本文關(guān)鍵詞：異丙酚對(duì)發(fā)育期小鼠大腦海馬齒回及周邊皮質(zhì)區(qū)神經(jīng)干細(xì)胞的影響

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【摘要】：研究背景:我國是一個(gè)人口大國,每年都有許多的兒童接受全麻手術(shù)和治療。麻醉藥物是否會(huì)對(duì)發(fā)育期兒童的智力產(chǎn)生影響?會(huì)不會(huì)導(dǎo)致以后的學(xué)習(xí)功能障礙?這一直是眾多家長關(guān)心的一個(gè)問題,也是麻醉這一領(lǐng)域一直爭(zhēng)議激烈的問題。認(rèn)知與學(xué)習(xí)是人類非常復(fù)雜的能力,受多種因素的影響;麻醉藥物多種多樣,發(fā)揮作用的機(jī)制也各不相同。因此到目前為止,雖然有一些臨床試驗(yàn)認(rèn)為:麻醉藥物對(duì)兒童的認(rèn)知功能存在影響,但其數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性仍然受到很大的質(zhì)疑。近幾年,相關(guān)的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn):暴露于臨床常用的麻醉藥物可以導(dǎo)致發(fā)育期動(dòng)物大腦神經(jīng)細(xì)胞的發(fā)育異常從而引起遠(yuǎn)期的認(rèn)知功能障礙和學(xué)習(xí)能力的下降。在我國目前臨床上最常用于小兒的全麻藥物是異丙酚。異丙酚由于誘導(dǎo)快速,作用時(shí)間短,恢復(fù)快等優(yōu)點(diǎn)備受麻醉醫(yī)生的喜愛,常用于小兒短小手術(shù)的麻醉及有創(chuàng)檢查。以往的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)認(rèn)為:麻醉藥物是通過抑制N-甲基-D-天門冬氨酸受體(NMDA)或者激活γ-氨基丁酸受體(GABA)產(chǎn)生的神經(jīng)毒性作用。異丙酚也是GABA受體的激動(dòng)劑,是否會(huì)有相應(yīng)的神經(jīng)毒性,目前國際上研究較少。臨床上關(guān)于異丙酚導(dǎo)致遠(yuǎn)期學(xué)習(xí)障礙的研究因其產(chǎn)生機(jī)制不明,也備受爭(zhēng)議。眾所周知,大腦是人類的重要功能器官,是脊髓動(dòng)物高級(jí)神經(jīng)系統(tǒng)的主要部分,是控制運(yùn)動(dòng),產(chǎn)生感覺實(shí)現(xiàn)高級(jí)功能的神經(jīng)中樞。其中,海馬被認(rèn)為與認(rèn)知、學(xué)習(xí)、記憶相關(guān)也是神經(jīng)細(xì)胞增殖的重要區(qū)域。而皮質(zhì)主要由錐體細(xì)胞構(gòu)成,由豐富的錐體細(xì)胞構(gòu)成的各種神經(jīng)環(huán)路來實(shí)現(xiàn)信息的傳導(dǎo)功能。發(fā)育期海馬齒回神經(jīng)干細(xì)胞的分化異常以及皮質(zhì)區(qū)成熟錐體細(xì)胞的減少和樹突發(fā)育的異常,有可能對(duì)遠(yuǎn)期的認(rèn)知和學(xué)習(xí)記憶功能產(chǎn)生重要影響。因此,我們研究異丙酚對(duì)發(fā)育期小鼠大腦海馬神經(jīng)干細(xì)胞及皮質(zhì)錐體神經(jīng)細(xì)胞的影響,尋求調(diào)控大腦認(rèn)知學(xué)習(xí)功能的機(jī)制。近年的研究表明,全麻藥物引起的認(rèn)知功能障礙與暴露于麻醉藥物的時(shí)期、時(shí)間長短、劑量等有相關(guān)性。出生后2周暴露于麻醉藥物就可以引起相關(guān)的神經(jīng)干細(xì)胞出現(xiàn)凋亡。P7是嚙齒類動(dòng)物大腦神經(jīng)細(xì)胞發(fā)育的高峰時(shí)期,這一時(shí)期暴露與麻醉藥物也出現(xiàn)相應(yīng)的凋亡高峰。最近的研究發(fā)現(xiàn):異丙酚可以影響成年動(dòng)物大腦海馬區(qū)新生神經(jīng)元的存活,干預(yù)神經(jīng)細(xì)胞的成熟;它可以顯著地減少三月齡小鼠大腦海馬齒回神經(jīng)干細(xì)胞分化為成熟的神經(jīng)細(xì)胞,轉(zhuǎn)為星形膠質(zhì)細(xì)胞。這一改變可能進(jìn)而影響到成熟的神經(jīng)元整合進(jìn)入神經(jīng)環(huán)路的過程,導(dǎo)致了信息在神經(jīng)細(xì)胞間的傳遞障礙。有研究表明:破壞海馬體及周圍的皮質(zhì)部分會(huì)造成失憶。對(duì)于發(fā)育期的動(dòng)物,異丙酚是否也通過干預(yù)海馬和皮質(zhì)區(qū)神經(jīng)干細(xì)胞的增殖及分化,導(dǎo)致臨時(shí)的信息傳導(dǎo)障礙以及神經(jīng)環(huán)路的形成而引起遠(yuǎn)期的學(xué)習(xí)功能障礙?研究方法:研究實(shí)驗(yàn)對(duì)象選擇:c57小鼠p7,連續(xù)3天,每天1次腹腔注射prop30mg/kg、prop60mg/kg、同體積脂肪乳劑構(gòu)建模型。免疫組化檢測(cè):海馬區(qū):dcx與brdu雙標(biāo)觀察異丙酚對(duì)神經(jīng)干細(xì)胞的增殖以及增殖的干細(xì)胞轉(zhuǎn)化為成熟神經(jīng)元的情況、neun染色觀察海馬區(qū)成熟神經(jīng)元數(shù)量的變化、高爾基染色觀察海馬區(qū)神經(jīng)元樹突棘形態(tài)變化。皮質(zhì)區(qū):map2b蛋白標(biāo)記觀察皮質(zhì)錐體細(xì)胞的樹突棘密度、高爾基染色觀察皮質(zhì)錐體細(xì)胞樹突棘形態(tài)、neun觀察皮質(zhì)區(qū)成熟神經(jīng)元數(shù)量、gfap觀察皮質(zhì)區(qū)星形膠質(zhì)細(xì)胞的數(shù)量變化。研究結(jié)果:1.運(yùn)用標(biāo)記細(xì)胞增殖的特異性抗原標(biāo)記物brdu與標(biāo)記成熟神經(jīng)元的dcx觀察異丙酚注射后對(duì)海馬齒回新增神經(jīng)干細(xì)胞增值的影響及增值的神經(jīng)干細(xì)胞分化為成熟神經(jīng)元的情況。熒光雙標(biāo)顯示:與對(duì)照組比較,30mg組brdu數(shù)量減少無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,60mg組brdu數(shù)量顯著減少;30mg組brdu+dcx數(shù)量減少無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,60mg組brdu+dcx數(shù)量顯著減少。藥物的劑量組間統(tǒng)計(jì)比較存在差異,以60mg組差異最為顯著。2.運(yùn)用成熟神經(jīng)元標(biāo)記物neun觀察不同劑量異丙酚注射后海馬齒回成熟神經(jīng)元數(shù)量。熒光標(biāo)記顯示:相同部位海馬齒回同等面積下的neun數(shù)量30mg組與對(duì)照組相比減少不明顯;60mg組與對(duì)照組相比細(xì)胞數(shù)量有減少但無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。3.運(yùn)用高爾基染色顯示海馬齒回顆粒神經(jīng)元樹突棘形態(tài):在蔡司顯微鏡x100光鏡下統(tǒng)計(jì)相同長度的顆粒細(xì)胞樹突棘總數(shù),30mg組與對(duì)照組相比樹突棘總數(shù)有顯著減少;60mg組與對(duì)照組相比樹突棘總數(shù)顯著減少。成熟蘑菇狀棘突30mg組與60mg組同對(duì)照組相比顯著減少;瘦長形棘突30mg組與60mg組同對(duì)照組比較明顯增多;丁圖狀棘突對(duì)照組,30mg組,60mg組3組比較無顯著差異。4.采用免疫熒光gfap標(biāo)記大腦皮質(zhì)中星形膠質(zhì)細(xì)胞數(shù)量:30mg組與對(duì)照組相比單位面積上GFAP標(biāo)記的星形膠質(zhì)細(xì)胞數(shù)量無顯著差異;60mg組與對(duì)照組相比單位面積上GFAP標(biāo)記的星形膠質(zhì)細(xì)胞數(shù)量無顯著差異。5.免疫熒光Neu N標(biāo)記大腦皮質(zhì)中成熟神經(jīng)元數(shù)量:30mg組與對(duì)照組相比單位面積上Neu N標(biāo)記的神經(jīng)元數(shù)量無顯著差異;60mg組與對(duì)照組相比單位面積上Neu N標(biāo)記的神經(jīng)元數(shù)量無顯著差異。6.MAP2B微觀相關(guān)蛋白標(biāo)記大腦皮質(zhì)錐體細(xì)胞樹突。采用光密度分析統(tǒng)計(jì)MAP2B的組間表達(dá)差異:與對(duì)照組相比,30mg組光密度分析MAP2B表達(dá)無顯著差異;60mg組光密度分析MAP2B表達(dá)明顯下降。7.高爾基染色顯示小鼠大腦皮質(zhì)錐體細(xì)胞樹突棘形態(tài):30mg組與對(duì)照組相比樹突棘總數(shù)減少無顯著差異,成熟蘑菇樣形態(tài)的樹突棘與對(duì)照組相比有顯著減少;60mg組與對(duì)照組相比,樹突棘總數(shù)有顯著減少,成熟蘑菇樣形態(tài)的樹突棘也顯著減少。研究結(jié)論:1.異丙酚抑制發(fā)育期小鼠海馬齒回神經(jīng)干細(xì)胞的分化與用藥劑量有相關(guān)性。2.異丙酚抑制成熟神經(jīng)元的分化數(shù)量,增加其凋亡與劑量呈相關(guān)性。3.異丙酚對(duì)發(fā)育小鼠海馬齒回的顆粒細(xì)胞及皮質(zhì)的錐體細(xì)胞樹突棘形態(tài)及數(shù)量的影響有劑量相關(guān)性。
【關(guān)鍵詞】：異丙酚 海馬齒回 皮質(zhì) 神經(jīng)干細(xì)胞 錐體細(xì)胞 樹突棘
【學(xué)位授予單位】：第三軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R614
【目錄】：

• 縮略語表4-5
• 英文摘要5-9
• 中文摘要9-12
• 第一章 前言12-15
• 1.1 選題緣由12
• 1.2 研究背景12-14
• 1.3 研究意義14
• 1.4 研究內(nèi)容14
• 1.5 研究方法14-15
• 第二章 異丙酚對(duì)發(fā)育期小鼠大腦海馬齒回神經(jīng)干細(xì)胞分化成熟的影響15-26
• 2.1 引言15
• 2.2 材料和方法15-20
• 2.3 結(jié)果20-23
• 2.4 討論23-24
• 2.5 小結(jié)24-26
• 第三章 異丙酚對(duì)發(fā)育期小鼠大腦海馬周邊皮質(zhì)區(qū)神經(jīng)細(xì)胞的影響26-33
• 3.1 引言26
• 3.2 材料與方法26-29
• 3.3 結(jié)果29-31
• 3.4 討論31-32
• 3.5 小結(jié)32-33
• 全文總結(jié)33-34
• 參考文獻(xiàn)34-39
• 文獻(xiàn)綜述 麻醉藥物對(duì)海馬神經(jīng)發(fā)生的影響39-50
• 參考文獻(xiàn)44-50
• 攻讀學(xué)位期間發(fā)表的論文50-51
• 致謝51

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本文編號(hào)：531625