本文關鍵詞：體外兔軟骨細胞的分離，培養(yǎng)與鑒定的研究

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【摘要】：背景骨性關節(jié)炎是一種以關節(jié)軟骨退行性變和繼發(fā)性骨質增生為特性的慢性關節(jié)疾病,因關節(jié)軟骨退化損傷導致關節(jié)邊緣和軟骨下骨反應性增生所致。是臨床上多發(fā)的老年退行性疾病。隨著我國的老齡化,骨性關節(jié)炎的發(fā)病率越來越高,該病造成的疼痛及活動不便嚴重影響老人們的生活作息�，F(xiàn)今對該病的治療仍然缺乏特效藥,軟骨的破壞過程中可能影響到軟骨細胞,而導致軟骨細胞分泌炎性細胞因子。研究表明再生軟骨細胞移植能有效的解決軟骨損傷,根治骨性關節(jié)炎。以前的傳統(tǒng)方法較復雜繁瑣,且容易污染,引起軟骨細胞死亡、降低成活率和質量,因此尋找簡單體外培養(yǎng)軟骨細胞的方法對骨性關節(jié)炎的治療非常重要。故本研究的目的是探討體外軟骨細胞的分離培養(yǎng)方法,以獲取大量分裂活躍具有高活力的軟骨細胞,修復軟骨缺損,為軟骨細胞成功移植、治愈骨關節(jié)炎提供理論基礎。目的：在體外對兔軟骨細胞的分離、培養(yǎng)以及試驗鑒定,在體外建立軟骨細胞培養(yǎng)的體系,培養(yǎng)出大量純度高活性高的軟骨細胞。為下一步的人工軟骨再造及軟骨移植奠定基礎的理論研究。方法耳緣靜脈麻醉新西蘭大白兔,在兔子胸口解刨,暴露出心臟動脈,最大量取血,應用離心機制備高濃度血小板血漿,冰箱內(nèi)封存,并防止污染,以備后期應用；無菌操作取出兔膝關節(jié)軟骨,在超凈臺上分離關節(jié)組織,提取軟骨組織,將其剪成lmmxlmm大小碎片,放入20 ml小燒杯中,PBS磷酸緩沖溶液沖洗3次,加入質量分數(shù)為0.1%的乙二胺四乙酸(EDTA)5ml置于常溫下靜止20分鐘后離心棄上清,加入相當3倍體積的0.25%胰蛋白酶,放置37℃恒溫振蕩器內(nèi)消化40 min,輕輕吹打棄去上清液,PBS沖洗2次,按照1：1比例加入質量分數(shù)為0.2%Ⅱ型膠原酶和質量分數(shù)為0.25%胰蛋白酶各5ml置于37℃恒溫振蕩器內(nèi)消化20 min,4℃低溫高速離心(1000r·min-1)5 min,離心后棄上清,加入6ml含0.2%Ⅱ型膠原酶消化液置于37℃恒溫振蕩器內(nèi)進行消化,每90分鐘取上清1次,剩余燒杯內(nèi)更換消化液繼續(xù)消化,取含體積分數(shù)為10%胎牛血清(FBS)的DMEM/F12培養(yǎng)基于上清液中和胰蛋白酶,高速離心收集沉淀細胞,所收集細胞重懸于DMEM/F12培養(yǎng)液(含10%FBS、青鏈霉素各100μg/ml)中。應用機械-雙酶消化法分離兔軟骨細胞,體外培養(yǎng)時實驗組加PRP,對照組常規(guī)培養(yǎng),通過顯微形態(tài)學觀察兩組細胞,運用Prism軟件、MTT比色法繪制兩組細胞增殖生長曲線。應用蘇木素-伊紅染色、Ⅱ型膠原免疫組織化學染色鑒定軟骨細胞,對比兩組培養(yǎng)的軟骨細胞的活性表達。結果改良后的機械-雙酶分離法,在分離軟骨細胞過程中,用時較傳統(tǒng)方法明顯縮短,在體外軟骨細胞的培養(yǎng)過程中,加入激活后的富血小板血漿(PRP),能促進軟骨細胞的分裂增殖,隨傳代次數(shù)增加后仍能具有較高的軟骨細胞的生物學特性。結論本試驗研究建立了較為簡單、方便的體外軟骨細胞分離方法,在培養(yǎng)過程中,加入激活后的PRP,能促進軟骨細胞的活性表達,在體外獲得大量的高純度、高活性軟骨細胞,這一結論為將來人工軟骨再造和移植提供理論基礎。
【關鍵詞】：兔軟骨細胞 細胞培養(yǎng) 富血小板血漿 軟骨移植
【學位授予單位】：新鄉(xiāng)醫(yī)學院
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R684.3
【目錄】：

• 摘要5-7
• Abstract7-9
• 前言9-10
• 材料和方法10-12
• 結果12-14
• 討論14-19
• 結論19-20
• 附圖20-23
• 參考文獻23-26
• 綜述：軟骨移植在治療骨性關節(jié)炎軟骨損傷中的臨床分析26-42
• 參考文獻38-42
• 附錄42-43
• 攻讀學位期間發(fā)表文章情況43-44
• 致謝44-45
• 個人簡歷45

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前3條

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本文編號：525831