本文關鍵詞：腎病兔Apobec-1重組腺病毒降脂效應及機制研究

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【摘要】：目的觀察肝臟獲得性表達載脂蛋白B編輯催化多肽-1 (apolipoprotein B editing catalytic polypeptide-1, Apobec-1)對腎病兔血脂代謝的影響及肝臟Apobec-1、載脂蛋白B48 (apolipoprotein B48, ApoB48)、低密度脂蛋白受體(1ow density lipoprotein receptor, LDLR)、低密度脂蛋白受體相關蛋白(low density lipoprotein receptor related protein, LRP)等蛋白表達的影響,探究其降脂效應及其可能機制。方法6月齡健康雄性普通級新西蘭兔30只,體重1000-2000g,隨機分為3組：(1)假手術組(n=10)；(2)腎病組(n=10)；(3)Apobec-1治療組(n=10),置于代謝籠中飼養(yǎng)。適應性喂養(yǎng)1W,腎病組和Apobec-1治療組以30%戊巴比妥30mg/KG腹腔注射麻醉,無菌條件下行左腎切除；假手術組只探及腎包膜,并不切除左腎。1W后,腎病組和Apobec-1治療組耳緣靜脈注射阿霉素4mg/KG,假手術組注射等量生理鹽水。術后11W,Apobec-1治療組耳緣靜脈注射Apobec-1重組腺病毒(1x1013病毒顆粒/KG),腎病組及假手術組注射等量生理鹽水。術后12W,禁食12h后留取血液及24h尿液,隨后全部處死,血液、尿液及時送檢,通過雙縮脲比色法檢測24小時尿蛋白(24 hour urinary protein,24UPr)濃度：酶法測定白蛋白(Albumin, Alb)、尿素氮(Blood urea nitrogen, BUN)、肌酐(Creatinine, Cr)、總膽固醇(Total cholesterol, TC)、總甘油三酯(Total triglyceride, TG)和高密度脂蛋白(High density lipoprotein, HDL-C)濃度；Friedewald公式估算血漿極低密度載脂蛋白(Very low density lipoprotein, VLDL-C)、低密度脂蛋白(Low density lipoprotein, LDL-C)濃度；放射免疫法測定血漿載脂蛋白B100 (apolipoproteinB100, ApoB100)和ApoB48濃度；摘除腎臟,濾紙吸干后于10%中性福爾馬林溶液固定,通過HE染色觀察腎臟病理；摘除肝臟,濾紙吸干后剪取部分組織放置EP管中,-80℃低溫冰箱保存,通過Western blot方法測定肝臟Apobec-1, ApoB48, LDLR, LRP等蛋白的表達水平,對條帶進行相關光密度分析,通過與內參β-actin的條帶光密度值的比值來間接反映各蛋白的表達量。數據以x±s表示,運用SPSS 13.0統(tǒng)計軟件進行單因素方差分析,兩兩比較采用SNK-q檢驗,檢驗水準a=0.05。結果1.各組血清及尿液指標變化三組之間血尿指標比較顯示24UPr、Alb、BUN、Cr、TC、TG、VLDL-C、 LDL-C、ApoB100、ApoB48差異均有統(tǒng)計學意義(P0.05)。與假手術組相比,腎病組24UPr、BUN、Cr、TC、TG、LDL-C、LDL-C、ApoB100明顯升高(P0.05),Alb明顯下降(P0.05),而HDL-C、ApoB48未見明顯變化；與腎病組相比,Apobec-1治療組TC、TG、VLDL-C、LDL-C、ApoB100、ApoB48明顯下降(P0.05),而24UPr、Alb、BUN、Cr、HDL-C未見明顯變化；與假手術組比較,Apobec-1治療組24UPr、BUN、Cr增高(P0.05), Alb、ApoB48下降(P0.05),而TC、TG、VLDL-C、LDL-C、HDL-C、ApoB100未見明顯變化。2.各組腎臟病理改變假手術組腎組織結構無明顯異常；腎病組和apobec-1治療組腎臟組織細胞增生肥大、排列紊亂,腎小球囊壁增厚,局部可見粘連,腎間質增寬,充滿基質,可見大量炎性細胞浸潤,部分可見腎小球局灶性壞死。3.各組肝臟Apobec-1, ApoB48, LDLR, LRP等蛋白表達情況Western blot結果顯示,與假手術組比較,腎病組肝臟LDLR蛋白表達明顯下調(P0.05)；LRP蛋白表達明顯上調(P0.05)；而Apobec-1、ApoB48蛋白表達未見明顯變化；與腎病組、假手術組比較,Apobec-1治療組LDLR蛋白表達明顯下調(P0.05,P0.01),而Apobec-1、ApoB48、LRP蛋白表達明顯上調(P0.01)。結論(1) Apobec-1重組腺病毒感染腎病兔具有一定的降脂效應,并可達正常程度。(2) Apobec-1重組腺病毒感染腎病兔,可使腎病兔肝臟表達Apobec-1,并伴有ApoB48的合成,進而起到一定的降脂效應。(3) Apobec-1重組腺病毒感染腎病兔,可上調LRP,加速apoB48-脂蛋白的清除,進而起到一定降脂效應。
【關鍵詞】：低密度脂蛋白受體 低密度脂蛋白受體相關蛋白 高脂血癥 腎病綜合征 載脂蛋白B編輯催化多肽-1 載脂蛋白B100 載脂蛋白B48
【學位授予單位】：安徽醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R726.9
【目錄】：

• 中英文縮略語表7-8
• 中文摘要8-11
• Abstract11-15
• 1. 引言15-20
• 2. 材料與方法20-26
• 2.1 材料20-23
• 2.1.1 動物來源20
• 2.1.2 主要實驗儀器及試劑20-21
• 2.1.3 溶液配制21-22
• 2.1.4 Apobec-1重組腺病毒的制備22-23
• 2.2 實驗方法23-26
• 2.2.1 動物分組23
• 2.2.2 模型制備23
• 2.2.3 標本制備23-24
• 2.2.4 血液及尿液檢測方法24
• 2.2.5 腎臟組織病理檢測24
• 2.2.6 肝臟組織蛋白提取及Western Blot檢測24-25
• 2.2.6.1 肝臟組織蛋白的提取24-25
• 2.2.6.2 Western Blot檢測25
• 2.2.7 統(tǒng)計學處理25-26
• 3 結果26-31
• 3.1 各組兔血尿生化指標水平26-27
• 3.2 腎臟病理學改變27-28
• 3.3 肝臟LDLR、LRP蛋白表達比較28-29
• 3.4 肝臟Apobec-1、ApoB48蛋白表達變化29-31
• 4 討論31-36
• 4.1 腎病模型的建立32-33
• 4.2 血脂水平的變化33-34
• 4.3 Apobec-1腺病毒降脂效應的肝內可能機制34-35
• 4.4 Apobec-1腺病毒降脂效應的肝外可能機制35-36
• 4.5 展望與小結36
• 5 結論36-37
• 參考文獻37-41
• 附錄41-42
• 致謝42-43
• 綜述43-60
• 摘要43
• 引言43-44
• VLDL內質網內合成44-46
• VLDL內質網內轉出46-47
• VLDL轉運囊泡的形成47-49
• VTV與高爾基體的融合49-50
• VLDL在高爾基體中的加工過程及高爾基體轉出過程50-51
• 總結51-52
• 參考文獻52-60

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