本文關(guān)鍵詞：時(shí)鐘報(bào)告基因體系的研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的時(shí)鐘報(bào)告基因檢測(cè)體系廣泛應(yīng)用于晝夜節(jié)律的研究，為了使用該體系分析血清中節(jié)律因子的差異，需要回答三個(gè)問(wèn)題。第一，據(jù)文獻(xiàn)記載，時(shí)鐘報(bào)告基因體系在檢測(cè)熒光信號(hào)時(shí)，其培養(yǎng)基中不含血清成分。因此需要明確在培養(yǎng)基中添加血清是否影響細(xì)胞的狀態(tài)，是否影響對(duì)于熒光信號(hào)的檢測(cè)；第二，需要明確不同時(shí)間點(diǎn)采集的血樣是否含有不同的節(jié)律信號(hào)分子。第三，需要分析麻醉劑對(duì)于分子時(shí)鐘的影響，以選擇合適的麻醉方法。 方法分別使用含胎牛血清和B27的培養(yǎng)基，培養(yǎng)表達(dá)報(bào)告基因Per2-dluc和Bmal1-dluc的U2OS細(xì)胞，通過(guò)形態(tài)學(xué)、臺(tái)盤藍(lán)計(jì)數(shù)和流式細(xì)胞分析方法比較不同培養(yǎng)條件下細(xì)胞生長(zhǎng)、增殖和細(xì)胞周期水平的差異；使用Lumicycle系統(tǒng)檢測(cè)細(xì)胞中Bmal1和Per2表達(dá)晝夜波動(dòng)水平的差異。使用三氯乙醇（TCOH，水合氯醛的主要藥效成分）處理表達(dá)Bmal1-dluc或Per2-dluc的U2OS細(xì)胞，分析TCOH是否直接影響分子時(shí)鐘。使用水合氯醛或二氧化碳麻醉大鼠的血清，培養(yǎng)表達(dá)Bmal1-dluc或Per2-dluc的U2OS細(xì)胞，分析基因晝夜表達(dá)波動(dòng)水平的差異。 結(jié)果含胎牛血清和B27的培養(yǎng)基兩種培養(yǎng)條件下細(xì)胞生長(zhǎng)、增殖、細(xì)胞周期以及Bmal1和Per2表達(dá)晝夜波動(dòng)均無(wú)明顯差異。采集于不同時(shí)間點(diǎn)的血清，其誘導(dǎo)細(xì)胞節(jié)律同步化的功能基本相似。在1.5mM的TCOH作用下，，Bmal1的表達(dá)波動(dòng)周期延長(zhǎng)了3h，在3mM的TCOH作用下，Bmal1的表達(dá)波動(dòng)周期延長(zhǎng)5小時(shí)。但是，低濃度TCOH對(duì)于Bmal1的表達(dá)波動(dòng)周期無(wú)明顯影響。TCOH對(duì)于Per2的表達(dá)波動(dòng)周期無(wú)明顯影響。水合氯醛麻醉的大鼠的血清也具有調(diào)節(jié)Bmal1表達(dá)波動(dòng)周期的效果，提示進(jìn)行晝夜節(jié)律研究中需要選擇合適的麻醉方法。 結(jié)論U2OS細(xì)胞可以用于分析血清中節(jié)律因子的分析；不同時(shí)間采集血清樣進(jìn)行分析是一種可行的方式；TCOH能夠直接調(diào)控分子時(shí)鐘；不能使用水合氯醛麻醉動(dòng)物以進(jìn)行血清節(jié)律分子的研究。
【關(guān)鍵詞】：Bmal1 晝夜節(jié)律 血清刺激 三氯乙醇 報(bào)告基因
【學(xué)位授予單位】：首都醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R440;Q78
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-8
• 前言8-10
• 第一部分：分子時(shí)鐘報(bào)告基因體系用于血清節(jié)律因子分析的優(yōu)化10-28
• 1.材料與方法10-17
• 2.結(jié)果17-23
• 3. 討論23-25
• 參考文獻(xiàn)25-28
• 第二部分：三氯乙醇對(duì)于分子時(shí)鐘的調(diào)控的研究28-49
• 1. 材料與方法28-37
• 2. 結(jié)果37-43
• 3. 討論43-44
• 結(jié)論44-45
• 參考文獻(xiàn)45-49
• 文獻(xiàn)綜述49-77
• 參考文獻(xiàn)62-77
• 攻讀學(xué)位期間發(fā)表文章情況77-78
• 致謝78-79
• 個(gè)人簡(jiǎn)歷79

【共引文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：499639