發(fā)布時間：2017-04-25 19:11

  本文關鍵詞：腸外谷氨酰胺補充對膿毒癥大鼠淋巴器官細胞凋亡的影響，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:膿毒癥仍是危重病的重要死亡原因之一,淋巴細胞凋亡是膿毒癥的重要病理生理機制之一,本實驗擬研究經腸外途徑給予不同劑量的谷氨酰胺對膿毒癥大鼠淋巴器官細胞凋亡的影響。方法:1、隨機將SD大鼠分成五組:假手術組(SHAM)、模型組(CLP)、低劑量谷氨酰胺組(L-GLN)、中劑量谷氨酰胺組(M-GLN)、高劑量谷氨酰胺組(H-GLN),采用盲腸結扎穿孔對后四組大鼠行膿毒癥模型制備,于術后立即分別給予尾靜脈注射生理鹽水、0.35g/kg谷氨酰胺、0.5g/kg谷氨酰胺、0.75g/kg谷氨酰胺,同時為了排除手術本身產生的影響,對行假手術的大鼠尾靜脈注射生理鹽水作為假手術組。2、觀察記錄各組大鼠術后的表現(xiàn),在各組大鼠造模24小時后于腹腔麻醉下,測量大鼠肛溫、呼吸、心率,通過頸總動脈采血、離心,取血清備用檢測,同時隨機對各組3只大鼠進行頸總動脈采血行血培養(yǎng),取脾臟、胸腺標本于10%甲醛固定后,包埋切片做免疫組化。3、原位末端標記法(TUNEL)測胸腺、脾臟的細胞凋亡,免疫組化測caspase3、Hsp 90在胸腺、脾臟組織中的表達,酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)測大鼠血清Ig A、Ig G、Ig M水平及血清TNF-α、IL-10水平。結果:1、確認膿毒癥大鼠動物模型成功建立:腹腔麻醉下監(jiān)測各組大鼠肛溫、呼吸、心率,與假手術組比較,模型組及低、中、高劑量谷氨酰胺組大鼠肛溫降低大于1℃,呼吸頻率增快2倍以上,心率增加超過50%,符合SIRS動物模型診斷標準,通過解剖腹腔可見:腹腔大量血性帶惡臭滲出物,結扎盲腸端發(fā)黑、表面見黃色膿液等腹腔感染原發(fā)病灶表現(xiàn),同時,模型組及低、中、高劑量谷氨酰胺組隨機抽取的血培養(yǎng)均培養(yǎng)出混合菌的感染證據,據此可認為盲腸結扎穿孔膿毒癥大鼠造模成功。2、各組大鼠脾臟、胸腺細胞凋亡指數結果:假手術組大鼠脾臟、胸腺存在較低的細胞凋亡;模型組大鼠脾臟、胸腺存在明顯的細胞凋亡,與假手術組比較具有顯著差異(p0.01);低、中、高劑量谷氨酰胺組大鼠脾臟、胸腺細胞凋亡較模型組逐漸減少(p0.05或p0.01);高劑量谷氨酰胺組抗細胞凋亡作用優(yōu)于低劑量谷氨酰胺組(p0.05)。3、各組大鼠脾臟、胸腺caspase 3蛋白的陽性表達結果:假手術組大鼠脾臟、胸腺caspase 3蛋白存在較低的陽性表達;模型組與假手術組比較大鼠脾臟、胸腺caspase 3蛋白陽性表達積分顯著增高(p0.01);低、中、高劑量谷氨酰胺組較模型組大鼠脾臟、胸腺caspase 3蛋白陽性表達積分逐漸下降(p0.05或p0.01);高劑量谷氨酰胺組大鼠脾臟、胸腺caspase 3的陽性表達積分較低劑量谷氨酰胺低(p0.01)。4、各組大鼠脾臟、胸腺Hsp 90蛋白的陽性表達結果:假手術組大鼠脾臟、胸腺Hsp 90存在較低的陽性表達;模型組較假手術組大鼠脾臟、胸腺Hsp 90蛋白陽性表達積分顯著增高(p0.01);低、中、高劑量谷氨酰胺組較模型組大鼠脾臟、胸腺Hsp 90陽性表達積分逐漸增加(p0.05或p0.01);高劑量谷氨酰胺組大鼠脾臟、胸腺Hsp 90的陽性表達積分較低劑量谷氨酰胺組高(p0.01)。5、各組大鼠血清Ig M、Ig G、Ig A水平:模型組大鼠血清Ig A、Ig M、Ig G水平均較假手術組顯著降低(p0.01),低、中、高劑量谷氨酰胺組大鼠血清Ig A、Ig M、Ig G水平均高于模型組(p0.01或p0.05),高劑量谷氨酰胺組大鼠血清Ig A、Ig M水平高于低劑量谷氨酰胺組(p0.01或p0.05)。6、各組大鼠血清TNF-a、IL-10水平:模型組大鼠血清TNF-a、IL-10水平均顯著高于假手術組(p0.01),低、中、高劑量谷氨酰胺組與模型組比較大鼠血清TNF-ɑ水平均顯著降低(p0.01),高劑量谷氨酰胺組較低劑量谷氨酰胺組大鼠血清TNF-ɑ水平更低(p0.05)。結論:腸外谷氨酰胺補充可抑制膿毒癥大鼠淋巴器官細胞凋亡,且抗細胞凋亡作用與谷氨酰胺給藥劑量呈正相關性,谷氨酰胺可能是通過誘導Hsp90的表達,抑制caspase-3的活化,發(fā)揮抗細胞凋亡作用。
【關鍵詞】：
【學位授予單位】：南昌大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R459.7
【目錄】：

• 摘要3-5
• ABSTRACT5-10
• 中英文縮略詞表10-12
• 第1章 前言12-14
• 第2章 材料與方法14-22
• 2.1 材料14-16
• 2.1.1 主要儀器及廠家14
• 2.1.2 主要試劑及廠家14-15
• 2.1.3 常用試劑配制15-16
• 2.2 方法16-22
• 2.2.1 實驗對象、分組及大鼠動物模型建立16
• 2.2.2 大鼠體溫、呼吸、心率的測定16-17
• 2.2.3 標本采集和制備17-18
• 2.2.4 標本的檢測18-20
• 2.2.5 檢測結果判定20-21
• 2.2.6 統(tǒng)計方法21-22
• 第3章 結果22-27
• 3.1 各實驗大鼠基本情況22
• 3.2 各組大鼠術后體溫、呼吸、心率的觀察22-23
• 3.3 各組大鼠血培養(yǎng)結果23
• 3.4 各組大鼠脾臟、胸腺細胞凋亡檢測結果23-24
• 3.5 各組大鼠脾臟、胸腺組織caspase3、Hsp90蛋白表達結果24-25
• 3.6 各組大鼠血清IgA、IgM、IgG檢測結果25-26
• 3.7 各組大鼠TNF-ɑ、IL-10檢測結果26-27
• 第4章 討論27-33
• 4.1 膿毒癥大鼠模型的成功建立27
• 4.2 淋巴細胞異常凋亡是膿毒癥的重要的病理生理機制之一27-29
• 4.3 谷氨酰胺與熱休克蛋白90的表達29-30
• 4.4 熱休克蛋白90與細胞凋亡30-31
• 4.5 各組大鼠IgA、IgM、IgG水平的變化及其意義31
• 4.6 各組大鼠促炎與抗炎因子的變化及其分析31-33
• 第5章 結論與展望33-34
• 5.1 結論33
• 5.2 展望33-34
• 致謝34-35
• 參考文獻35-37
• 附圖37-41
• 攻讀學位期間的研究成果41-42
• 綜述42-48
• 參考文獻46-48

【參考文獻】

中國期刊全文數據庫 前10條

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  本文關鍵詞：腸外谷氨酰胺補充對膿毒癥大鼠淋巴器官細胞凋亡的影響，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：326905