本文關鍵詞：孕期睡眠剝奪對子代情感和認知功能影響及機制研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：第一部分 孕期睡眠剝奪對子代情感和認知功能的影響目的：研究妊娠不同階段睡眠剝奪后對其子代成年后情感和認知功能的影響,采用輕輕觸摸法建立孕期睡眠剝奪大鼠模型,選用其子代大鼠(6-8周齡)為研究對象,觀察孕期不同階段睡眠剝奪對子代行為的影響,為孕期護理和神經、精神疾病的治療提供一定的實驗依據(jù)和理論基礎。方法：實驗采用Sprague-Dawley孕鼠,按隨機原則分為四個組,分別為正常對照組(CTR組)、妊娠早期睡眠剝奪組(ESD組)、妊娠中期睡眠剝奪組(MSD組)和妊娠晚期睡眠剝奪組(LSD組)。采用輕輕觸摸法對實驗孕鼠每天進行6個小時(12：00-18：00)的睡眠剝奪,持續(xù)一周時間,待其子代成年后(6-8周齡)進行行為學檢測：1.用高架十字迷宮和新穎環(huán)境抑制攝食測試檢測子代大鼠的焦慮樣行為；2.用強迫游泳實驗檢測子代大鼠的抑郁狀態(tài)；3.用Morris水迷宮實驗檢測大鼠的空間學習記憶能力。結果：高架十字迷宮實驗中,與對照組大鼠相比,經歷不同階段孕期睡眠剝奪后出生的大鼠,它們進入開放臂的時間和次數(shù)都明顯減少；新穎環(huán)境抑制攝食測試結果顯示睡眠剝奪組大鼠與對照組相比,進食的潛伏期顯著延長、攝食量明顯減少；這均說明孕期睡眠剝奪導致子代大鼠的焦慮樣行為；強迫游泳實驗發(fā)現(xiàn)睡眠剝奪組所產的大鼠,它們的不動潛伏期和不動時間都顯著性縮短,而且以妊娠早期、晚期睡眠剝奪更明顯,表明孕期睡眠剝奪后出生大鼠表現(xiàn)出明顯的抑郁樣行為；Morris水迷宮實驗中,定位航行實驗顯示,孕期睡眠剝奪組所產大鼠的平均逃離潛伏期比對照組較長,空間探索實驗顯示,孕期睡眠剝奪組所產大鼠與對照組相比,在目標象限游泳的時間顯著減少,而各組大鼠的游泳速度無顯著差異。結論：孕期不同階段的睡眠剝奪導致子代大鼠成年后情感障礙,產生焦慮、抑郁樣行為,并且損傷子代大鼠的空間學習記憶能力。第二部分孕期睡眠剝奪對子代學習記憶影響機制探討目的：進一步研究孕期睡眠剝奪對子代學習記憶影響的可能機制,從海馬神經發(fā)生、突觸可塑性兩方面探討其機制。方法：模型建立及分組同第一部分。免疫熒光實驗方法：1.孕期睡眠剝奪組和對照組出生的大鼠滿2周時通過腹腔注射5-溴脫氧尿嘧啶核苷(BrdU,50mg/kg,每天一次),連續(xù)注射7天,4周后將大鼠麻醉,用生理鹽水和4%的多聚甲醛進行心臟灌流,然后取腦組織冰凍切片,運用免疫熒光實驗方法檢測海馬齒狀回區(qū)域神經元存活的情況。用BrdU和NeuN(成熟神經元特異性核蛋白標志)抗體雙標來檢測成熟神經元的存活情況,用BrdU和GFAP (星行膠質細胞標志)抗體雙標來檢測星行膠質細胞的存活情況。2.子代大鼠滿6周時給予腹腔注射BrdU (100mg/kg,每天一次)連續(xù)三天,24小時后將大鼠麻醉,用生理鹽水和4%的多聚甲醛進行心臟灌流,然后取腦組織冰凍切片,用免疫熒光實驗方法檢測其海馬齒狀回區(qū)域的神經細胞增殖情況。用DCX(雙皮質素)抗體來檢測未成熟神經元的變化,用BrdU和NeuN抗體雙標來檢測成熟神經元的增殖變化,用BrdU和GFAP抗體雙標來檢測星行膠質細胞的增殖情況。電生理實驗方法：1.在體電生理實驗：通過誘導大鼠海馬CA3-CA1通路的LTP和LTD,來檢測子代大鼠的突觸可塑性變化。LTP/LTD的大小是用高頻／低頻刺激之后的fEPSP的斜率與基線fEPSP的斜率進行比較。2.離體腦片膜片鉗實驗：成年大鼠海馬腦片制備：大鼠(6-8周齡)用30%的水合氯醛麻醉,心臟灌流氧飽和的NMDG人工腦脊液(NMDG ACSF),然后迅速取腦組織進行切片(400μm),腦片移入HEPES ACSF孵育槽里30℃孵育1小時后,轉入實驗記錄槽內,采用離體腦片膜片鉗技術來檢測大鼠海馬CA1區(qū)錐體神經元微小興奮性突觸后電流(mEPSC)的頻率及幅度。結果：免疫熒光實驗結果：1.孕期不同階段睡眠剝奪后出生大鼠成年后其海馬齒狀回區(qū)域神經元存活明顯減少。孕期SD組所產大鼠與對照組相比,BrdU/NeuN雙陽性細胞數(shù)明顯減少,而BrdU/GFAP雙陽性細胞數(shù)無明顯差異。2.孕期不同階段睡眠剝奪后出生大鼠成年后其海馬齒狀回區(qū)域神經細胞增殖減少。孕期SD組所產大鼠與對照組相比,BrdU和NeuN共表達的神經細胞明顯減少,DCX陽性細胞與對照組相比顯著減少,而BrdU和GFAP共表達的星形膠質細胞數(shù)無顯著差異。電生理實驗結果：1.在體電生理實驗：妊娠不同階段睡眠剝奪損傷子代大鼠海馬的LTP/LTD。與CTR組相比,ESD、MSD、LSD組的LTP幅度顯著降低,而LTD幅度增加；2.腦片膜片鉗實驗：妊娠不同階段睡眠剝奪抑制了子代大鼠海馬的興奮性突觸傳遞,SD組mEPSC的頻率和幅度與CTR組相比較明顯減少。結論：妊娠不同階段睡眠剝奪損害子代學習記憶的機制,可能與海馬神經發(fā)生受抑和突觸可塑性降低有關。
【關鍵詞】：孕期睡眠剝奪 情感障礙 空間學習記憶 孕期睡眠剝奪 神經發(fā)生 突觸可塑性
【學位授予單位】：重慶醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R740
【目錄】：

• 英漢縮略語名詞對照5-6
• 中文摘要6-10
• 英文摘要10-15
• 前言15-17
• 第一部分 孕期睡眠剝奪對子代情感和認知功能的影響17-31
• 前言17
• 1 材料和方法17-21
• 2 結果21-25
• 3 討論25-28
• 參考文獻28-31
• 第二部分 孕期睡眠剝奪對子代學習記憶影響的機制探討31-45
• 前言31
• 1 材料和方法31-36
• 2 結果36-41
• 3 討論41-43
• 參考文獻43-45
• 全文總結45-46
• 文獻綜述46-52
• 參考文獻49-52
• 致謝52-53
• 攻讀碩士期間的研究成果及發(fā)表的論文53

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本文編號：435837