黑素瘤是一種主要發(fā)生在皮膚的高度惡性腫瘤,其病程進展快、侵襲能力強、對放化療不敏感,且預后極差。因此,早期診斷和治療是降低死亡率的關鍵。那么,建立合適的動物模型來研究腫瘤的發(fā)生發(fā)展,對臨床發(fā)現(xiàn)和治療皮膚黑素瘤具有重大意義。而以往的研究基本上僅針對某一技術開展,如影像學或者參數(shù)測量實驗,只能在該技術下對腫瘤表現(xiàn)或改變進行分析,無法對腫瘤同時進行多角度分析,結果較為局限,而多元化的分析對于腫瘤發(fā)生發(fā)展的研究是至關重要的�；诖�,本文首先建立了穩(wěn)定的裸鼠皮膚黑素瘤模型;然后利用影像學設備、介電特性測量系統(tǒng)等對腫瘤發(fā)生發(fā)展進行非侵入性研究。動物模型建立的研究中,通過對裸鼠經(jīng)皮下注射A375細胞懸液建立皮膚黑素瘤模型,并對結果進行病理驗證。結果顯示,該方法成功構建裸鼠皮膚黑素瘤模型,造模成功率為87.5%。顯微鏡下腫瘤細胞大小、形態(tài)不一,呈多向分化,胞漿內可見黑色素顆粒。影像學監(jiān)測研究中,利用小動物高頻超聲、光學相干斷層成像（Optical Coherence Tomography,OCT）技術對皮膚黑素瘤的發(fā)生發(fā)展過程進行非侵入性連續(xù)監(jiān)測,并對過程中的影像圖特征進行定性和定量分析。結果顯示,O... 

【文章來源】：南方醫(yī)科大學廣東省

【文章頁數(shù)】：83 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖１－１?ＯＣＴ原理圖

?第二章裸鼠黑素瘤模型的建立???ｌｌｉｉ?Ｊ?｜ｊｇ｜?ｊ??圖２－１?Ａ３７５細胞。其中Ａ融合度為５０？６０％，Ｂ融合度為８０？９０°／〇。??Ｆｉｇ．?２－１?Ａ３７５?ｃｅｌｌｓ．?Ａ?ｆｕｓｉｏｎ?ｄｅｇｒｅｅ?ｉｓ?５０－６０％，?Ｂ?ｆｕｓｉｏｎ?ｄｅｇｒｅｅ?ｉｓ?８０－９０％．??（三）Ａ３７５細胞的凍存??（１）傳代２４？４８ｈ的對數(shù)生長期細胞；??（２）收集細胞，按照細胞傳代培養(yǎng)的操作方法進行操作，離心條件選擇??ｌＯＯＯｒｐｍ，離心?３ｍｉｎ；??（３）離心期間配置凍存液：ＦＢＳ和ＤＭＳＯ按照９：１的比例配置（該過程??需避光操作）；??（４）棄上清，加入適量凍存液，取少量細胞懸浮液用于計數(shù)，使細胞保??存終濃度為１Ｘ１?〇６？３Ｘ１?〇６，混合均勻；??（５）將混勻的細胞懸浮液分裝于已標記好的凍存管中，每管１．５ｍＬ，并??取少量剩余的細胞懸浮液行污染檢測；??（６）將凍存管放入程序降溫盒，然后轉移到－８０°Ｃ冰箱存放１０￣１２ｈ后，??轉移到液氮罐中進行長期保存。??２．３．２動物分組及荷瘤模型制備??Ａ３７５細胞培養(yǎng)至足夠數(shù)量時進行腫瘤細胞接種，選擇對數(shù)生長期細胞，使??用全自動細胞計數(shù)儀對細胞進行計數(shù)，調整細胞最終濃度至ｌｘｌ０７／ｍＬ。將２０只??裸鼠按照隨機分配的原則，分為實驗組（１６只）和對照組（４只）。實驗組�。埃玻恚�??腫瘤細胞懸液經(jīng)皮下注射于裸鼠背部，并對注射部位進行標記（圖２－２．Ａ）；對照??１４??

?頌士學位論文???組�。埃玻恚掏耆囵B(yǎng)液，經(jīng)皮下注射于裸鼠背部并標記（圖２－２．Ｂ）。??Ｅｍ??圖２－２實驗組與對照組裸鼠接種后標記圖。其中Ａ為實驗組裸鼠接種后標記圖，Ｂ為對??照組裸鼠接種后標記圖。??Ｆｉｇ．?２－２?Ｌａｂｅｌｉｎｇ?ｄｉａｇｒａｍ?ｏｆ?ｎｕｄｅ?ｍｉｃｅ?ｏｆ?ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ?ｇｒｏｕｐ?ａｎｄ?ｃｏｎｔｒｏｌ?ｇｒｏｕｐ?ａｆｔｅｒ??ｉｎｏｃｕｌａｔｉｏｎ．?Ａ?ｉｓ?ｔｈｅ?ｉｎｏｃｕｌａｔｅｄ?ｎｕｄｅ?ｍｉｃｅ?ｉｎ?ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ?ｇｒｏｕｐ，?Ｂ?ｉｓ?ｔｈｅ?ｉｎｏｃｕｌａｔｅｄ?ｎｕｄｅ?ｍｉｃｅ?ｉｎ??ｃｏｎｔｒｏｌ?ｇｒｏｕｐ??２．３．３大體觀察??裸鼠自皮下注射腫瘤細胞起，每日進行常規(guī)檢查，主要包括動物的精神狀態(tài)、??皮膚膚色、體重等。發(fā)現(xiàn)成瘤后，觀察并記錄接種部位皮膚表面情況，如有無潰??爛、流膿、質感、結節(jié)大小等。??２．３．４組織病理檢查??為驗證腫瘤模型建立是否成功，以便進一步檢查皮膚黑素瘤的病理學特點，??接種腫瘤細胞后第２４天，對實驗組與對照組按照以下步驟進行病理分析。??（一）試劑配制??（１）?１０％中性甲醛固定液：�。保埃恚痰募兹┓湃耄保埃埃恚虩瓋�，加入９０??ｍＬＰＢＳ緩沖液；??（２）無水乙醇－二甲苯混合溶液：無水乙醇與二甲苯按照１：１比例配置；??（３）二甲苯－石蠟混合液：二甲苯和石蠟按照１：１比例配置；??（４）鹽酸－乙醇分色液：�。�?ｍＬ濃鹽酸，然后加入９９?ｍＬ的７０％乙醇??溶液，需現(xiàn)配現(xiàn)用；??１５??


本文編號：3348768