【摘要】：背景和目的皮膚損傷后愈合方式包括再生修復(fù)(完全愈合)和瘢痕增生(不完全愈合)。創(chuàng)面愈合是一個(gè)復(fù)雜有序的過(guò)程,有多種細(xì)胞、細(xì)胞因子、膠原及信號(hào)分子均參與這一過(guò)程,并對(duì)創(chuàng)傷后炎性反應(yīng)、細(xì)胞增殖、結(jié)締組織形成、創(chuàng)面收縮和重新塑造等起重要作用。瘢痕形成不僅影響外觀,而且常常導(dǎo)致功能障礙,如關(guān)節(jié)部位,嚴(yán)重者可導(dǎo)致器官功能部分喪失或全部喪失。Ⅳ型及Ⅵ型膠原作為細(xì)胞外基質(zhì)的主要組成分,在創(chuàng)面愈合中發(fā)揮重要作用。Ⅳ型對(duì)創(chuàng)面愈合具有雙重作用：一方面,參與基底膜的形成,使表皮與乳頭真皮層粘附促進(jìn)創(chuàng)面愈合；另一方面,可抑制血管內(nèi)皮細(xì)胞粘附于血管基底膜,阻止新血管形成,延遲創(chuàng)面愈合。Ⅵ型膠原可形成微纖絲促使Ⅰ型和Ⅲ型膠原沉積,并促使細(xì)胞粘附,激活基質(zhì)金屬蛋白酶的活性使創(chuàng)面組織重塑[3]而促進(jìn)創(chuàng)面愈合。然而,Ⅳ型及Ⅵ型膠原在皮膚創(chuàng)傷再生修復(fù)及瘢痕愈合中的變化仍不清楚。本研究采用耳兔皮膚再生和瘢痕愈合一體化模型,使用HE染色法及免疫組織化學(xué)技術(shù),檢測(cè)Ⅳ型及Ⅵ型膠原在皮膚從淺到深層損傷區(qū)愈合和瘢痕演變過(guò)程中的表達(dá),了解Ⅳ型及Ⅵ型膠原蛋白在皮膚再生修復(fù)和瘢痕形成中的變化規(guī)律。 材料和方法選用健康日本大耳白兔26只,(購(gòu)于蘭州市獸醫(yī)研究所,普通級(jí)動(dòng)物,合格證號(hào)：SCKX甘2004-0005),雌雄不拘,體重在2.0kg-3.0kg之間。單只分籠飼養(yǎng),普通飼料喂養(yǎng),自由進(jìn)食水,適應(yīng)性飼養(yǎng)一周后,采用含8%硫化鈉的自制脫毛劑行兔耳腹側(cè)脫毛,脫毛后飼養(yǎng)3天,以減少硫化鈉對(duì)兔耳腹側(cè)皮膚的損傷。采用2%的戊巴比妥鈉(30mg/kg)耳緣靜脈注射麻醉,麻妥后,采用自制模具充分展平兔耳腹側(cè)皮膚,分別于兩側(cè)兔耳各制作兩個(gè)創(chuàng)面(10mm×10mm,創(chuàng)面為由淺至深的斜面,淺層僅傷及表皮,深層至軟骨表面),共84個(gè)。分別于傷后即刻、傷后3天、傷后6天、傷后9天、傷后27天、傷后50天切取創(chuàng)面及創(chuàng)周組織。實(shí)驗(yàn)前經(jīng)蘭州大學(xué)第二醫(yī)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物倫理委員會(huì)審批同意,所有實(shí)驗(yàn)動(dòng)物給予人文關(guān)懷。 標(biāo)本使用HE染色法及免疫組織化學(xué)檢測(cè)Ⅳ型及Ⅵ型膠原在兔耳腹側(cè)皮膚損傷區(qū)深、淺兩層的表達(dá)情況。 沿斜形創(chuàng)面由淺入深的方向,將其分為10等分,每等分1.0mm×10mm,采用Image-Pro—Plus6.0圖像分析軟件檢測(cè)每等分組織區(qū)域內(nèi)的10個(gè)視野中的平均光密度。淺層創(chuàng)面定義為距淺表皮膚損傷側(cè)向創(chuàng)面中心3mm范圍,深層創(chuàng)面定義為距軟骨暴露側(cè)向創(chuàng)面中心3mm范圍內(nèi)。 所檢測(cè)測(cè)到的數(shù)據(jù)采用x±s表示,統(tǒng)計(jì)學(xué)分析使用SPSS18.0軟件包：若方差齊性時(shí),多組間均數(shù)比較則采用方差分析,兩兩比較時(shí)使用最小顯著差異法,方差補(bǔ)齊時(shí)則采用秩和檢驗(yàn)法,P0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 結(jié)果 1.傷后3天創(chuàng)面結(jié)痂。淺層創(chuàng)面?zhèn)?天痂脫落,第9天再生修復(fù)；而深層創(chuàng)面于傷后第9天痂大部分脫落,傷后12-14天上皮化。傷后27天瘢痕增生顯著,瘢痕質(zhì)硬,傷后50天瘢痕成熟軟化,創(chuàng)面膚色與周圍不能分辨。 2.Ⅳ型膠原主要表達(dá)于皮膚及血管BMs。傷后第3天創(chuàng)面開(kāi)始表達(dá),上皮化時(shí)達(dá)高峰,傷后27天時(shí)明顯減少。傷后27天內(nèi)淺層創(chuàng)面表達(dá)量較深層多(p0.05)。傷后50天時(shí)深淺創(chuàng)面無(wú)明顯區(qū)別(p0.05)。 3.Ⅵ型膠原廣泛表達(dá)于整個(gè)真皮層。傷后第3天創(chuàng)面開(kāi)始表達(dá),隨后逐漸增加,傷后27天開(kāi)始減少。傷后6天內(nèi)淺層創(chuàng)面表達(dá)量較深層創(chuàng)面多(p0.05)。傷后第9、12、27天深層表達(dá)量均多于淺層Q0.05)。傷后50天深淺創(chuàng)面表達(dá)量無(wú)明顯差異(p0.05)。 結(jié)論 1.創(chuàng)面Ⅳ型膠原表達(dá)量傷后27天內(nèi)淺層高于深層創(chuàng)面。 2.Ⅵ型膠原表達(dá)量傷后6天內(nèi)淺層創(chuàng)面較深層多；9-27天深層較淺層高。
【學(xué)位授予單位】：蘭州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號(hào)】：R622

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本文編號(hào)：2585170