本文關(guān)鍵詞：利拉魯肽對(duì)糖尿病大鼠自噬及胰腺脂肪沉積作用機(jī)制的研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:通過(guò)觀察胰高血糖素樣肽-1(GLP-1)受體激動(dòng)劑利拉魯肽干預(yù)糖尿病大鼠后胰腺自噬相關(guān)標(biāo)志物L(fēng)C3BmRNA及其蛋白表達(dá)的變化,光鏡觀察胰腺脂肪沉積情況;加用氯喹阻斷自噬通路后,比較上述指標(biāo)變化,探討自噬與胰腺脂肪沉積的關(guān)系及利拉魯肽通過(guò)調(diào)節(jié)自噬改善胰腺脂肪沉積的作用機(jī)制。方法:以糖耐量正常大鼠(NGT組)作為對(duì)照,建立糖尿病大鼠模型,成模后隨機(jī)分為三組:生理鹽水對(duì)照組(DMNS組)、利拉魯肽干預(yù)組(DMLIR組)及利拉魯肽+氯喹組(DMLIR+CQ組)。DMNS組皮下注射生理鹽水作為空白對(duì)照,DMLIR組皮下注射利拉魯肽,觀察利拉魯肽干預(yù)后大鼠胰腺自噬水平及胰腺脂肪沉積的變化,DMLIR+CQ組皮下注射利拉魯肽及自噬抑制劑氯喹,觀察在利拉魯肽基礎(chǔ)上阻斷自噬通路后胰腺脂肪沉積的變化。1.糖尿病大鼠模型制備:以36只4~5周齡的健康雄性Wistar大鼠為研究對(duì)象,體重180~200g,每籠6只,適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后,采用簡(jiǎn)單隨機(jī)抽樣法分為糖耐量正常組(NGT組,10只)和糖尿病組(DM組,26只)。NGT組以基礎(chǔ)飼料喂養(yǎng),每克飼料提供熱量13.4kJ,其中脂肪占10.2%,蛋白質(zhì)占23.3%,碳水化合物66.5%。DM組以高糖高脂飼料喂養(yǎng),每克飼料提供熱量21.8kJ,其中脂肪占56.0%,蛋白質(zhì)占7%,碳水化合物37.0%。早晚各喂養(yǎng)1次,飲水自由。飼養(yǎng)環(huán)境:光照12小時(shí),室溫18~22℃,相對(duì)濕度30%~70%,每2周測(cè)大鼠體重、空腹血糖(FBG)。12周時(shí),NGT組FBG為4.4~4.9 mmol/L,DM組血糖為5.3~5.9mmol/L,隔夜禁食12h后,DM組大鼠腹腔注射鏈脲佐菌素溶液(25mg/Kg),NGT組大鼠腹腔注射等體積檸檬酸-檸檬酸鈉緩沖液。72h后鼠尾采血測(cè)FBG,以FBG≥7.8mmol/L并持續(xù)一周以上為糖尿病造模成功,其中dm組造模成功25只,死亡1只。ngt組大鼠血糖均在正常范圍內(nèi)。2.大鼠分組及檢測(cè)指標(biāo):糖耐量正常組(ngt組,10只)繼續(xù)予基礎(chǔ)飼料喂養(yǎng)。造模成功后,25只糖尿病大鼠采用簡(jiǎn)單隨機(jī)抽樣法分為三組:生理鹽水對(duì)照組(dmns組,n=9)、利拉魯肽干預(yù)組(dmlir組,n=8)及利拉魯肽+氯喹組(dmlir+cq組,n=8),三組繼續(xù)予高糖高脂飼料喂養(yǎng)。dmlir組以100ug/kg每天兩次腹部皮下注射利拉魯肽溶液,dmlir+cq組以100ug/kg每天兩次腹部皮下注射利拉魯肽溶液,并以50mg/kg每三天一次腹腔注射氯喹溶液,dmns組、ngt組腹部注射等體積生理鹽水,每周測(cè)定各組大鼠體重及fbg。上述藥物干預(yù)大鼠4周后,隔夜禁食12h后,測(cè)定體重,鼠尾采血測(cè)定fbg、50%葡萄糖注射液灌胃(4ml/kg)2小時(shí)后測(cè)定2hbg。次日空腹腹腔注射20%烏拉坦溶液(4ml/kg)麻醉大鼠,開(kāi)腹后經(jīng)腹主動(dòng)脈取血,測(cè)定空腹胰島素(fins)、甘油三酯(tg)、總膽固醇(tc)、高密度脂蛋白(hdl)、低密度脂蛋白(ldl-c)。取三塊約100mg的胰腺組織,錫箔紙包裹于液氮罐中保存,待行實(shí)時(shí)熒光定量pcr測(cè)定lc3bmrna水平,通過(guò)擴(kuò)增曲線使用2-△△ct進(jìn)行線性轉(zhuǎn)換后進(jìn)行定量計(jì)算。以脾臟為標(biāo)記,取胰腺尾部浸泡于10%甲醛液固定48h后石蠟包埋,備做病理切片,用于免疫組化測(cè)定lc3b蛋白的表達(dá),顯色結(jié)果采用scanscopegs掃描儀分析,隨機(jī)選取5個(gè)lc3b蛋白陽(yáng)性表達(dá)區(qū)域,在400倍視野下計(jì)算染色區(qū)域的灰度值(灰度值與蛋白表達(dá)水平呈反比),取平均值進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。光鏡下隨機(jī)選取5個(gè)視野,40倍物鏡下計(jì)算胰島內(nèi)空泡細(xì)胞與胰島細(xì)胞總數(shù)的比值,取平均值評(píng)價(jià)胰腺脂肪沉積情況。分離內(nèi)臟脂肪、稱重,并計(jì)算內(nèi)臟脂肪與體重的比值即內(nèi)臟脂肪相對(duì)含量(vf/w)。3.統(tǒng)計(jì)學(xué)方法:上述指標(biāo)均為計(jì)量資料,以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示,運(yùn)用spss13.0統(tǒng)計(jì)軟件分析。ngt、dmns、dmlir、dmlir+cq四組實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)均滿足正態(tài)分布和方差齊性。組間比較采用單因素方差分析(anova)、lsd檢驗(yàn)。dm組lc3bmrna與fbg、tg、tc、fins、vf/w、空泡細(xì)胞/總胰島細(xì)胞的相關(guān)性采用pearson相關(guān)分析,通過(guò)多元逐步回歸法確定自噬的影響因素,以p≤0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)果:1.各組大鼠一般特征比較:適應(yīng)性喂養(yǎng)期間,大鼠飲食量、體重?zé)o明顯差異,精神狀態(tài)良好,毛色光澤。造模期間,dm組大鼠較ngt組大鼠飲食量、體重均增加,dm組大鼠體型肥胖、少動(dòng)。造模成功后,藥物干預(yù)期間,ngt組大鼠飲食量較前無(wú)變化,體重呈穩(wěn)定增長(zhǎng);dmns組大鼠較同期ngt組大鼠體重增加,少動(dòng);dmlir組大鼠較同期dmns組大鼠飲食量、體重均下降,精神狀態(tài)良好;dmlir+cq組大鼠精神萎靡,有脫毛現(xiàn)象,較同期dmns組大鼠飲食量、體重均下降,與同期dmlir組大鼠比較,飲食量、體重?zé)o差別。與ngt組比較,dmns組大鼠vf/w升高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p㩳0.05);與dmns組比較,dmlir組大鼠vf/w降低,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p㩳0.05);dmlir+cq組大鼠vf/w差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05)。2.各組大鼠生化指標(biāo)比較:與ngt組比較,dmns組大鼠fbg、2hbg、fins、tg、tc、ldl-c升高,hdl降低,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p㩳0.05)。與dmns組比較,dmlir組大鼠fbg、2hbg、fins、tg、tc、ldl-c降低,hdl升高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p㩳0.05);dmlir+cq組fbg、2hbg、hdl降低,fins、tg、tc、ldl-c升高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p㩳0.05)。3.各組大鼠胰腺自噬水平及脂肪沉積比較:與ngt組比較,dmns組大鼠lc3bmrna及蛋白表達(dá)、空泡細(xì)胞/總胰島細(xì)胞升高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p㩳0.05)。與dmns組比較,dmlir組大鼠lc3bmrna及蛋白表達(dá)升高、空泡細(xì)胞/總胰島細(xì)胞下降,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p㩳0.05);dmlir+cq組大鼠lc3bmrna及蛋白表達(dá)下降、空泡細(xì)胞/總胰島細(xì)胞升高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p㩳0.05)。光鏡下觀察胰腺脂肪沉積情況:ngt組大鼠胰腺由團(tuán)索狀的胰島及周圍外分泌部腺泡組成,胰島散在分布,結(jié)構(gòu)規(guī)則,胰島內(nèi)細(xì)胞排列緊密,細(xì)胞核呈圓形并居中,細(xì)胞內(nèi)無(wú)明顯脂滴,細(xì)胞間有豐富的血竇。dmns組大鼠胰腺小葉間纖維增生,胰島細(xì)胞排列紊亂,間隔增寬,部分胰島細(xì)胞內(nèi)可見(jiàn)脂滴,形成空泡細(xì)胞。dmlir+cq組胰島內(nèi)胰島細(xì)胞排列松散,胰島內(nèi)血管數(shù)量增多,擴(kuò)張,胰島細(xì)胞內(nèi)脂滴明顯增多,細(xì)胞核被推擠變形。dmlir組胰島組織結(jié)構(gòu)呈現(xiàn)逆轉(zhuǎn),胰島細(xì)胞數(shù)量較dmns組明顯增加,但胰島細(xì)胞間排列不緊密、分布不均一,少數(shù)空泡脂滴散在分布。4.自噬相關(guān)因素分析:LC3B mRNA水平與FBG、TG、TC、FINS、胰島素抵抗指數(shù)、空泡細(xì)胞/總胰島細(xì)胞呈正相關(guān)(P0.05),胰島素抵抗指數(shù)是影響糖尿病大鼠自噬水平的獨(dú)立因素。結(jié)論:1.糖尿病階段存在胰腺脂肪沉積及自噬代償性激活。2.利拉魯肽通過(guò)增強(qiáng)糖尿病大鼠胰腺自噬,減少胰腺脂肪沉積,同時(shí)改善糖脂代謝。
【關(guān)鍵詞】：糖尿病 利拉魯肽 自噬 脂肪異位沉積
【學(xué)位授予單位】：山西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R587.1
【目錄】：

• 中文摘要5-9
• 英文摘要9-13
• 常用縮寫(xiě)詞中英文對(duì)照表13-14
• 前言14-15
• 1 材料與方法15-20
• 1.1 主要試劑及儀器15
• 1.2 實(shí)驗(yàn)對(duì)象15-16
• 1.3 各項(xiàng)實(shí)驗(yàn)指標(biāo)檢測(cè)16-19
• 1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析19-20
• 2 結(jié)果20-28
• 2.1 各組大鼠一般特征比較20-22
• 2.2 各組大鼠生化指標(biāo)比較22-23
• 2.3 各組大鼠自噬水平及胰腺脂肪沉積比較23-27
• 2.4 自噬相關(guān)因素分析27-28
• 3 討論28-31
• 3.1 糖尿病階段存在胰腺脂肪沉積28-29
• 3.2 糖尿病階段自噬增強(qiáng)29-30
• 3.3 利拉魯肽通過(guò)增加自噬水平改善胰腺脂肪沉積30-31
• 4 結(jié)論31-32
• 參考文獻(xiàn)32-35
• 綜述35-44
• 參考文獻(xiàn)41-44
• 致謝44-45
• 在學(xué)期間研究成果45-46
• 個(gè)人簡(jiǎn)歷46

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  本文關(guān)鍵詞：利拉魯肽對(duì)糖尿病大鼠自噬及胰腺脂肪沉積作用機(jī)制的研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

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