【摘要】：[目的] DVT危害大,形成機制復雜,需深入研究。本研究在大鼠DVT模型中,獲取血栓形成前、血栓完全形成狀態(tài)靜脈血液；在臨床研究中,采集血栓形成狀態(tài)靜脈血液,均分離血漿,定量檢測β2-GP1蛋白表達變化；應用相關生物信息學分析技術,探討該分子表達變化在深靜脈血栓形成中的具體意義,圍繞血栓形成中的內皮細胞、血小板、炎性細胞關鍵角色,重點分析血小板與血栓在分子層面的聯(lián)系,為更有針對性的、更好的在分子水平上研究血小板與DVT的聯(lián)系,建立快速、有效的途徑。 [材料方法] 第一部分在大鼠DVT模型血漿中,檢測β2-GP1蛋白表達 1造模及分組：70只雌性SD大鼠,年齡不限,隨機分為3組正常對照組(10只)：正常飼養(yǎng),不進行任何處理。 假手術組(30只)：腹腔麻醉,開腹,不分離、暴露血管,關腹,正常飼養(yǎng)。實驗組(30只)：腹腔麻醉,開腹,分離暴露下腔靜脈,5-0愛惜康縫合線沿下腔靜脈平行、緊貼放置,再用4-0愛惜康縫合線結扎此處下腔靜脈,再抽去并排的5-0愛惜康縫合線,關腹,正常飼養(yǎng)。 2血液采集及病理檢查：分別于造模后2h、8h、24h,隨機抽取假手術組、實驗組各10只,麻醉后經下腔靜脈(結扎處上方0.5cm)采血3-8ml,置于醫(yī)用真空檸檬酸鈉抗凝管,離心機離心,3000r/min,15分鐘,分離血漿,-80℃深低溫冷凍冰箱保存； 3ELISA檢測β2-GP1表達變化：用ELISA法分別檢測各組血漿中β2-GP1蛋白的表達變化。 4統(tǒng)計學分析：采用Spss17.0對數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計分析,計量資料用均數(shù)±標準差表示,組間差異用單因素方差分析,P0.05有意義。 第二部分DVT患者血漿中檢測β2-GP1蛋白表達 1血栓診斷及分組：參照《靜脈血栓栓塞癥預防的NICE指南》和《美國胸科醫(yī)師協(xié)會抗栓與血栓預防臨床實踐指南—深靜脈血栓形成的診斷》,統(tǒng)一本研究的DVT診斷標準。選取2013年8月——2013年12月,在昆明醫(yī)科大學第一附屬醫(yī)院骨科、血管外科、干療科住院DVT患者30例。選取骨科30例患者,以脊柱脊髓損傷、股骨頭缺血壞死、膝關節(jié)骨性關節(jié)病、髖部骨折為主；以脊柱骨折復位減壓固定術、全髖關節(jié)置換術、半髖關節(jié)置換術、膝關節(jié)置換術、髖部骨折切開復位內固定術為主要治療方式；所選取患者損傷部位更易形成血栓,手術治療方案也和血栓形成密切相關,這些患者行動不便、長期臥床也是血栓易發(fā)的高危因素。同時,選取健康志愿者15例。 正常對照組：隨機選取健康自愿者,10例 血栓形成組：有30例患者形成血栓,選取15例 血栓未形成組：動態(tài)觀察2周,30例無血栓形成,選取15例 2血液樣本采集：采集各組上肢外周靜脈血,每例采血5m1/次,所抽取血液樣本保存于醫(yī)用真空檸檬酸鈉抗凝管,即刻離心機離心,3000r/min,15分鐘,分離血漿,置于-80℃深低溫冷凍冰箱備用。 3ELISA檢測β2-GPI的表達：用ELISA法分別檢測各組所獲取的血漿中β2-GP1蛋白表達。 4統(tǒng)計方法：采用Spss17.0對數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計分析,計量資料用均數(shù)±標準差表示,組間差異用單因素方差分析,P0.05有意義。 第三部分生物信息學分析技術,分析血小板與DVT在分子層面的聯(lián)系 1應用Kegg pathway數(shù)據(jù)庫,分析、歸納、總結β2-GPI與血小板聚集如何影響出凝 血動態(tài)平衡。 [結果] 第一部分在大鼠DVT模型血漿中,檢測蛋白表達 1成功造模,在相應的時間點取到的血漿中,正常對照組β2-GP1的OD值0.43±0.24,假手術組0.44±0.12,血栓形成前0.58±0.14,血栓形成早期0.74±0.16,血栓形成高峰0.80±0.10。β2-GP1蛋白表達量在血栓形成前、血栓形成早期、血栓形成高峰期逐步升高,在假手術組中無明顯變化。各組間β2-GP1的統(tǒng)計學分析：假手術組/正常對照,P=0.112,無統(tǒng)計學差異；血栓形成前與正常對照相比,P=0.033,與假手術組相比,P=0.037,有統(tǒng)計學差異；血栓形成早期.正常對照相比,P=0.000,與假手術組相比,P=0.006,有統(tǒng)計學差異；血栓形成高峰/正常對照相比,P=0.000,與假手術組相比,P＝0.001,有統(tǒng)計學差異。 第二部分DVT患者血漿中檢測β2-GP1蛋白表達 1在相應組別取到的血漿中,正常對照組β2-GP1的OD值0.22±0.06,血栓未形成組0.23±0.05,血栓形成組0.27±0.07。各組間β2-GP1的統(tǒng)計學比較：血栓形成組/正常對照組,P=0.018,有統(tǒng)計學差異；血栓未形成組/正常對照組,P=0.318,無統(tǒng)計學差異；血栓形成組/血栓未形成組,P=0.048,有統(tǒng)計學差異。 第三部分應用生物信息學分析技術,分析血小板與DVT在分子層面的聯(lián)系 1P2-GPI通過血小板膜表面apoER2、GPIba受體,調控AKt、enos等下游基因,影響PGG2、PGH2的代謝,釋放TXA2, TXA2作用于血小板TBXA2R受體,活化PLCβ,降低CAMP的含量及活性,使血小板膜糖蛋白(GP) Ⅱb/Ⅲa位點暴露,引起血小板聚集,活化的血小板吸附凝血因子Ⅲ,啟動外源性凝血途徑,使血漿內的凝血酶原轉變?yōu)槟?凝血酶可催化纖維蛋白原變成絲狀的纖維蛋白,促進血栓形成。 [結論] P2-GPI在大鼠、人DVT血漿中表達上調,主要通過誘導血小板膜表面apoER2及GPIba受體,膜上的磷脂釋放TXA2,作用于血小板膜上的GPⅡb/Ⅲa,增強血小板聚集,進一步增加血小板膜對凝血因子Ⅲ的吸附,啟動外源性凝血途徑,促進深靜脈血栓形成。
【學位授予單位】：昆明醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2014
【分類號】：R619

【參考文獻】

相關期刊論文 前6條

1 段青;劉風恩;王小農;吳平輝;;下腔靜脈濾器植入預防肺動脈栓塞的臨床應用[J];河北醫(yī)學;2007年07期

2 徐朝陽;石聰聰;李濤;白峻宇;賀穎;鄭紅;;深靜脈血栓患者血清抗心磷脂抗體水平的檢測[J];河南職工醫(yī)學院學報;2011年05期

3 林婷;陳冬;王發(fā)雄;葛燕芬;;系統(tǒng)性紅斑狼瘡患者血漿中生理性和病理性抗凝物的檢測[J];血栓與止血學;2011年03期

4 柳志紅;下肢深靜脈血栓形成診治現(xiàn)狀[J];中國循環(huán)雜志;2002年02期

5 王婷,周紅;β_2糖蛋白Ⅰ及其抗體在抗磷脂綜合征中的作用[J];江蘇大學學報(醫(yī)學版);2005年05期

6 屈晨雪,夏鐵安,王建中;血栓病患者凝血、抗凝和纖溶活性改變的研究[J];中國實驗診斷學;2001年05期

，

本文編號：2584675