本文關(guān)鍵詞：MicroRNA-126對大鼠胰島β細胞胰島素信號通路的調(diào)控作用及機制，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:優(yōu)化SD大鼠胰島β細胞的分離、純化和培養(yǎng)的方法與條件,為研究micro RNA-126(mi R-126)在2型糖尿病發(fā)病中的作用與機制提供活性與功能良好的胰島β細胞。方法:SD大鼠水合氯醛腹腔注射麻醉,經(jīng)膽總管逆行灌注采用8m L膠原酶Ⅴ(1mg/m L含DNase I 100U)、原位消化后Hitopaque-1077梯度離心分離純化胰島細胞并作培養(yǎng),再將培養(yǎng)后的胰島細胞用胰蛋白酶消化使其分散成單個的β細胞后對其進行培養(yǎng)。結(jié)果:每只大鼠用上述方法可分離、純化得到胰島細胞372±45個,胰島細胞純度大于90%,胰島細胞存活率大于95%。結(jié)論:膽總管逆行灌注膠原酶Ⅴ(含DNase I 100U)原位消化分離胰島細胞,可有效避免胰腺膠狀物質(zhì)的產(chǎn)生,提高胰島細胞的收獲量與實驗成功率;Hitopque-1077梯度離心純化胰島細胞的方法具有操作簡單、便捷、經(jīng)濟等優(yōu)點,純化得到的胰島細胞純度與存活率高,功能活性強;使用改良后DMEM高糖培養(yǎng)液(15%FBS,50μmol/Lβ-巰基乙醇,10 mmol/L HEPES)培養(yǎng)的胰島β細胞形態(tài)完整,活力強,適宜用于胰島β細胞培養(yǎng)。研究背景:隨著人類生活方式與生存環(huán)境的改變,糖尿病患者逐年增多,臨床90%以上的糖尿病患者為2型糖尿病,胰島素抵抗是2型糖尿病的發(fā)病基礎(chǔ)。本課題前期研究發(fā)現(xiàn),mi R-126對胰島素信號通路有一定調(diào)控作用,mi R-126與胰島素抵抗存在一定的聯(lián)系。為了進一步探究mi R-126在胰島素信號通路中的調(diào)控作用及其對胰島β細胞凋亡的影響,我們建立了一個可靠的原代培養(yǎng)的大鼠胰島β細胞模型。目的:本研究旨在探討mi R-126在原代分離培養(yǎng)的正常SD大鼠胰島β細胞胰島素信號通路中的調(diào)控作用及其對胰島β細胞凋亡的影響。方法:以原代分離培養(yǎng)的正常SD大鼠胰島β細胞為模型,轉(zhuǎn)染合成的mi R-126模擬物(mi R-126 mimic)或mi R-126抑制劑(mi R-126 inhibitor),干預(yù)mi R-126的表達,并用流式細胞術(shù)檢測轉(zhuǎn)染效率和細胞凋亡率。轉(zhuǎn)染后的大鼠胰島β細胞用胰島素(100nm)刺激12小時,提取細胞的總RNA,用熒光定量PCR技術(shù)以U6及β-actin為內(nèi)參基因檢測mi R-126、IRS-1、IRS-2的相對表達量;提取細胞總蛋白進行BCA蛋白測定,用western Blot技術(shù)檢測IRS-1/2,Akt,PIK3R2蛋白表達量。結(jié)果:流式細胞術(shù)檢測顯示:mi R-126 mimics、mi R-126 inhibitor、negative control轉(zhuǎn)染效率較高;mi R-126 mimic組大鼠胰島β細胞凋亡數(shù)顯著高于NC組和mi R-126inhibitor組(P0.05);熒光定量PCR檢測結(jié)果顯示:mi R-126 mimic組大鼠胰島β細胞IRS-1/2相對表達量較NC組和mi R-126 inhibitor組顯著降低(P0.05);Western blot結(jié)果顯示:mi R-126 mimic組大鼠胰島β細胞IRS-1/2、Akt、P-Akt及PIK3R2蛋白表顯著受到抑制。結(jié)論:1.過表達mi R-126可能通過調(diào)控胰島素信號通路中IRS-1/2、Akt、P-Akt及PIK3R2表達參與胰島素抵抗。2.過表達mi R-126可誘導(dǎo)大鼠胰島β細胞凋亡。
【關(guān)鍵詞】：胰島細胞 分離 純化 培養(yǎng) Hitopque-1077 梯度離心 micro RNA-126 胰島素信號通路 大鼠胰島β細胞 2型糖尿病 細胞凋亡
【學(xué)位授予單位】：寧夏醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R587.1
【目錄】：

• 第一部分 大鼠胰島β細胞分離及純化4-6
• 摘要4-5
• Abstract5-6
• 第二部分 Micro RNA-126 對大鼠胰島β細胞胰島素信號通路的調(diào)控作用及機制6-10
• 摘要6-8
• Abstract8-10
• 英文縮寫及英漢全稱（Abbreviation）10-12
• 第一部分SD大鼠胰島β細胞分離及純化12-29
• 前言12-14
• 材料和方法14-22
• 1. 材料14-16
• 2. 實驗方法16-22
• 結(jié)果22-26
• 討論26-28
• 結(jié)論28-29
• 第二部分Micro RNA對大鼠胰島β細胞胰島素信號通路的調(diào)控作用及機制29-56
• 前言29-32
• 材料與方法32-45
• 1. 材料32-35
• 2. 實驗方法35-44
• 3. 統(tǒng)計學(xué)方法44-45
• 結(jié)果45-53
• 討論53-55
• 結(jié)論55-56
• 參考文獻56-60
• 綜述60-67
• 參考文獻64-67
• 致謝67-68
• 攻讀碩士學(xué)位期間科研成果68

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前4條

1 陸忠;沈水仙;支滌靜;羅飛宏;;大鼠胰島分離純化新方法“兩步過篩法”的建立及評估[J];中國當(dāng)代兒科雜志;2013年07期

2 許嬋嬋;韓衛(wèi)青;肖冰;李寧寧;朱鼎良;高平進;;微小RNA在自發(fā)性高血壓大鼠主動脈的差異表達[J];生理學(xué)報;2008年04期

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  本文關(guān)鍵詞：MicroRNA-126對大鼠胰島β細胞胰島素信號通路的調(diào)控作用及機制，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：413340