本文關(guān)鍵詞：丹參酸A對心肌細胞離子通道以及收縮力的調(diào)控作用，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：L-型鈣離子通道(L-type calcium channels,LTCCs)介導(dǎo)并調(diào)控Ca2+進入細胞,對心肌細胞的正常生理功能有重要的意義。LTCCs主要分布于肌纖維膜上,能夠被去極化電壓所激活,同時內(nèi)流的Ca2+則能引起通道失活關(guān)閉。L-型鈣離子電流(L-type calcium current,ICa-L)不僅在心肌的興奮-收縮耦聯(lián)中起著極為重要的作用,同時參與心肌動作電位的形成和維持并與心律失常的發(fā)生有關(guān)。鈣通道阻滯劑能夠抑制心肌細胞Ca2+內(nèi)流,降低細胞內(nèi)鈣,減弱心肌收縮力,降低心肌氧耗量,在臨床上可用于高血壓,冠心病,急性左心衰等病癥。慢激活延遲整流鉀電流(the slowly activating delayed rectifier potassium current,IKs)和快激活延遲整流鉀電流(the rapidly activating delayed rectifier potassium current,IKr)在心肌動作電位的復(fù)極化過程中發(fā)揮重要作用。當電學重構(gòu)或基因突變導(dǎo)致IKs和IKr通道功能異常時,將引起K+外流減少,使心肌復(fù)極減慢,動作電位延長,產(chǎn)生Q-T間期延長綜合征(Long QT syndrome,LQTS),表現(xiàn)為心電圖Q-T間期延長并發(fā)生惡性心律失常性暈厥及猝死。IKs和IKr抑制劑則可能導(dǎo)致Q-T間期延長而引發(fā)心律失常。丹參(Salvia miltiorrhiza)在中國有幾千年的臨床應(yīng)用歷史,它被廣泛用于治療高血壓,冠心病,心肌梗塞,血液循環(huán)疾病和其他的心血管疾病。越來越多的研究表明,丹參主要的水溶性成分為丹參酸A(Salvianic acid A,SAA),具有多種藥理學活性,如抗炎和抗腫瘤,神經(jīng)和心肌保護作用,提高免疫力等。在前期的工作中,我們發(fā)現(xiàn)丹參注射液可以阻斷LTCCs,SAA作為丹參注射液主要的成分之一,可能是丹參注射液阻斷LTCCs發(fā)揮心肌保護作用的物質(zhì)基礎(chǔ)。目的:本研究主要探討了SAA心臟保護作用的機制。通過電生理膜片鉗技術(shù)觀察SAA對大鼠心室肌細胞LTCCs以及HEK293細胞上表達的KCNQ1/KCNE1、h ERG通道電流的調(diào)控作用,通過Ion Optix測量系統(tǒng)觀察SAA對大鼠心室肌細胞收縮力的影響。方法:(1)成年大鼠心室肌細胞分離成年雄性Sprague-Dawley大鼠麻醉后開胸取出心臟進行急性分離,心臟在Langendorff裝置上用含0.02%膠原酶II的無鈣臺氏液在37°C下進行酶解消化。酶消化完畢后自左心室分段剪取心室肌組織放入盛有Kreb’s(KB液)的試管中輕輕吹打使之分散成單個細胞。單個心肌細胞通過200目尼龍網(wǎng)過濾收集,收集的心室肌細胞在室溫下靜置于KB液中1小時后逐漸增加KB液中Ca2+濃度直到1.8 m M。而大鼠缺血性心室肌細胞則通過對大鼠尾靜脈注射垂體后葉素誘導(dǎo)心肌缺血10分鐘后參照正常大鼠心肌細胞分離方法準備。所分離的心室肌細胞需在分離后6小時內(nèi)進行實驗。全細胞膜片鉗技術(shù)記錄SAA對ICa-L及其動力學過程的影響。(2)細胞培養(yǎng)HEK293細胞系在37°C,5%CO2和95%空氣條件下常規(guī)培養(yǎng),并每隔1-2天進行細胞傳代。HEK293細胞需要經(jīng)過脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染才能表達人心臟KCNQ1/KCNE1(IKs)鉀離子通道。表達h ERG通道(IKr)的HEK293為穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細胞株培養(yǎng)后可直接用于膜片鉗實驗。穿孔膜片鉗技術(shù)記錄SAA對IKs和IKr及其動力學過程的影響。(3)細胞收縮測定成年雄性Sprague-Dawley大鼠心臟進行急性分離,用經(jīng)典酶解法分離得到單個心室肌細胞。所分離的心室肌細胞需在分離后6小時內(nèi)進行實驗。細胞收縮與離子濃度同步測量系統(tǒng)則用于檢測分離的成年大鼠心肌收縮力。結(jié)果:1心室肌細胞ICa-L的鑒定將細胞膜鉗制于-80 m V,采用不同程度的去極化(-60-+60 m V,Δ10 m V)激活I(lǐng)Ca-L。結(jié)果顯示ICa-L能夠被特異性鈣通道阻斷劑維拉帕米幾乎完全阻斷(P0.05)。2 SAA對心室肌細胞ICa-L的抑制作用3×10-4 M SAA可顯著抑制心室肌細胞ICa-L,抑制率為35.5±0.9%。細胞外液沖洗后ICa-L可部分恢復(fù)到用藥前水平(19.8±2.7%)(n=5)。3 SAA對心室肌細胞ICa-L作用的量效關(guān)系結(jié)果顯示,SAA可濃度依賴性抑制ICa-L。3×10-6、10-5、3×10-5、10-4和3×10-4 M SAA對ICa-L的抑制率分別為9.5±0.9%、21.0±2.1%、29.6±1.8%、34.6±1.9%和39.5±1.9%(n=5)。4 SAA對心室肌細胞ICa-L的電流-電壓(I-V)關(guān)系曲線的作用I-V關(guān)系曲線隨SAA濃度增加而逐步上移,表明SAA濃度依賴性地抑制ICa-L,但對激活電位,峰電位和翻轉(zhuǎn)電位無顯著性改變。5 SAA對心室肌細胞ICa-L穩(wěn)態(tài)激活曲線和失活曲線的影響SAA對心室肌細胞ICa-L穩(wěn)態(tài)激活和失活無明顯作用。0、3×10-6、3×10-5、3×10-4 M SAA作用后心室肌細胞ICa-L激活曲線半最大激活電壓(V1/2)/斜率因子(k)分別為:-10.40±0.64 m V/7.03±0.58;-9.53±0.69 m V/6.99±0.62;-8.16±0.69 m V/6.99±0.61;-8.61±0.69 m V/6.88±0.61(P0.05,n=5)。0、3×10-6、3×10-5、3×10-4 M SAA作用后心室肌細胞ICa-L失活曲線V1/2/k分別為:-32.03±0.15 m V/4.62±0.13;-31.34±0.08 m V/4.84±0.08;-30.75±0.01 m V/4.98±0.01;-30.94±0.02 m V/5.08±0.02(P0.05,n=5)。6 SAA對缺血性心室肌細胞ICa-L的作用3×10-4 M SAA可使缺血性心肌細胞ICa-L抑制35.2±0.5%(P0.05,n=5),結(jié)果與正常細胞一致。7 SAA對IKs的影響結(jié)果顯示3×10-4 M SAA對IKs沒有顯著性的作用2.68±0.9%(P=NS,n=6)。8 SAA對IKr的影響結(jié)果顯示3×10-4 M SAA對IKr沒有顯著性的作用3.80±0.5%(P=NS,n=6)。9 SAA對心室肌細胞收縮的抑制作用3×10-7和10-6 M SAA均可顯著抑制心室肌細胞收縮力,抑制率分別為33.48±0.75%(P0.05,n=5),92.98±0.48%(P0.05,n=5)。結(jié)論:在本研究中,我們探討了SAA的心臟保護機制,為SAA的進一步研究和臨床應(yīng)用提供了理論依據(jù)。結(jié)果表明,SAA可濃度依賴性抑制心室肌細胞ICa-L,減弱心室肌收縮力,從而降低心肌耗氧量發(fā)揮其心肌保護作用。3×10-4 M SAA對IKs和IKr沒有顯著性作用,表明SAA在發(fā)揮心肌保護作用的同時不會產(chǎn)生Q-T間期延長綜合征等心律失常的風險。
【關(guān)鍵詞】：丹參酸A L-型鈣電流 心肌收縮力 慢激活延遲整流鉀電流 快激活延遲整流鉀電流
【學位授予單位】：河北醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R285.5
【目錄】：

• 中文摘要4-8
• 英文摘要8-13
• 英文縮寫13-14
• 前言14-15
• 材料與方法15-22
• 結(jié)果22-24
• 附圖24-31
• 討論31-34
• 結(jié)論34
• 參考文獻34-39
• 綜述 丹參酸A心血管保護作用的機制39-49
• 參考文獻44-49
• 致謝49-50
• 個人簡歷50

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 ;Salvia miltiorrhiza and ischemic diseases[J];Acta Pharmacologica Sinica;2000年12期

2 袁恒杰;;丹參素藥理作用研究新進展[J];中國醫(yī)院藥學雜志;2006年05期

  本文關(guān)鍵詞：丹參酸A對心肌細胞離子通道以及收縮力的調(diào)控作用，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：447778