本文關(guān)鍵詞：生發(fā)基質(zhì)—腦室內(nèi)出血對(duì)早產(chǎn)兔腦組織葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白的影響，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:生發(fā)基質(zhì)-腦室內(nèi)出血(germinal matrix hemorrhage-intraventricular hemorrhage,GM-IVH)是早產(chǎn)兒顱內(nèi)出血最常見(jiàn)的類(lèi)型。在過(guò)去的幾十年中,隨著醫(yī)療技術(shù)水平及護(hù)理水平的提高,早產(chǎn)兒的存活率顯著增加,但對(duì)于孕周小,出生體重低的早產(chǎn)兒而言,GM-IVH的發(fā)病率仍是一個(gè)主要問(wèn)題。GM-IVH可留有不同程度的神經(jīng)系統(tǒng)后遺癥,如癲癇、認(rèn)知異常、腦癱等,因此GM-IVH及其導(dǎo)致的神經(jīng)系統(tǒng)后遺癥仍然是全球范圍內(nèi)的重大公共衛(wèi)生問(wèn)題。當(dāng)前對(duì)于GM-IVH后繼發(fā)性腦損傷機(jī)制還不是十分清楚。早產(chǎn)兒發(fā)生GM-IVH后常常合并側(cè)腦室擴(kuò)張,除對(duì)癥治療外,目前尚無(wú)有效的治療手段,腰椎穿刺是主要的對(duì)癥治療方法之一,目的是釋放出聚積在側(cè)腦室內(nèi)和腦脊液中的陳舊出血、增高的蛋白質(zhì)以及過(guò)多的腦脊液,保持腦脊液循環(huán)通路的暢通,防止側(cè)腦室持續(xù)擴(kuò)張,形成嚴(yán)重的腦積水,減輕對(duì)腦組織的壓迫。通過(guò)腰椎穿刺方法,對(duì)引流出的腦脊液進(jìn)行動(dòng)態(tài)檢測(cè)發(fā)現(xiàn)了一個(gè)十分突出的現(xiàn)象,這類(lèi)早產(chǎn)兒腦脊液糖的含量持續(xù)低于正常早產(chǎn)兒參考值,但患兒血糖正常,Volpe總結(jié)如下:這種無(wú)法用炎癥解釋的腦脊液糖濃度的降低發(fā)生于出血后第1天,5-15天最明顯,常常持續(xù)數(shù)周,最長(zhǎng)持續(xù)至出血后3個(gè)月。大腦的能量來(lái)源主要依賴于葡萄糖,而葡萄糖從血液進(jìn)入腦細(xì)胞必須通過(guò)葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白1(glucose transport1,GLUT1)和葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白3(glucose transport3,GLUT3)的介導(dǎo)。在先天性GLUT1缺乏癥的患兒中,腦脊液中糖含量低于正常值,而同一時(shí)間的血液中的糖濃度是正常的,腦脊液/血葡萄糖之比降低,乳酸的含量正�；蚪档�,CT、MRI腦部影像學(xué)正常,EEG表現(xiàn)為背景波較慢,多有彌漫性或局灶性的異常放電,患兒常表現(xiàn)為抗癲癇藥物治療無(wú)效的癲癇發(fā)作,發(fā)育遲緩,獲得性小頭畸形,共濟(jì)失調(diào)、智力低下等。目前對(duì)GM-IVH患兒腦脊液糖濃度降低的機(jī)制不清楚,是否參與了繼發(fā)性腦損傷也不清楚?最初認(rèn)為腦脊液糖濃度降低是由于紅細(xì)胞的消耗和無(wú)氧糖酵解的增加,但隨后均因?yàn)槟X脊液紅細(xì)胞清除后和乳酸濃度正常,糖濃度依然持續(xù)在低水平而被否決,有學(xué)者猜測(cè)可能因?yàn)槌鲅茐牧四X內(nèi)葡萄糖的轉(zhuǎn)運(yùn)導(dǎo)致了腦脊液持續(xù)的糖濃度降低。查閱文獻(xiàn)未見(jiàn)相關(guān)的報(bào)道。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)GM-IVH動(dòng)物模型,應(yīng)用蛋白印跡實(shí)驗(yàn)方法,定量分析了腦室周?chē)X組織GLUT1、GLUT3蛋白的表達(dá),探討GM-IVH后腦脊液糖濃度降低的可能機(jī)制,為臨床提供新的治療手段開(kāi)辟思路。方法:1將懷孕29天的新西蘭孕兔進(jìn)行剖宮產(chǎn),迅速將幼兔取出,并給予保溫、奶粉喂養(yǎng)。將幼兔隨機(jī)分為兩組,在生后3小時(shí)之內(nèi),其中一組的早產(chǎn)兔給予50%的丙三醇,劑量按10ml/Kg,經(jīng)腹腔注射,另一組的早產(chǎn)兔不給予任何處理。2兩組早產(chǎn)兔分別于生后24小時(shí)接受頭顱超聲檢查,觀察GM-IVH發(fā)生情況。選取接受丙三醇注射后發(fā)生GM-IVH的早產(chǎn)兔15只,為模型組,未給予任何處理的未發(fā)生GM-IVH的早產(chǎn)兔15只,為對(duì)照組,然后將兩組分別隨機(jī)分為生后24h、48h、72h三個(gè)亞組,按上述時(shí)間點(diǎn)給予麻醉,由內(nèi)向外迅速選取腦室周邊區(qū)域組織,一部分新鮮腦組織放入4%多聚甲醛溶液中固定,供后期蘇木精-伊紅染色(hematoxylin-eosin staining,HE),以觀察早產(chǎn)兔發(fā)生重度GM-IVH后,腦組織細(xì)胞形態(tài)的變化,另一部分新鮮腦組織立即用液氮冷凍,然后將標(biāo)本放到-80℃冰箱,供蛋白印跡實(shí)驗(yàn)用,用蛋白印跡法檢測(cè)對(duì)照組與模型組早產(chǎn)兔腦組織的GLUT1蛋白和GLUT3蛋白的表達(dá)。3統(tǒng)計(jì)方法:采用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件、Microsoft Excel 2003進(jìn)行數(shù)據(jù)處理。計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(x±SD)表示,均數(shù)比較前先行方差齊性檢驗(yàn),不同時(shí)間點(diǎn)多個(gè)樣本均數(shù)的比較采用LSD法(Least-significant Difference)檢驗(yàn),兩個(gè)樣本均數(shù)的比較采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)(Independent Samples Test),若不滿足方差齊性檢驗(yàn)則采用秩和檢驗(yàn)(rank-sum test)的方法。檢驗(yàn)水準(zhǔn)定為0.05,P值小于0.05有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)果:1成功的建立了早產(chǎn)兔Ⅲ度GM-IVH模型通過(guò)頭顱超聲、大體標(biāo)本觀察、腦組織HE染色觀察證實(shí)早產(chǎn)兔GM-IVH模型的成功制備。2腦組織GLUT1蛋白的表達(dá)用蛋白印跡實(shí)驗(yàn)方法檢測(cè)早產(chǎn)兔腦組織GLUT1的表達(dá),對(duì)照組腦組織標(biāo)本中GLUT1表達(dá)量在生后24h、48h、72h是逐漸減少的,三個(gè)時(shí)間點(diǎn)間兩兩比較,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);模型組早產(chǎn)兔腦組織標(biāo)本中GLUT1表達(dá)量在生后24h、48h、72h三個(gè)時(shí)間點(diǎn)間兩兩比較亦有差異(P0.05),以生后24h最高,其次是生后48h,最后是生后72h;模型組早產(chǎn)兔腦組織標(biāo)本中GLUT1蛋白量在生后72h低于同一時(shí)間點(diǎn)的對(duì)照組,而生后24小時(shí)、48小時(shí)的蛋白量均高于同一時(shí)間點(diǎn)的對(duì)照組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。3腦組織GLUT3蛋白的表達(dá)用蛋白印跡實(shí)驗(yàn)方法檢測(cè)早產(chǎn)兔腦組織GLUT3表達(dá),對(duì)照組腦組織標(biāo)本中GLUT3表達(dá)量在生后24h、48h、72h是逐漸增多的,三個(gè)時(shí)間點(diǎn)間兩兩比較,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);模型組早產(chǎn)兔腦組織標(biāo)本中GLUT3表達(dá)量在生后24h、48h、72h三個(gè)時(shí)間點(diǎn)間兩兩比較亦有差異(P0.05),以生后48h最高,其次是生后24h,最后是生后72h,模型組早產(chǎn)兔腦組織標(biāo)本中GLUT3蛋白量在生后24h與對(duì)照驗(yàn)組同一時(shí)間點(diǎn)相比較,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),72h的蛋白量低于同一時(shí)間點(diǎn)的對(duì)照組,而48小時(shí)的蛋白量高于同一時(shí)間點(diǎn)的對(duì)照組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。結(jié)論:1正常早產(chǎn)兔在生后72小時(shí)內(nèi)隨著生后日齡的增長(zhǎng),腦部GLUT1蛋白量是減少的,而GLUT3蛋白量是增多的。2早產(chǎn)兔發(fā)生重度GM-IVH后,腦組織GLUT1表達(dá)量的上調(diào),代表一種代償反應(yīng),之后的降低導(dǎo)致了腦脊液糖濃度的降低。3早產(chǎn)兔發(fā)生重度GM-IVH后,腦組織GLUT3蛋白量有暫時(shí)性的增多,是腦部的一種保護(hù)反應(yīng),之后的減少提示參與了重度GM-IVH后繼發(fā)性腦損傷。
【關(guān)鍵詞】：早產(chǎn)兒 生發(fā)基質(zhì)-腦室內(nèi)出血 顱內(nèi)出血 動(dòng)物模型 葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白 腦脊液
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類(lèi)號(hào)】：R743.34
【目錄】：

• 中文摘要4-7
• 英文摘要7-11
• 英文縮寫(xiě)11-12
• 前言12-13
• 材料與方法13-21
• 結(jié)果21-23
• 附圖23-26
• 附表26-28
• 討論28-31
• 結(jié)論31
• 參考文獻(xiàn)31-35
• 綜述 葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白在神經(jīng)系統(tǒng)疾病中的意義35-45
• 參考文獻(xiàn)41-45
• 致謝45-46
• 個(gè)人簡(jiǎn)歷46

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：334004