本文關(guān)鍵詞：丙泊酚對(duì)發(fā)育期大鼠皮質(zhì)神經(jīng)元鈣離子的影響，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：全身麻醉藥是否導(dǎo)致發(fā)育期中樞神經(jīng)系統(tǒng)毒性是近年來(lái)深受關(guān)注的熱點(diǎn)問題。丙泊酚是臨床常用的靜脈麻醉藥物,具有起效迅速、作用時(shí)間短、蘇醒快、易控制和副作用少等優(yōu)點(diǎn),廣泛應(yīng)用小兒麻醉和重癥監(jiān)護(hù)室。但越來(lái)越多的在體或離體動(dòng)物實(shí)驗(yàn)證實(shí),靜脈麻醉藥丙泊酚對(duì)發(fā)育期神經(jīng)系統(tǒng)具有毒性作用。丙泊酚對(duì)發(fā)育期大腦神經(jīng)毒性的機(jī)制目前仍然不清楚,其中一個(gè)可能的機(jī)制是引起了神經(jīng)元內(nèi)鈣穩(wěn)態(tài)的絮亂。發(fā)育期神經(jīng)元有其特殊的生理特征,本研究擬通過(guò)體外培養(yǎng)的發(fā)育期神經(jīng)元,研究丙泊酚對(duì)發(fā)育期皮質(zhì)神經(jīng)鈣離子的影響。實(shí)驗(yàn)主要分為兩部分:一,優(yōu)化和改進(jìn)體外培養(yǎng)的原代發(fā)育期皮質(zhì)神經(jīng)元方法,觀察和鑒定發(fā)育期神經(jīng)元,培養(yǎng)純度高、活力好的神經(jīng)元,能夠滿足下一步實(shí)驗(yàn)的要求。二,激光共聚焦顯微鏡下觀察Fluo-4 AM熒光染色后發(fā)育期皮質(zhì)神經(jīng)元形態(tài)學(xué)變化;檢測(cè)不同濃度的丙泊酚(10、30、100μmol/L)對(duì)大鼠發(fā)育期皮質(zhì)神經(jīng)細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度的變化,評(píng)估丙泊酚對(duì)發(fā)育期皮質(zhì)神經(jīng)細(xì)胞L-型鈣離子通道的影響。第一部分新生大鼠皮質(zhì)神經(jīng)元原代培養(yǎng)方法目的建立一種穩(wěn)定、高效、簡(jiǎn)單可行的新生大鼠大腦皮質(zhì)神經(jīng)元原代培養(yǎng)方法。方法取新生24h內(nèi)的SD大鼠,分離皮質(zhì),采用木瓜蛋白酶消化、實(shí)驗(yàn)前多聚賴氨酸鋪板、不同機(jī)械吹打次數(shù)及細(xì)胞接種2h后全量換為添加B-27的Neurobasal A培養(yǎng)基的培養(yǎng)方法,MTT比色法分析檢測(cè)神經(jīng)元細(xì)胞成活率;于不同時(shí)間在倒置相差顯微鏡下觀察細(xì)胞的生長(zhǎng)狀態(tài);利用神經(jīng)元特異性標(biāo)志物微管蛋白相關(guān)標(biāo)志物2(microtubule associated protein 2,MAP2)鑒定神經(jīng)元純度。結(jié)果木瓜蛋白酶明顯增加原代培養(yǎng)神經(jīng)元細(xì)胞活力(P0.01),采用適度的機(jī)械吹打、實(shí)驗(yàn)前多聚賴氨酸鋪板及細(xì)胞接種2h后全量換為添加B-27的Neurobasal A培養(yǎng)基,對(duì)神經(jīng)細(xì)胞的活力沒有明顯的影響(P0.05)。大部分皮質(zhì)神經(jīng)元具有典型的神經(jīng)元形態(tài)特征;經(jīng)MAP2免疫熒光技術(shù)鑒定神經(jīng)元神經(jīng)元所占比例達(dá)95%以上,能夠滿足進(jìn)一步的實(shí)驗(yàn)要求。結(jié)論該方法操作簡(jiǎn)單、高效、方便可行,結(jié)果穩(wěn)定。第二部分丙泊酚對(duì)發(fā)育期大鼠皮質(zhì)神經(jīng)元鈣離子的影響目的觀察不同濃度丙泊酚對(duì)大鼠發(fā)育期大腦皮質(zhì)神經(jīng)元鈣離子([Ca2+]i)的影響,檢測(cè)丙泊酚對(duì)發(fā)育期皮質(zhì)神經(jīng)細(xì)胞L-型鈣離子通道的影響。方法原代培養(yǎng)7天的大鼠皮質(zhì)神經(jīng)元,隨機(jī)分為4組:對(duì)照組(Control組)、丙泊酚10μmol·L-1組(P10組)、丙泊酚30μmol·L-1組(P30組)、丙泊酚100μmol·L-1組(P100組);尼非地平干預(yù)實(shí)驗(yàn)分組:對(duì)照組(Control組)、丙泊酚組(Propofol 100μmol·L-1組)、尼非地平組(Nifedipine 10μmol·L-1組)、丙泊酚+尼非地平組(Nifedipine(10μmol·L-1)+Propofol(100μmol·L-1)組),Fluo-4AM鈣熒光指示劑染色,激光共聚焦顯微鏡下動(dòng)態(tài)檢測(cè)基礎(chǔ)值、丙泊酚預(yù)處理后和氯化鉀溶液誘發(fā)細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度的變化。結(jié)果培養(yǎng)7天的大鼠各組皮質(zhì)神經(jīng)元基礎(chǔ)值、丙泊酚預(yù)處理各組鈣熒光強(qiáng)度間比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);丙泊酚預(yù)處理后鈣熒光強(qiáng)度同基礎(chǔ)值比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);氯化鉀誘發(fā)后各組鈣熒光強(qiáng)度明顯高于基礎(chǔ)值(P0.01);P30、P100組與Control組比較氯化鉀誘發(fā)后鈣熒光強(qiáng)度峰值明顯降低(P0.01),分別下降了26.3%和28.6%;P30、P100與P10組比較明顯降低(P0.01),P10組與Control組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),P100與P30組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。尼非地平干預(yù)實(shí)驗(yàn)中,高鉀刺激細(xì)胞鈣熒光強(qiáng)隊(duì)明顯升高(P0.01);丙泊酚預(yù)處理后,氯化鉀誘發(fā)細(xì)胞內(nèi)鈣熒光強(qiáng)度峰值與對(duì)照組組比較,明顯降低(P0.01)。尼非地平預(yù)處理神經(jīng)元25min后,細(xì)胞內(nèi)鈣離子熒光強(qiáng)度與對(duì)照組比較明顯降低(P0.01)。尼非地平抑制高鉀導(dǎo)致的細(xì)胞內(nèi)鈣超載與丙泊酚預(yù)處理組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。結(jié)論丙泊酚抑制發(fā)育期大腦皮質(zhì)神經(jīng)元鈣內(nèi)流,可能主要是通過(guò)L-型電壓依賴性的鈣離子通路。
【關(guān)鍵詞】：大腦皮質(zhì) 神經(jīng)元 原代培養(yǎng) 新生大鼠 丙泊酚 發(fā)育期 神經(jīng)元 鈣離子
【學(xué)位授予單位】：寧夏醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R614
【目錄】：

• 摘要4-7
• ABSTRACT7-10
• 中英文縮略詞表10-12
• 前言12-16
• 第一次部分：新生大鼠皮質(zhì)神經(jīng)元原代培養(yǎng)方法16-28
• 材料與方法16-21
• 結(jié)果21-24
• 討論24-27
• 結(jié)論27-28
• 第二部分：丙泊酚對(duì)發(fā)育期大鼠皮質(zhì)神經(jīng)元鈣離子的影響28-41
• 材料與方法28-33
• 結(jié)果33-36
• 討論36-40
• 結(jié)論40-41
• 參考文獻(xiàn)41-44
• 綜述44-54
• 參考文獻(xiàn)51-54
• 致謝54-55
• 攻讀學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文55-56
• 個(gè)人簡(jiǎn)歷56

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前1條

1 譚少華;徐安定;苗海鋒;吳宜娟;;胰酶快速消化大鼠皮層神經(jīng)細(xì)胞原代培養(yǎng)方法分析[J];中國(guó)實(shí)用神經(jīng)疾病雜志;2013年08期

  本文關(guān)鍵詞：丙泊酚對(duì)發(fā)育期大鼠皮質(zhì)神經(jīng)元鈣離子的影響，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

，

本文編號(hào)：507134