發(fā)布時間：2017-07-01 00:05

  本文關(guān)鍵詞：代謝性內(nèi)毒素血癥在果糖誘發(fā)的NAFLD等代謝疾病中的作用及機制研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:1、建立果糖飲食誘發(fā)大鼠發(fā)生NAFLD等代謝疾病并伴代謝性內(nèi)毒素血癥的動物模型。2、探討通過腹腔注射LPS模擬代謝性內(nèi)毒素血癥,觀察其在代謝性疾病中發(fā)揮的機制作用。方法:正常對照組(Normal Control,NC組)給予大鼠正常飲食;高果糖組(High Fructose Diet,HFD組)大鼠給予8%的果糖水喂養(yǎng);內(nèi)毒素組(LPS組)大鼠給予正常飲食,皮下微量注入LPS(300μg?kg-1?d-1皮下注射)。每周測量大鼠體重,8周末禁食12小時后,糖耐量實驗結(jié)束時,經(jīng)乙醚麻醉后取腹主動脈血,3500r/min離心10min后取上層血漿,然后快速分裝置于-40℃?zhèn)溆谩Ｑ杆俜蛛x肝臟組織,部分置于4%多聚甲醛溶液固定,石蠟包埋,固定,切片,行蘇木素伊紅染色(HE染色);部分OCT包埋置于-80℃保存,隨后制作冰凍切片(油紅O染色);剩余樣本置于液氮速凍后轉(zhuǎn)-80℃冷凍保存,供western blot實驗使用。1、血脂系列及肝酶和血漿相關(guān)指標檢測酶法檢測各組血漿甘油三酯(TG)、總膽固醇(TC)、游離脂肪酸(FFA)、高密度脂蛋白(HDL-C)水平變化;酶法定量檢測肝臟組織TG。酶法檢測空腹血糖(FPG,Fasting plasm glucose);ELISA法檢測血漿空腹胰島素FINS(Fasting insulin)水平,并計算胰島素抵抗指數(shù),公式為:HOMA-IR=空腹血糖(mmol/L)*空腹胰島素(EU/ml)/22.5。2、血漿內(nèi)毒素與促炎因子檢測鱟試劑顯色法檢測血漿內(nèi)毒素(lps)水平變化;elisa法檢測血漿中腫瘤壞死因子α(tnf-α)、白介素6(il-6)水平變化,并分析lps與homa-ir的相關(guān)性分析。3、肝臟組織病理學(xué)檢測于4%多聚甲醛溶液中取出肝臟組織,常規(guī)石蠟包埋切片,厚度5μm,行he染色,光鏡下觀察肝組織病理學(xué)變化;與-80℃取出oct包埋組織,置于-25℃冰凍切片機復(fù)溫15min,橫切組織8μm,行油紅o染色,光鏡下觀察比較各組肝組織中的紅色脂質(zhì)。4、westernblot分析采用westernblot檢測肝組織胰島素受體底物蛋白1(irs1)及其磷酸化蛋白(p-irs1try632);同時檢測lps受體tolllikereceptor4(tlr4)蛋白水平。結(jié)果:1、體重變化及糖耐量結(jié)果實驗期間,各組大鼠總體狀態(tài)良好,有4只脫組。hfd組與lps組大鼠體重在2-8周變化顯著高于nc組(p0.01,p0.05)。與nc組相比,hfd組與lps組各時間點血糖均顯著升高(p0.01,p0.05)。說明hfd組與lps組大鼠發(fā)生糖耐量異常。2、血脂、肝酶檢測結(jié)果hfd組與lps組tg(血漿與肝組織)、tc、alt、ffa水平均顯著高于nc組(p0.01,p0.05),hdl-c水平則顯著降低(p0.05),hfd組與lps組上述指標變化無統(tǒng)計學(xué)差異。3、血漿內(nèi)毒素與胰島素及促炎因子檢測hfd組與lps組血漿lps、fins、fpg、及homa-ir顯著高于nc組(p0.05,p0.01)。hfd組與lps組tnf-α、il-6水平顯著高于nc組(p0.05),hfd組與lps組差異無統(tǒng)計學(xué)差異。hfd組與lps組lps水平與homa-ir呈正相關(guān)(rs=0.85,p0.01)。4、肝組織病理學(xué)結(jié)果NC組肝臟外表暗紅,無油膩感,HE染色可見肝細胞以中央靜脈為中心,向周圍呈放射狀排列。HFD組與LPS組肝臟外觀發(fā)白,切面有明顯油膩感;組織匯管區(qū)出現(xiàn)脂滴空泡,伴有氣球樣變。同時LPS組肝小葉和匯管區(qū)可見炎細胞浸潤,部分伴有點狀壞死。油紅O染色可見HFD組和LPS組出現(xiàn)大量紅色脂質(zhì)。5、western blot結(jié)果HFD組與LPS組肝組織TLR4表達顯著升高(P0.01),IRS1、p-IRS1Tyr632/IRS1比值則顯著降低(P0.05),HFD組與LPS組相比無統(tǒng)計學(xué)差異。結(jié)論:1、高果糖飲食可誘發(fā)大鼠發(fā)生多種代謝疾病,如NAFLD等,表現(xiàn)為體重增加(腹部肥胖型)、血脂及肝酶異常、糖耐量受損、IR、肝組織脂肪變性、釋放促炎因子、胰島素信號通路受損(胰島素受體底物表達減少),且存在代謝性內(nèi)毒素血癥。其發(fā)病特征與人類發(fā)病十分相似。2、高果糖飲食誘發(fā)代謝疾病中LPS通過與TLR4結(jié)合,觸發(fā)炎癥因子表達增加,引發(fā)肝臟及外周發(fā)生胰島素抵抗,促發(fā)NAFLD等代謝疾病的發(fā)生發(fā)展。
【關(guān)鍵詞】：代謝性內(nèi)毒素血癥 非酒精性脂肪性肝病 胰島素抵抗 促炎因子
【學(xué)位授予單位】：山西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R589
【目錄】：

• 摘要5-8
• Abstract8-12
• 常用縮寫詞中英文對照表12-13
• 前言13-15
• 實驗一 高果糖飲食誘導(dǎo)大鼠發(fā)生代謝疾病且伴代謝性內(nèi)毒素血癥模型研究15-23
• 1 材料與方法15-19
• 1.1 材料15-16
• 1.2 實驗方法16-19
• 2 結(jié)果19-23
• 實驗二 探討通過LPS模擬代謝性內(nèi)毒素血癥觀察其在代謝疾病中發(fā)揮的機制作用23-32
• 1 材料與方法23-27
• 1.1 材料23-24
• 1.2 實驗方法24-27
• 2 結(jié)果27-32
• 討論32-35
• 結(jié)論35-36
• 參考文獻36-38
• 綜述38-47
• 參考文獻43-47
• 致謝47-49
• 在學(xué)期間承擔/參與的科研課題與研究成果49-50
• 個人簡歷50

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本文編號：503911