本文關(guān)鍵詞：中藥梔子及其成分梔子苷對腎臟毒性及機制初步研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：梔子(Gardenia jasminoides Ellis)味苦、性寒,入心、肝、胃、三焦經(jīng),有瀉火除煩、清熱利濕、涼血解毒,外用消腫止痛的功效;用于治療熱病心煩,濕熱黃疸,淋證澀痛,血熱吐,目赤腫痛,火毒瘡瘍;外治扭挫傷痛。也是臨床十分常用的保肝利膽藥,梔子果實中所含的環(huán)烯醚萜苷類的主要成分是梔子苷,梔子苷是梔子的主要有效成分,是現(xiàn)行藥典中列出的梔子含量檢測指標(biāo)。動物實驗的研究報道證實大劑量的梔子單藥水煎液或梔子苷可能對動物有一定的肝、腎毒性,報道研究仍以肝臟毒性為主,關(guān)于腎臟毒性的報道鮮少,且未見相關(guān)機制的研究。目的:研究梔子苷短期給藥和長期給藥對大鼠的潛在腎臟毒性,初步探討引起腎臟潛在毒性的劑量和毒性機制,為臨床用藥提供相關(guān)的安全性信息。方法:分別進行給藥3天和給藥90天的腎臟毒性實驗,動物分組和給藥方法為:(1)短期給藥的腎毒性實驗:采用SD大鼠,隨機分為4個組,包括對照組,梔子苷50、100、300 mg·kg-1組(根據(jù)梔子中梔子苷含量推算,約相當(dāng)于臨床梔子劑量的5、10、30倍)。梔子苷各劑量組灌胃給藥,每日1次,連續(xù)給藥3天;對照組灌胃給予同體積純凈水。(2)長期給藥的腎毒性實驗:采用SD大鼠,隨機分為6個組,包括對照組,梔子苷25、50、100 mg·kg-1組(根據(jù)梔子中梔子苷含量推算,約相當(dāng)于臨床梔子劑量的2.5、5、10倍),梔子提取物組和梔子豉湯組(劑量相當(dāng)于梔子苷50mg·kg-1)。各給藥組均灌胃給藥,每日1次,連續(xù)給藥90天。短期給藥實驗于第3天末次給藥結(jié)束后、長期給藥實驗于給藥90天給藥結(jié)束后分別進行樣本收集和各項檢測指標(biāo)觀察。于各時間點給藥結(jié)束后,將動物單只放入代謝籠,收集16h尿液,檢測尿液相關(guān)的定性指標(biāo)和腎損傷因子-1(Kim-1)、中性粒細胞明膠酶相關(guān)脂質(zhì)運載蛋白(NGAL)含量。尿液收集完畢后,將動物麻醉,從腹主動脈取血,檢測血液尿素氮(BUN)、肌酐(CRE)的含量。摘取腎臟,一側(cè)腎臟進行病理學(xué)檢查;另一側(cè)腎臟組織勻漿,提取總RNA,采用q PCR方法檢測Oat1、Oat3、Nga L、Timp-1、Clusterin的m RNA表達,采用Western-Blot方法檢測Oat1、Oat3的蛋白表達。90天實驗的腎臟還增加腎臟TGF-β1和p38-MAPK m RNA表達以及TGF-β1、p38-MAPK蛋白表達。結(jié)果:(1)短期給藥的腎臟毒性:梔子苷高劑量(300mg·kg-1)給藥3天后對大鼠腎臟有一定毒性,病理檢查可見腎小管細胞腫脹,有空泡化改變,腎小管腔內(nèi)見粉紅色滲液和少量細胞脫落;尿液Kim-1和Nga L水平顯著增高;但血液生化指標(biāo)BUN、CRE未見明顯變化。但降低劑量(50、100mg·kg-1)給藥3天,上述各指標(biāo)未見明顯異常。說明梔子苷劑量過大時(300 mg·kg-1)短期給藥,可造成大鼠潛在的腎臟毒性,而控制劑量在≤100 mg·kg-1時,短期給藥則毒性不明顯。(2)長期給藥的腎臟毒性:梔子苷100mg·kg-1劑量組給藥90天后,可見腎臟顏色變深呈墨綠色;25、50mg·kg-1劑量組顏色變化不明顯。100mg·kg-1劑量組可見腎小管細胞胞漿內(nèi)有藥物色素沉積,部分動物細胞輕度腫脹,管腔內(nèi)少量滲出物,顯示有一定毒性改變,但程度很輕;25、50mg·kg-1劑量組病理損傷不明顯。雌性動物100mg·kg-1劑量組尿液NGAL明顯上升,雄性未見明顯增高。各劑量組血液BUN、CRE、Kim-1和NGAL水平均與對照組比較無顯著差異。梔子提取物組和梔子豉湯組僅有個別動物的腎小管有輕度腫脹和藥物色素沉積,其他動物未見明顯病理變化,血液BUN、CRE和尿液Kim-1和NGAL水平均與對照組比較無顯著差異,提示無明顯毒性病理損傷。(3)對腎臟轉(zhuǎn)運蛋白及其他相關(guān)分子表達的影響:梔子苷給藥3天時,50、100、300mg·kg-1劑量組均可下調(diào)Oat1和Oat3的m RNA和蛋白表達,上調(diào)NGAL、Timp-1、Clusterin m RNA表達,結(jié)果均有統(tǒng)計學(xué)意義。長期給藥90天時,梔子苷50、100 mg·kg-1劑量組以及梔子提取物、及梔子豉湯組對腎臟組織中的Oat1和Oat3表達有下調(diào)趨勢。結(jié)論:(1)梔子苷短期用藥劑量過高時(300mg·kg-1,約相當(dāng)于臨床劑量30倍)可造成大鼠腎臟毒性,100 mg·kg-1及以下劑量水平短期用藥無明顯毒性。傳統(tǒng)的腎臟功能指標(biāo)血液BUN和CRE無明顯變化,但尿液Kim-1和NGAL水平增高,建議增加尿液Kim-1和NGAL含量檢測作為毒性監(jiān)測指標(biāo)。(2)梔子苷劑量達到100 mg·kg-1時(約為臨床劑量的10倍)時用藥90天可造成腎小管細胞輕度病變,顯示有一定的腎臟毒性,但程度很輕。25、50 mg·kg-1未見腎臟毒性。(3)梔子苷的腎臟毒性與其對腎小管細胞轉(zhuǎn)運體的抑制有一定關(guān)系,在短期用藥較高劑量(300 mg·kg-1)時即可明顯抑制腎臟Oat1和Oat3的表達,這可能影響腎臟的毒性物質(zhì)的排泄,從而造成毒性。長期用藥時,可增加腎臟基質(zhì)金屬蛋白酶抑制因子Timp-1的表達,這可能在一定程度上影響了細胞外基質(zhì)的合成與降解,從而對腎臟造成一定的影響。(4)梔子提取物和梔子豉湯在本研究所涉及的劑量下給藥90天對大鼠無明顯的毒性作用。
【關(guān)鍵詞】：梔子苷 梔子豉湯 腎毒性 Kim-1 NGAL Oats TGF-β1
【學(xué)位授予單位】：首都醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R285.1
【目錄】：

• 中文摘要4-7
• Abstract7-10
• 英文縮寫詞表10-11
• 前言11-15
• 第一部分 梔子苷短期給藥對大鼠潛在腎臟毒性研究15-39
• 1 材料15-20
• 2 方法20-26
• 3 統(tǒng)計分析26-27
• 4 結(jié)果27-37
• 5 小結(jié)與討論37-39
• 第二部分 梔子苷、梔子以及梔子豉湯長期給藥對大鼠的潛在腎臟毒性研究39-75
• 1 材料39-44
• 2 方法44-47
• 3 統(tǒng)計分析47-48
• 4 結(jié)果48-73
• 5 小結(jié)與討論73-75
• 結(jié)論和討論75-81
• 文獻綜述81-90
• 1. 梔子及梔子苷毒性反應(yīng)文獻分析81-85
• 2.傳統(tǒng)制劑中中草藥的腎毒性研究現(xiàn)狀85-87
• 3.中藥腎損害的相關(guān)機制及檢測指標(biāo)87-90
• 參考文獻90-98
• 攻讀學(xué)位期間發(fā)表論文情況98-99
• 致謝99-100
• 個人簡介100

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本文編號：280899