xué);2016年

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 陳中博;咖啡攝入與肝細(xì)胞癌發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)的Meta分析[D];河北醫(yī)科大學(xué);2015年

2 張華鵬;核受體輔激活蛋白5在肝細(xì)胞癌組織中的表達(dá)及其臨床意義[D];鄭州大學(xué);2015年

3 郭慧敏;血清sCD25測定在肝細(xì)胞癌診斷中的意義[D];鄭州大學(xué);2015年

4 凌青霞;雙氧化酶1（Duox1）在肝細(xì)胞癌中的表達(dá)調(diào)控及作用研究[D];復(fù)旦大學(xué);2014年

5 李會芬;血清Talin-1在肝細(xì)胞癌診斷中的作用[D];鄭州大學(xué);2015年

6 趙占學(xué);ILK與TNFAIP8在肝細(xì)胞癌中的表達(dá)及相互關(guān)系[D];青海大學(xué);2016年

7 邢時(shí)龍;2型糖尿病與乙型肝炎病毒相關(guān)肝細(xì)胞癌的相關(guān)性研究[D];山西醫(yī)科大學(xué);2016年

8 韋義;TRPV3在肝臟腫瘤中的表達(dá)及其與肝癌發(fā)展關(guān)系的研究[D];山西醫(yī)科大學(xué);2016年

9 劉菁;旋毛蟲ES抗原誘導(dǎo)DC對肝細(xì)胞癌預(yù)防性作用的實(shí)驗(yàn)研究[D];吉林大學(xué);2016年

10 熊淑晨;HULC在肝細(xì)胞癌中表達(dá)的病理學(xué)意義及與上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化作用的探討[D];新疆醫(yī)科大學(xué);2016年

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本文編號：569994