【摘要】：[目的] DVT危害大,形成機(jī)制復(fù)雜,需深入研究。本研究在大鼠DVT模型中,獲取血栓形成前、血栓完全形成狀態(tài)靜脈血液；在臨床研究中,采集血栓形成狀態(tài)靜脈血液,均分離血漿,定量檢測(cè)β2-GP1蛋白表達(dá)變化；應(yīng)用相關(guān)生物信息學(xué)分析技術(shù),探討該分子表達(dá)變化在深靜脈血栓形成中的具體意義,圍繞血栓形成中的內(nèi)皮細(xì)胞、血小板、炎性細(xì)胞關(guān)鍵角色,重點(diǎn)分析血小板與血栓在分子層面的聯(lián)系,為更有針對(duì)性的、更好的在分子水平上研究血小板與DVT的聯(lián)系,建立快速、有效的途徑。 [材料方法] 第一部分在大鼠DVT模型血漿中,檢測(cè)β2-GP1蛋白表達(dá) 1造模及分組：70只雌性SD大鼠,年齡不限,隨機(jī)分為3組正常對(duì)照組(10只)：正常飼養(yǎng),不進(jìn)行任何處理。 假手術(shù)組(30只)：腹腔麻醉,開(kāi)腹,不分離、暴露血管,關(guān)腹,正常飼養(yǎng)。實(shí)驗(yàn)組(30只)：腹腔麻醉,開(kāi)腹,分離暴露下腔靜脈,5-0愛(ài)惜康縫合線沿下腔靜脈平行、緊貼放置,再用4-0愛(ài)惜康縫合線結(jié)扎此處下腔靜脈,再抽去并排的5-0愛(ài)惜康縫合線,關(guān)腹,正常飼養(yǎng)。 2血液采集及病理檢查：分別于造模后2h、8h、24h,隨機(jī)抽取假手術(shù)組、實(shí)驗(yàn)組各10只,麻醉后經(jīng)下腔靜脈(結(jié)扎處上方0.5cm)采血3-8ml,置于醫(yī)用真空檸檬酸鈉抗凝管,離心機(jī)離心,3000r/min,15分鐘,分離血漿,-80℃深低溫冷凍冰箱保存； 3ELISA檢測(cè)β2-GP1表達(dá)變化：用ELISA法分別檢測(cè)各組血漿中β2-GP1蛋白的表達(dá)變化。 4統(tǒng)計(jì)學(xué)分析：采用Spss17.0對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析,計(jì)量資料用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示,組間差異用單因素方差分析,P0.05有意義。 第二部分DVT患者血漿中檢測(cè)β2-GP1蛋白表達(dá) 1血栓診斷及分組：參照《靜脈血栓栓塞癥預(yù)防的NICE指南》和《美國(guó)胸科醫(yī)師協(xié)會(huì)抗栓與血栓預(yù)防臨床實(shí)踐指南—深靜脈血栓形成的診斷》,統(tǒng)一本研究的DVT診斷標(biāo)準(zhǔn)。選取2013年8月——2013年12月,在昆明醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院骨科、血管外科、干療科住院DVT患者30例。選取骨科30例患者,以脊柱脊髓損傷、股骨頭缺血壞死、膝關(guān)節(jié)骨性關(guān)節(jié)病、髖部骨折為主；以脊柱骨折復(fù)位減壓固定術(shù)、全髖關(guān)節(jié)置換術(shù)、半髖關(guān)節(jié)置換術(shù)、膝關(guān)節(jié)置換術(shù)、髖部骨折切開(kāi)復(fù)位內(nèi)固定術(shù)為主要治療方式；所選取患者損傷部位更易形成血栓,手術(shù)治療方案也和血栓形成密切相關(guān),這些患者行動(dòng)不便、長(zhǎng)期臥床也是血栓易發(fā)的高危因素。同時(shí),選取健康志愿者15例。 正常對(duì)照組：隨機(jī)選取健康自愿者,10例 血栓形成組：有30例患者形成血栓,選取15例 血栓未形成組：動(dòng)態(tài)觀察2周,30例無(wú)血栓形成,選取15例 2血液樣本采集：采集各組上肢外周靜脈血,每例采血5m1/次,所抽取血液樣本保存于醫(yī)用真空檸檬酸鈉抗凝管,即刻離心機(jī)離心,3000r/min,15分鐘,分離血漿,置于-80℃深低溫冷凍冰箱備用。 3ELISA檢測(cè)β2-GPI的表達(dá)：用ELISA法分別檢測(cè)各組所獲取的血漿中β2-GP1蛋白表達(dá)。 4統(tǒng)計(jì)方法：采用Spss17.0對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析,計(jì)量資料用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示,組間差異用單因素方差分析,P0.05有意義。 第三部分生物信息學(xué)分析技術(shù),分析血小板與DVT在分子層面的聯(lián)系 1應(yīng)用Kegg pathway數(shù)據(jù)庫(kù),分析、歸納、總結(jié)β2-GPI與血小板聚集如何影響出凝 血?jiǎng)討B(tài)平衡。 [結(jié)果] 第一部分在大鼠DVT模型血漿中,檢測(cè)蛋白表達(dá) 1成功造模,在相應(yīng)的時(shí)間點(diǎn)取到的血漿中,正常對(duì)照組β2-GP1的OD值0.43±0.24,假手術(shù)組0.44±0.12,血栓形成前0.58±0.14,血栓形成早期0.74±0.16,血栓形成高峰0.80±0.10。β2-GP1蛋白表達(dá)量在血栓形成前、血栓形成早期、血栓形成高峰期逐步升高,在假手術(shù)組中無(wú)明顯變化。各組間β2-GP1的統(tǒng)計(jì)學(xué)分析：假手術(shù)組/正常對(duì)照,P=0.112,無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異；血栓形成前與正常對(duì)照相比,P=0.033,與假手術(shù)組相比,P=0.037,有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異；血栓形成早期.正常對(duì)照相比,P=0.000,與假手術(shù)組相比,P=0.006,有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異；血栓形成高峰/正常對(duì)照相比,P=0.000,與假手術(shù)組相比,P＝0.001,有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。 第二部分DVT患者血漿中檢測(cè)β2-GP1蛋白表達(dá) 1在相應(yīng)組別取到的血漿中,正常對(duì)照組β2-GP1的OD值0.22±0.06,血栓未形成組0.23±0.05,血栓形成組0.27±0.07。各組間β2-GP1的統(tǒng)計(jì)學(xué)比較：血栓形成組/正常對(duì)照組,P=0.018,有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異；血栓未形成組/正常對(duì)照組,P=0.318,無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異；血栓形成組/血栓未形成組,P=0.048,有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。 第三部分應(yīng)用生物信息學(xué)分析技術(shù),分析血小板與DVT在分子層面的聯(lián)系 1P2-GPI通過(guò)血小板膜表面apoER2、GPIba受體,調(diào)控AKt、enos等下游基因,影響PGG2、PGH2的代謝,釋放TXA2, TXA2作用于血小板TBXA2R受體,活化PLCβ,降低CAMP的含量及活性,使血小板膜糖蛋白(GP) Ⅱb/Ⅲa位點(diǎn)暴露,引起血小板聚集,活化的血小板吸附凝血因子Ⅲ,啟動(dòng)外源性凝血途徑,使血漿內(nèi)的凝血酶原轉(zhuǎn)變?yōu)槟?凝血酶可催化纖維蛋白原變成絲狀的纖維蛋白,促進(jìn)血栓形成。 [結(jié)論] P2-GPI在大鼠、人DVT血漿中表達(dá)上調(diào),主要通過(guò)誘導(dǎo)血小板膜表面apoER2及GPIba受體,膜上的磷脂釋放TXA2,作用于血小板膜上的GPⅡb/Ⅲa,增強(qiáng)血小板聚集,進(jìn)一步增加血小板膜對(duì)凝血因子Ⅲ的吸附,啟動(dòng)外源性凝血途徑,促進(jìn)深靜脈血栓形成。
【學(xué)位授予單位】：昆明醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號(hào)】：R619

【參考文獻(xiàn)】

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1 段青;劉風(fēng)恩;王小農(nóng);吳平輝;;下腔靜脈濾器植入預(yù)防肺動(dòng)脈栓塞的臨床應(yīng)用[J];河北醫(yī)學(xué);2007年07期

2 徐朝陽(yáng);石聰聰;李濤;白峻宇;賀穎;鄭紅;;深靜脈血栓患者血清抗心磷脂抗體水平的檢測(cè)[J];河南職工醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);2011年05期

3 林婷;陳冬;王發(fā)雄;葛燕芬;;系統(tǒng)性紅斑狼瘡患者血漿中生理性和病理性抗凝物的檢測(cè)[J];血栓與止血學(xué);2011年03期

4 柳志紅;下肢深靜脈血栓形成診治現(xiàn)狀[J];中國(guó)循環(huán)雜志;2002年02期

5 王婷,周紅;β_2糖蛋白Ⅰ及其抗體在抗磷脂綜合征中的作用[J];江蘇大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版);2005年05期

6 屈晨雪,夏鐵安,王建中;血栓病患者凝血、抗凝和纖溶活性改變的研究[J];中國(guó)實(shí)驗(yàn)診斷學(xué);2001年05期

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本文編號(hào)：2584675