發(fā)布時間：2023-05-07 03:32

　　背景:右美托咪啶(Dexmedetomidine,Dex)是一種高選擇性、高特異性的α2腎上腺素受體激動劑,具有鎮(zhèn)靜、催眠、麻醉和鎮(zhèn)痛作用,其α2:α1受體親和力之比為1620:1。在大量臨床與基礎實驗中均發(fā)現(xiàn)右美托咪啶能夠顯著抑制神經(jīng)細胞凋亡以及對發(fā)育中腦組織具有神經(jīng)保護作用,但其在細胞分子水平的作用機制尚不十分清楚。內質網(wǎng)(endoplasmic reticulum,ER)應激作為真核細胞的一種保護性應激反應,也是ER內穩(wěn)態(tài)亞細胞損傷的病理過程。諸如營養(yǎng)不足、鈣濃度變化氧化應激、以及缺血再灌注損傷等生理病理情況均能誘導ER內蛋白質的錯誤折疊,誘發(fā)ER應激。作為啟動細胞凋亡的重要途徑之一,研究已表明ER應激參與了心、腦、腎等重要器官缺血再灌注損傷的病理生理過程。本實驗旨在細胞水平觀察不同濃度右美托咪啶對糖氧剝奪/再灌注誘導神經(jīng)元細胞凋亡的保護作用,并探討ER應激在其神經(jīng)保護作用中的潛在機制。目的:探索并研究Dex對OGD/R誘導神經(jīng)細胞凋亡的保護作用。應用10μM全反式維甲酸(ATRA)3天和80n M十四烷酰佛波醇乙酯酸(TPA)3天序貫誘導SH-SY5Y細胞向神經(jīng)元分化。根據(jù)預實...

【文章頁數(shù)】：57 頁

【學位級別】：碩士

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1. 引言
2. 材料與方法
    2.1 細胞株
    2.2 抗體
    2.3 主要試劑與耗材
    2.4 主要設備與儀器
    2.5 主要試劑及溶液配方
    2.6 細胞培養(yǎng)與藥物誘導分化
        2.6.1 細胞培養(yǎng)
        2.6.2 ATRA與TPA序貫誘導SH-SY5Y細胞分化
    2.7 誘導后細胞免疫熒光
    2.8 糖氧剝奪再灌注OGD/R模型的構建
    2.9 右美托咪啶處理后細胞存活率MTT檢測
    2.10 右美托咪啶處理后細胞流式細胞凋亡檢測
    2.11 免疫印跡法檢測內質網(wǎng)相關蛋白的表達
        2.11.1 蛋白質樣品的制備與低溫儲存
        2.11.2 SDS-PAGE凝膠制備
        2.11.3 上樣和電泳分離
        2.11.4 轉膜
        2.11.5 IB檢測
    2.12 統(tǒng)計方法
3. 結果
    3.1 ATRA 與 TPA 序貫誘導 SH-SY5Y 向神經(jīng)元分化
    3.2 ATRA與TPA序貫誘導SH-SY5Y向神經(jīng)元分化后Neun染色
    3.3 OGD12h/R12h SH-SY5Y細胞存活率接近 50%
    3.4 10μM DEX抑制OGD/R誘導的SH-SY5Y細胞凋亡
    3.5 內質網(wǎng)應激相關蛋白表達
4. 討論
5. 結論
6. 引用文獻
附錄
致謝
綜述
    參考文獻



本文編號：3810187