本文關鍵詞：瑞舒伐他汀對UUO大鼠模型LPA1受體、RhoA、CTGF及Ⅲ型膠原表達的影響，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:腎間質纖維化是慢性腎臟病(Chronic Kidney Disease,CKD)的最終表現(xiàn),使慢性腎臟病不可避免的進展至終末期腎病(End Stage Renal Disease,ESRD),其治療包括血液凈化和腎移植治療。腎間質纖維化以腎小管間質纖維化和腎小球硬化為主要表現(xiàn),分子學機制表現(xiàn)為:細胞外基質的過度沉積(Extracellular Matrix,ECM),而病理學則往往表現(xiàn)為細胞的激活,例如:上皮細胞間充質轉分化、纖維母細胞、纖維細胞、肌成纖維細胞、單核/巨噬細胞的浸潤等;細胞凋亡和信號分子的激活,例如:轉化生長因子-β、血管緊張素-Ⅱ等。3-羥基-3-甲基戊二酰輔酶A還原酶(HMG-Co A reductase)作為膽固醇合成過程中的限速酶,在膽固醇合成過程中起關鍵作用,其抑制劑即他汀類藥物是治療血脂異常的經典藥物。他汀類藥物普遍應用于心腦血管疾病,但是它的多效性還體現(xiàn)在抗炎癥細胞浸潤、抗氧化應激、減輕細胞外基質沉積等,具有腎臟保護作用。有關研究顯示:腎間質纖維化過程中溶血磷脂酸受體-1(Lysophosphatidic Acid Receptor-1,LPA1R)表達增加,從而誘導結締組織生長因子(Connective Tissue Growth Factor,CTGF)和Ⅲ型膠原(Collagen TypeⅢ)的表達增加,此過程通過多種信號通路來調節(jié),是否通過小G蛋白Rho A來調控研究尚少,他汀類藥物可通過其異戊二烯化作用降低Rho A蛋白的表達。本實驗目的是擬通過瑞舒伐他汀的干預,觀察其對LPA1受體、Rho A、CTGF及Ⅲ型膠原在單側輸尿管梗阻模型所致的腎間質纖維化大鼠中表達的影響,研究LPA1受體是否是通過小G蛋白Rho A進行調控,探討瑞舒伐他汀減輕、延緩腎間質纖維化,腎臟保護作用的可能機制,為延緩慢性腎臟病的進展提供新的治療靶點。方法:將54只SPF級雄性SD大鼠(體重180g±20g)編號后按照隨機原則分為三組:正常對照組(A組)18只,模型組(單側輸尿管結扎組,B組)18只,治療組(瑞舒伐他汀干預組,C組)18只。適應性喂養(yǎng)7天后建立單側輸尿管梗阻模型,各組大鼠于術前12小時開始禁食水。手術過程如下:每組大鼠均以10%水合氯醛(0.3ml/100g)腹腔注射+2%鹽酸利多卡因皮下浸潤麻醉。備皮消毒鋪單后,觸診腎臟,給予左側腹部縱形切口,逐層分離組織層及肌肉層,暴露左腎,并沿左腎下極找到左輸尿管,在輸尿管中上1/3處用4—0號線上下結扎并從中剪斷輸尿管,以防逆行性感染,逐層縫合至皮膚。A組大鼠除不結扎和剪斷輸尿管外,其他手術過程與其余兩組相同。C組給予瑞舒伐他汀混懸液10mg/(Kg·d)灌胃;對照組及模型組每日給予等容積的0.9%氯化鈉注射液灌胃;三組大鼠均于造模前1天開始灌胃。單側輸尿管梗阻(unilateral ureteral occlusion,UUO)術后分別于3、7、14天取6只大鼠處死,留取左腎標本置于4%多聚甲醛固定液中固定并編號,經梯度酒精逐級脫水,二甲苯透明,石蠟包埋,制成3um切片,烘干,然后用HE、Masson染色法染色后,于光鏡下觀察大鼠腎臟組織病理改變及腎間質纖維化程度;應用免疫組化技術檢測LPA1受體、Rho A、CTGF及Ⅲ型膠原在腎臟中的表達,對結果進行半定量分析。所有實驗數據用SPSS 20.0統(tǒng)計分析軟件進行統(tǒng)計學處理,以均數±標準差(x±S)表示統(tǒng)計結果,應用單因素方差分析對數據進行分析,P0.05表示結果有統(tǒng)計學意義。結果:1腎組織病理形態(tài)學觀察光鏡下HE染色:A組,腎小球和腎小管及間質未見明顯異常;B組,術后第3天,可觀察到少量炎癥細胞在腎間質局部浸潤,腎小管有輕度擴張;第7天,可觀察到大量炎癥細胞浸潤于腎間質區(qū)域,腎間質寬度明顯增加,腎小管明顯擴張,上皮細胞變性、壞死;第14天,可見較多腎小管萎縮,腎小管基底膜有彌漫性增厚、皺縮;C組,術后腎小管間質病變隨梗阻時間延長進行性加重,和同時相B組相比,病變程度有所減輕,但仍明顯重于A組。光鏡下Masson染色:A組,未見明顯異常;B組,術后第3天可觀察到腎小管輕度擴張,腎間質區(qū)域可見少量藍色膠原纖維沉積,與A組相比有所增加;術后第7天及第14天,腎小管擴張程度進行性加重,膠原纖維沉積顯著增多,間質纖維化現(xiàn)象明顯;C組,術后腎小管擴張程度、膠原纖維表達水平隨梗阻時間延長進行性加重、增多,雖較同時相B組的病變程度稍輕,但仍明顯重于A組。2腎組織中LPA1受體、Rho A、CTGF及Col-Ⅲ免疫組織化學染色LPA1受體:A組,腎小管上皮細胞、系膜細胞微量表達;B組,腎小管上皮細胞及腎間質大量表達,且隨梗阻時間的延長表達量增加,較同時相A組有統(tǒng)計學差異(P均0.05);C組,腎小管上皮細胞及腎間質大量表達,隨梗阻時間的延長進行性加重,較同時相A組表達增加,有統(tǒng)計學差異(P均0.05),但B、C兩組間表達無統(tǒng)計學差異(P均0.05)。Rho A:A組,腎小管上皮細胞輕微表達,為基礎水平的表達,腎小球無明顯表達;B組,隨著梗阻時間的延長,腎小管上皮細胞及腎間質表達增加,有統(tǒng)計學差異(P均0.05),較A組同時相表達增加,有統(tǒng)計學差異(P均0.05);C組,隨著梗阻時間延長表達增加,術后3、7、14天相比有統(tǒng)計學差異(P均0.05),與同時相B組相比術后3天和術后7天無統(tǒng)計學差異(P0.05),較術后14天有統(tǒng)計學差異(P0.05),較同時相A組有統(tǒng)計學差異(P均0.05)。CTGF:A組,腎小球無明顯表達,在腎小管上皮細胞輕微表達;B組,術后3、7、14天較A組同時相表達均增加(P均0.05),術后7天較術后3天表達增加有統(tǒng)計學差異(P0.05),術后14天表達進一步增加(P0.05);C組,隨梗阻時間的延長,其表達增加有統(tǒng)計學差異(P均0.05),與同時相B組相比表達下降,與A組相比表達增加(P均0.05)。Col-Ⅲ:A組,腎小管上皮細胞輕微表達,為基礎水平的表達,腎小球無明顯表達;B組,隨著梗阻時間的延長,腎小管上皮細胞及腎間質表達增加,但術后3天及術后7天表達無統(tǒng)計學差異(P0.05),較術后14天分別具有統(tǒng)計學差異(P均0.05),較A組同時相表達增加,有統(tǒng)計學差異(P均0.05);C組,隨著梗阻時間延長表達增加,但術后3天和術后7天無統(tǒng)計學差異(P0.05),分別較術后14天有統(tǒng)計學差異(P均0.05),較同時相A組和B組均有統(tǒng)計學差異(P均0.05)。結論:LPA1受體、Rho A、CTGF和Col-Ⅲ在梗阻側腎臟表達增加,且具有時間依賴性。瑞舒伐他汀通過下調Rho A的表達,減輕CTGF和Ⅲ型膠原在腎臟的表達,從而可能起到延緩及減輕腎間質纖維化的作用。瑞舒伐他汀減輕腎間質纖維化的作用機制之一可能是通過下調Rho A,抑制其異戊二烯化作用保護腎臟功能。
【關鍵詞】：瑞舒伐他汀 腎間質纖維化 RhoA 溶血磷脂酸受體-1 結締組織生長因子 Ⅲ型膠原
【學位授予單位】：河北醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R965
【目錄】：

• 摘要4-8
• ABSTRACT8-13
• 英文縮寫13-14
• 前言14-15
• 材料與方法15-19
• 結果19-22
• 附圖22-46
• 附表46-49
• 討論49-54
• 結論54
• 參考文獻54-59
• 綜述 HMG-CoA還原酶抑制劑抗腎間質纖維化的作用機制59-66
• 參考文獻63-66
• 致謝66-67
• 個人簡歷67

【參考文獻】

中國期刊全文數據庫 前4條

1 王洪濤;周建華;;小G蛋白Rho與腎間質纖維化[J];國際內科學雜志;2009年07期

2 盧思廣;劉健勝;于艷輝;;腎小管間質纖維化發(fā)病機制的研究進展[J];實用兒科臨床雜志;2011年17期

3 李慶憲;查文菁;;他汀類藥物非調脂作用的研究新進展[J];中國醫(yī)院藥學雜志;2009年17期

4 梁艷;王皓;楊再興;仲人前;;上皮間質轉化在纖維化疾病中的研究進展[J];中國實驗診斷學;2013年08期

  本文關鍵詞：瑞舒伐他汀對UUO大鼠模型LPA1受體、RhoA、CTGF及Ⅲ型膠原表達的影響，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：267071