目的:研究Erk 1/2/CREB/BDNF信號(hào)通路在右美托咪定減輕異丙酚誘導(dǎo)神經(jīng)元毒性中的作用。方法:體外培養(yǎng)原代海馬神經(jīng)元至第8天（DIV 8）,隨機(jī)分為C組、I組、DMSO組、P組（100μM異丙酚組）、D組（10μM右美托咪定組）、PD組（10μM右美托咪定+100μM異丙酚組）、PDP組（25μM PD98059+10μM右美托咪定+100μM異丙酚組）、HDP組（10μM H89+10μM右美托咪定+100μM異丙酚組）和KDP組（25μM KG501+10μM右美托咪定+100μM異丙酚組）。C組、I組、DMSO組和D組細(xì)胞分別用新鮮培養(yǎng)基、脂肪乳劑、0.25%DMSO或10μM右美托咪定孵育;P組細(xì)胞用100μM異丙酚孵育3 h;PD組細(xì)胞先用10μM右美托咪定預(yù)孵育30 min后,再加入異丙酚至終濃度為100μM,繼續(xù)孵育3 h;PDP組,HDP組和KDP組細(xì)胞先分別用25μM PD98059（p-Erk1/2抑制劑）、10μM H89（p-CREB抑制劑）或25μM KG501（CREB抑制劑）預(yù)孵育30min后,再加入右美托咪定至終濃度為10μM孵育30 min,... 

【文章來源】：廣西醫(yī)科大學(xué)廣西壯族自治區(qū)

【文章頁數(shù)】：88 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

海馬神經(jīng)元培養(yǎng)Figure1-2Primaryhippocampalneuronculture

圖 2-1 實(shí)驗(yàn)分組以及干預(yù)方法Figure 2-1 Experimental groups and processing.2.4 CCK-8 檢測(cè)海馬神經(jīng)元生長(zhǎng)曲線將海馬神經(jīng)元細(xì)胞以 1 ~ 2×106的密度接種于包被有 L-左旋多聚賴氨酸的 96 孔板中，200 μl / 孔，分別設(shè) 6 個(gè)復(fù)孔。采用 CCK-8 的方法檢測(cè)細(xì)胞活力，接種后每 2 d 測(cè)定一次吸光度（OD），記錄至第 16 天。（1）在每孔更換 200 μl 新鮮維持培養(yǎng)基后加入 10 μl 的 CCK-8 反應(yīng)液，然后將 96 孔板放回含恒溫培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng) 1 ~ 4 h；（2）用酶標(biāo)儀檢測(cè) 450 nm 下的 OD 值；（3）以 OD 值為縱軸，培養(yǎng)時(shí)間為橫軸，繪制生長(zhǎng)曲線。2.5 CCK-8 檢測(cè)細(xì)胞活力（1）將海馬神經(jīng)元以 1 ~ 2×106的密度接種于包被過 L-左旋多聚賴

圖 3-1 光鏡下海馬神經(jīng)元培養(yǎng)形態(tài)學(xué)變化Figure 3-1 Changes in the morphology of primary hippocampal neurons viewed underlight microscope.2 免疫細(xì)胞化學(xué)結(jié)果免疫細(xì)胞化學(xué)鑒定結(jié)果顯示，鏡下海馬神經(jīng)元胞體飽滿，且有典型的軸突和樹突出并形成一定的突觸連接；神經(jīng)元胞體，樹突和軸突染成棕色，而相應(yīng)的陰性對(duì)組未見相應(yīng)的免疫反應(yīng)。通過計(jì)算 10 個(gè)視野內(nèi)海馬神經(jīng)元陽性細(xì)胞數(shù)得到純度為95.2 ± 3.6％，表明海馬神經(jīng)元培養(yǎng)成功（見圖 3-2）。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]異丙酚對(duì)胎鼠離體海馬神經(jīng)元鈣離子濃度和NF-κB活性的影響[J]. 陳靜,利莉,梁羽冰,謝玉波.  中華麻醉學(xué)雜志. 2014 (03)



本文編號(hào)：3280267