噻拉嗪作為多種復(fù)合麻醉劑的重要組成成分之一,研究其麻醉的作用機理對研究高效、副作用低的復(fù)合麻醉劑十分重要,目前,對噻拉嗪麻醉作用的神經(jīng)信號通路的研究較少。本實驗從分子水平對噻拉嗪的麻醉機制進行探討,為今后的臨床麻醉提供合理的分子理論依據(jù)。實驗以成年Wister大鼠和PC12神經(jīng)細胞為研究對象,體內(nèi)實驗腹腔注射70 mg/kg噻拉嗪,通過連續(xù)觀察大鼠行為學(xué)變化確定實驗分組,進一步檢測大鼠不同腦區(qū)在不同麻醉時期的指標變化,采用RT-PCR方法檢測NR1、NR2A、NR2B、CaMKII、CaMKIV、CREB、BDNF、c-jun、c-fos和fos-b的mRNA表達,Western Blot方法檢測NR1、NR2A、NR2B、CaMKII、p-CaMKII、CaMKIV、p-CaMKIV、CREB、p-CREB和BDNF的蛋白表達;體外細胞實驗通過在培育的PC12神經(jīng)細胞中加入噻拉嗪,并且通過siRNA技術(shù)對CaMKII和CaMKIV進行靶向沉默,探究CaMKII和CaMKIV對下游CREB/BDNF通路以及IEGs（c-jun、c-fos和fos-b）的影響,采用RT-PCR方法檢測C... 

【文章來源】：東北農(nóng)業(yè)大學(xué)黑龍江省 211工程院校

【文章頁數(shù)】：77 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

CaMK/CREB/BDNF信號通路圖

呈現(xiàn)先降低后升高的趨勢，而對 NR1、CaMKII 和 CaMKIV mRNA 表達無顯著影響。NR1 的 mRNA 表達量在各個時期與 C 組 NR1 表達量比較無明顯變化，差異不顯著（P>0.05）；NR2A在 X2和X3時期的mRNA表達量較 C組下降明顯，分別降低了14%（P<0.05）和 16%（P<0.05），最低值出現(xiàn)在 X3 時期；NR2B 在 X2、X3 和 X4 時期的 mRNA 表達量較C 組下降明顯，分別降低了 24%（P<0.05）、20%（P<0.05）和 13%（P<0.05），在 X2 時期的NR2B 的 mRNA 表達量最低，隨后逐步升高，至 X6 時期已恢復(fù)至 C 組 NR2B 的 mRNA 表達水平；CaMKII 和 CaMKIV 的 mRNA 表達情況同 NR1mRNA 在各個時期的表達情況類似，較C 組 NR1 mRNA 表達量比較無明顯變化，差異不顯著（P<0.05）。表 3-3 NR1、NR2A、NR2B、CaMKII 和 CaMKIV mRNA 表達量的變化Tab. 3-3 Change of NR1, NR2A, NR2B, CaMKII and CaMKIV mRNA expressionC X1 X2 X3 X4 X5 X6NR1 1 0.99±0.07 0.92±0.08 0.98±0.08 0.97±0.07 0.95±0.07 0.94±0.06NR2A 1 1.01±0.06 0.86±0.05* 0.84±0.04* 0.98±0.07 0.97±0.05 0.99±0.05NR2B 1 0.99±0.08 0.76±0.04* 0.80±0.07* 0.87±0.08* 0.96±0.06 0.98±0.08CaMKII 1 0.98±0.07 0.99±0.06 1.00±0.06 0.97±0.07 1.02±0.05 0.99±0.07CaMKIV 1 0.96±0.05 0.98±0.06 0.98±0.07 0.96±0.07 0.97±0.06 0.99±0.06注：數(shù)據(jù)用平均值±標準誤，*表示與對照組差異顯著（P<0.05），下表同。

CREB mRNA 表達量無顯著影響。CREB mRNA 表達量在 X1 至 X6 時期較 C 組比較均無顯著變化（P>0.05）；BDNF mRNA表達量在 X3 和 X4 時期較 C 組下降明顯，分別降低了 7%和 8%（P<0.05），其他時期無顯著變化；c-jun 的 mRNA 表達量的最低值出現(xiàn)在 X4 時期，X3、X4、X5 和 X6 時期的 mRNA 表達量較 C 組均顯著降低，分別降低了 12%、14%、9%和 8%（P<0.05）；c-fos 的 mRNA 表達量 X3、X4 和 X5 時期下降明顯，分別較 C 組水平下降了 8%、9%和 8%（P<0.05）；fos-b mRNA表達量在 X3、X4、X5 和 X6 時期下降明顯，與 C 組 fos-b mRNA 表達量比較，分別下降了12%、11%、14%和 15%（P<0.05），差異顯著。表 3-4 CREB、BDNF、c-jun、c-fos 和 fos-b mRNA 表達量的變化Tab. 3-4 Change of CREB, BDNF, c-jun, c-fos and fos-b mRNA expressionC X1 X2 X3 X4 X5 X6CREB 1 0.97±0.05 0.96±0.05 0.95±0.05 0.98±0.04 0.95±0.05 0.96±0.05BDNF 1 1.02±0.06 1.04±0.05 0.93±0.06* 0.92±0.05* 1.00±0.05 1.02±0.06c-jun 1 0.95±0.07 0.96±0.06 0.88±0.06* 0.86±0.06* 0.91±0.06* 0.92±0.06*c-fos 1 1.01±0.05 0.99±0.04 0.92±0.04* 0.95±0.05* 0.92±0.05* 0.98±0.05fos-b 1 0.97±0.08 0.94±0.06 0.88±0.07* 0.89±0.06* 0.86±0.07* 0.85±0.07*


本文編號：3469606