本文關(guān)鍵詞：L161982對大鼠實(shí)驗(yàn)性自身免疫性神經(jīng)炎中巨噬細(xì)胞亞型變化的影響，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：1.研究目的：吉蘭-巴雷綜合征(Guillain-Barre syndrome, GBS)是以周圍神經(jīng)組織脫髓鞘病變及炎性細(xì)胞浸潤為病理特點(diǎn)的自身免疫性周圍神經(jīng)性疾病,臨床表現(xiàn)為急性對稱性弛緩性肢體癱瘓。實(shí)驗(yàn)性自身免疫性神經(jīng)炎(experimental allergic neuritis, EAN)是T細(xì)胞介導(dǎo)的周圍神經(jīng)系統(tǒng)炎癥性脫髓鞘疾病,因其與GBS具有相似的臨床及病理特點(diǎn)而成為研究人類GBS的經(jīng)典動(dòng)物模型。在EAN的發(fā)病過程中,巨噬細(xì)胞作為一種經(jīng)典的免疫細(xì)胞,參與了疾病的發(fā)生發(fā)展。近年來研究表明,巨噬細(xì)胞在EAN病理過程中主要表現(xiàn)為兩種亞型：經(jīng)典活化的M1亞型巨噬細(xì)胞及選擇性活化的M2亞型巨噬細(xì)胞。M1型巨噬細(xì)胞具有促進(jìn)炎癥進(jìn)展及較強(qiáng)的吞噬作用,而M2型巨噬細(xì)胞具有抑制炎癥,促進(jìn)組織重塑和修復(fù)作用。巨噬細(xì)胞由M1型向M2型轉(zhuǎn)化的機(jī)制仍未十分明確。前列腺素(PG)作為疾病炎癥過程中的非細(xì)胞介質(zhì)參與EAN炎癥的發(fā)生發(fā)展。尤其以前列腺素E2與前列腺素EP2及EP4受體相互作用的促炎性作用更為突出。已有研究證實(shí),使用PGE2-EP4受體拮抗劑L161982可以促進(jìn)包括EAE在內(nèi)的自身免疫疾病的炎癥恢復(fù),減輕臨床癥狀。本研究通過建立EAN大鼠模型,使用前列腺素E2-EP4受體拮抗劑L161982對EAN不同發(fā)病階段進(jìn)行干預(yù),觀察巨噬細(xì)胞M1及M2亞型在EAN不同發(fā)病階段的比例變化及其相關(guān)細(xì)胞因子的表達(dá)變化,探討PGE2-EP4信號(hào)通路對M1與M2亞型轉(zhuǎn)化的影響,進(jìn)一步探索促進(jìn)EAN自發(fā)性恢復(fù)的機(jī)制。2.研究方法：2.1抗原制備采用高速離心法自新鮮的牛神經(jīng)根提取周圍神經(jīng)髓磷脂(bovine peripheral nerve myelin, BPM)。將提取的BPM溶于含H37Ra熱滅活結(jié)核菌的不完全弗氏佐劑中,邊震蕩混勻邊加入等量生理鹽水制成混懸液。其中,每100ul抗原乳劑含BPM5mg,結(jié)核桿菌lmg。2.2實(shí)驗(yàn)動(dòng)物處理2.2.1建立EAN模型21只健康、清潔的6-8周(160-170g)齡雌性Lewis大鼠于SPF級(jí)實(shí)驗(yàn)室中適應(yīng)性飼養(yǎng)1周。10%水合氯醛(0.3g/kg)麻醉大鼠,于大鼠雙后足墊皮下注射制備好的抗原乳劑(每只200u1),制備EAN動(dòng)物模型。2.2.2實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分組及藥物干預(yù)將21只EAN大鼠隨機(jī)分為A、B、C三組,其中將A組設(shè)為空白對照組。A組大鼠每日腹腔注射L161982溶媒(5mg/kg),B組大鼠自免疫前1天～免疫第8天(免疫階段)每日腹腔注射L161982(5mg/kg)、C組大鼠自免疫第5～16天(發(fā)病期)每日腹腔注射L161982(5mg/kg)。2.3臨床評(píng)分自免疫前1天開始每日對3組大鼠進(jìn)行體重稱量和臨床評(píng)分,直至免疫第16天。臨床評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)如下：①0分：正常;②0.5分：全尾肌張力下降：③1.0分：尾部肌肉癱,松軟拖地;④1.5分：輕度后肢無力或肌張力降低;⑤2.0分：重度后肢無力或輕度后肢癱;⑥2.5分：中度后肢癱;⑦3.0分：嚴(yán)重后肢癱;⑧4.0分：嚴(yán)重四肢癱。2.4大鼠腹腔巨噬細(xì)胞提取于免疫第16天(發(fā)病高峰期)處死3組大鼠,于無菌實(shí)驗(yàn)臺(tái)上,向大鼠腹腔注射10mlDMEM,靜置5min后,打開大鼠腹腔,待腸管變扁時(shí),用2ml無菌一次性吸管吸取腹腔灌洗液,置于離心管中。于離心機(jī)上離心后,去上清,留沉淀,制備單細(xì)胞懸液。對細(xì)胞進(jìn)行計(jì)數(shù),按照將細(xì)胞按2×106個(gè)/mL的密度接種于6孔板中,置于37℃,5%C02培養(yǎng)箱中。培養(yǎng)24h后換液,去掉未貼壁細(xì)胞,繼續(xù)培養(yǎng)至第3天。2.5流式細(xì)胞術(shù)檢測EAN大鼠腹腔巨噬細(xì)胞亞型比例3組大鼠腹腔巨噬細(xì)胞培養(yǎng)3天后,取6支流式管(編號(hào)為1、2、3、4、5、6),試管1～5每管中加入106個(gè)/mL巨噬細(xì)胞。試管6為空白對照。用PE標(biāo)記的CD86抗體、Alexa Flour647標(biāo)記的CD163抗體及抗兔CD68抗體及FITC標(biāo)記熒光二抗等不同熒光抗體組合分別標(biāo)記M1型巨噬細(xì)胞、M2型巨噬細(xì)胞及總巨噬細(xì)胞。試管1加入PE標(biāo)記的CD86抗體,試管2加入Alexa Flour647標(biāo)記的CD163抗體,試管3加入抗兔CD68抗體及FITC標(biāo)記熒光二抗,試管4加入PE標(biāo)記的CD86抗體、抗兔CD68抗體及FITC標(biāo)記熒光二抗,試管5加入Alexa Flour647標(biāo)記的CD163抗體、抗兔CD68抗體及FITC標(biāo)記熒光二抗。試管6為空白對照。充分混勻后,置于室溫暗處孵育30min后,各管加入2mLBSA進(jìn)行洗滌,1500r/min離心5min后,棄上清。每管加入400 μ LPBS重懸,經(jīng)細(xì)胞篩網(wǎng)過濾后,加入1%的多聚甲醛100μL固定,待上機(jī)檢測。用流式細(xì)胞術(shù)檢測3組大鼠兩種巨噬細(xì)胞亞群比例。2.6 ELISA檢測EAN大鼠脾單個(gè)核細(xì)胞培養(yǎng)上清細(xì)胞因子3組EAN大鼠脫頸處死后,無菌條件下摘取EAN大鼠脾臟,置于含5mlDMEM培養(yǎng)基的離心管中,將脾臟置于無菌實(shí)驗(yàn)臺(tái)上剪碎后于細(xì)胞篩上研磨脾臟碎片,收集脾單個(gè)核細(xì)胞研磨液。置于離心管中,1200 rpm/min,離心5 min后棄上清并混勻。每管加入2 ml紅細(xì)胞裂解液,于室溫下靜置5min后,待細(xì)胞懸液變?yōu)闊o色后,每管加入1ml胎牛血清終止破紅。1200 rpm/min,離心5 min后棄上清,加入2mlDMEM培養(yǎng)基并混勻。充分混勻后用細(xì)胞計(jì)數(shù)板對細(xì)胞進(jìn)行計(jì)數(shù)。將細(xì)胞按2×106個(gè)/mL的密度接種于6孔板中,置于37℃,5%CO2培養(yǎng)箱中。培養(yǎng)3天后,收集六孔板中細(xì)胞培養(yǎng)上清,置于2ml離心管中,3組大鼠單個(gè)核細(xì)胞培養(yǎng)3天后,取各組大鼠脾單個(gè)核細(xì)胞培養(yǎng)上清,用ELISA法檢測3組大鼠脾單個(gè)核細(xì)胞培養(yǎng)上清液中IL-12及IL-10的含量。2.7統(tǒng)計(jì)學(xué)分析采用SPSS19.0軟件,應(yīng)用單因素方差分析(one—factor analysis of variance, ANOVA)比較3組間差異,兩兩比較采用LSD法,結(jié)果以均值±標(biāo)準(zhǔn)差(standard deviatio, SD)表示,P0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。3.結(jié)果：3.1各組大鼠的發(fā)病情況和臨床評(píng)分自免疫后第6天至第15天,各組大鼠均發(fā)生EAN癥狀。與A組比較,B組、C組發(fā)病時(shí)間均明顯延遲(P0.05),B組大鼠發(fā)病時(shí)間較C組明顯延遲(P0.05)；與A組比較,B組、C組發(fā)病高峰期臨床評(píng)分明顯降低(P0.05);與C組比較,B組大鼠臨床評(píng)分降低明顯(P0.05)。3.2流式細(xì)胞術(shù)檢測3組大鼠巨噬細(xì)胞亞群比例A組相比,使用L161982治療的B組、C組中,CD86+細(xì)胞占腹腔灌洗細(xì)胞的百分比明顯降低(P0.05),CD86+細(xì)胞占CD68+細(xì)胞的百分比明顯降低,CD163+細(xì)胞占CD68+細(xì)胞的百分比明顯升高(P0.05)；與C組比較,B組中CD86+細(xì)胞占腹腔灌洗細(xì)胞的百分比降低更明顯(P0.05),CD86+細(xì)胞占CD68+細(xì)胞的百分比降低更明顯(P0.05),CD163+細(xì)胞占CD68+細(xì)胞的百分比升高更明顯(P0.05)。3.3 ELISA法檢測3組大鼠脾單核細(xì)胞培養(yǎng)上清IL-12、IL-10的含量與A組相比,使用L161982治療的B組、C組中,脾單核細(xì)胞培養(yǎng)上清中IL-12表達(dá)量明顯降低(P0.05),與C組相比,B組中IL-12的含量降低更明顯(P0.05)；與A組相比,B組、C組中IL-10的表達(dá)量明顯升高(P0.05),與C組相比,B組中IL-10的表達(dá)量升高更明顯(P0.05)。4.結(jié)論：4.1 L161982降低了EAN大鼠中M1型巨噬細(xì)胞占總巨噬細(xì)胞的比例,升高了M2型巨噬細(xì)胞占總巨噬細(xì)胞的比例,免疫階段作用更明顯。4.2 L161982抑制了Ml型巨噬細(xì)胞相關(guān)細(xì)胞因子IL-12的表達(dá),促進(jìn)了M2型巨噬細(xì)胞相關(guān)細(xì)胞因子IL-10的表達(dá),免疫階段作用更明顯。4.3 L161982降低了EAN大鼠臨床評(píng)分,延遲了EAN大鼠發(fā)病時(shí)間,免疫階段作用更明顯。
【關(guān)鍵詞】：L161982 實(shí)驗(yàn)性自身免疫性神經(jīng)炎 巨噬細(xì)胞 細(xì)胞因子
【學(xué)位授予單位】：山東大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R745.43
【目錄】：

• 中文摘要6-10
• ABSTRACT10-15
• 符號(hào)說明15-16
• 前言16-18
• 材料與方法18-24
• 結(jié)果24-26
• 討論26-30
• 結(jié)論30-31
• 參考文獻(xiàn)31-34
• 綜述34-43
• 參考文獻(xiàn)40-43
• 致謝43-44
• 攻讀學(xué)位期間發(fā)表的論文44-45
• 附件45

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1 ;豚鼠巨噬細(xì)胞經(jīng)P_(204)處理后的抗石英細(xì)胞毒作用[J];國外醫(yī)學(xué)參考資料(衛(wèi)生學(xué)分冊);1976年04期

2 鄧俠進(jìn);;巨噬細(xì)胞的抗癌作用[J];遵義醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);1979年02期

3 陸天才;;疾病對肺巨噬細(xì)胞的影響[J];煤礦醫(yī)學(xué);1982年01期

4 郭瑞清;祝彼得;;一種分離巨噬細(xì)胞的簡單方法[J];濱州醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);1990年02期

5 謝志堅(jiān);巨噬細(xì)胞異質(zhì)性[J];醫(yī)學(xué)綜述;2001年06期

6 饒艷;運(yùn)動(dòng)及神經(jīng)內(nèi)分泌對巨噬細(xì)胞功能的調(diào)節(jié)[J];體育與科學(xué);2002年05期

7 朱金元;;吸煙對肺巨噬細(xì)胞的影響[J];浙江醫(yī)學(xué)教育;2003年01期

8 張俊峰;過氧化物酶體增殖物激活受體與單核/巨噬細(xì)胞系[J];醫(yī)學(xué)綜述;2004年03期

9 韋錦學(xué);顧軍;;巨噬細(xì)胞的激活誘導(dǎo)死亡[J];生命科學(xué);2006年02期

10 李曉曦;郭寧;曹雪濤;;腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞促進(jìn)腫瘤生長與轉(zhuǎn)移的研究現(xiàn)狀[J];中國腫瘤生物治療雜志;2008年01期

中國重要會(huì)議論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 史玉玲;王又明;豐美福;;巨噬細(xì)胞激活作用的研究[A];中國細(xì)胞生物學(xué)學(xué)會(huì)第五次會(huì)議論文摘要匯編[C];1992年

2 吳國明;周輝;;巨噬細(xì)胞和創(chuàng)傷纖維化[A];2009年浙江省骨科學(xué)學(xué)術(shù)年會(huì)論文匯編[C];2009年

3 李奇;王海杰;;透明質(zhì)酸對于淋巴結(jié)巨噬細(xì)胞運(yùn)動(dòng)的影響[A];解剖學(xué)雜志——中國解剖學(xué)會(huì)2002年年會(huì)文摘匯編[C];2002年

4 劉革修;歐大明;劉軍花;黃紅林;廖端芳;;丙丁酚在體外能抑制巨噬細(xì)胞脂質(zhì)氧化介導(dǎo)的低密度脂蛋白氧化并調(diào)節(jié)氧化巨噬細(xì)胞的分泌功能[A];面向21世紀(jì)的科技進(jìn)步與社會(huì)經(jīng)濟(jì)發(fā)展（下冊）[C];1999年

5 葉金善;楊麗霞;郭瑞威;;環(huán)氧化酶-2/前列腺素E_2在血管緊張素Ⅱ刺激巨噬細(xì)胞表達(dá)細(xì)胞外基質(zhì)金屬蛋白酶誘導(dǎo)因子中的作用[A];第十三次全國心血管病學(xué)術(shù)會(huì)議論文集[C];2011年

6 秦帥;陳希;孔德明;;構(gòu)建由綠色熒光標(biāo)記巨噬細(xì)胞的轉(zhuǎn)基因斑馬魚系[A];貴州省中西醫(yī)結(jié)合內(nèi)分泌代謝學(xué)術(shù)會(huì)論文匯編[C];2012年

7 武劍華;徐惠綿;;腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞在胃癌中的相關(guān)研究[A];第9屆全國胃癌學(xué)術(shù)會(huì)議暨第二屆陽光長城腫瘤學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2014年

8 何軍;;血凝素樣氧化型低密度脂蛋白受體升高巨噬細(xì)胞內(nèi)膽固醇水平[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第11次心血管病學(xué)術(shù)會(huì)議論文摘要集[C];2009年

9 宋盛;周非凡;邢達(dá);;PDT誘導(dǎo)的凋亡細(xì)胞對巨噬細(xì)胞NO合成的影響[A];第七屆全國光生物學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議論文摘要集[C];2010年

10 張磊;朱建華;黃元偉;姚航平;;血管緊張素Ⅱ?qū)奘杉?xì)胞(THP-1重細(xì)胞)凝集素樣氧化低密度脂蛋白受體表達(dá)的影響[A];浙江省免疫學(xué)會(huì)第五次學(xué)術(shù)研討會(huì)論文匯編[C];2004年

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1 通訊員 李靜 記者 胡德榮;惡性腫瘤巨噬細(xì)胞未必皆“惡人”[N];健康報(bào);2014年

2 蘭克;以嘗試用巨噬細(xì)胞治癱瘓[N];科技日報(bào);2000年

3 薛佳;免疫系統(tǒng)——人體的“衛(wèi)士”[N];保健時(shí)報(bào);2009年

4 記者 胡德榮;鐵泵蛋白“維穩(wěn)”鐵代謝作用首次闡明[N];健康報(bào);2011年

5 侯嘉 何新鄉(xiāng);硒的神奇功能[N];中國食品質(zhì)量報(bào);2003年

6 唐穎 倪兵 陳代杰;巨噬細(xì)胞泡沫化抑制劑研究快步進(jìn)行[N];中國醫(yī)藥報(bào);2006年

7 劉元江;新發(fā)現(xiàn)解釋腫瘤為何易成“漏網(wǎng)之魚”[N];醫(yī)藥經(jīng)濟(jì)報(bào);2007年

8 本報(bào)記者 侯嘉 通訊員 何新鄉(xiāng);今天你補(bǔ)硒了嗎[N];醫(yī)藥經(jīng)濟(jì)報(bào);2003年

9 左志剛;升血小板藥使用注意[N];醫(yī)藥養(yǎng)生保健報(bào);2007年

10 記者 許琦敏;“鐵泵”蛋白幫助回收鐵元素[N];文匯報(bào);2011年

中國博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 周赤燕;巨噬細(xì)胞MsrA對動(dòng)脈粥樣硬化的干預(yù)研究[D];武漢大學(xué);2013年

2 章桂忠;TIPE2蛋白調(diào)控細(xì)胞增殖和炎癥的機(jī)制研究[D];山東大學(xué);2015年

3 張瑜;DKK1抑制巨噬細(xì)胞內(nèi)脂質(zhì)沉積及其相關(guān)分子機(jī)制[D];山東大學(xué);2015年

4 孟濤;異丙酚對心臟收縮功能的抑制作用及其對巨噬細(xì)胞分泌功能調(diào)節(jié)的機(jī)制研究[D];山東大學(xué);2015年

5 周興;基于酵母微囊構(gòu)建新型口服巨噬細(xì)胞靶向遞送系統(tǒng)的研究[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2015年

6 蔣興偉;Tim-3對巨噬細(xì)胞極化的調(diào)控機(jī)制研究[D];中國人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院;2015年

7 劉伯玉;清道夫受體A介導(dǎo)小鼠巨噬細(xì)胞吞噬鉤端螺旋體研究[D];上海交通大學(xué);2013年

8 楊紹俊;miRNA-155介導(dǎo)ESAT-6誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞凋亡的分子機(jī)制及其在結(jié)核診斷中的作用[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2015年

9 翟光耀;單核/巨噬細(xì)胞Ly6C~(low)亞群在心肌梗死后瘢痕形成期的抗炎特性研究[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2014年

10 韓露;TRB3介導(dǎo)的脂肪組織巨噬細(xì)胞極化與糖尿病冠狀動(dòng)脈病變關(guān)系的研究[D];山東大學(xué);2015年

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1 馬春梅;AP0E~(-/-)小鼠TLR9介導(dǎo)巨噬細(xì)胞極化效應(yīng)對動(dòng)脈粥樣硬化作用的研究[D];福建醫(yī)科大學(xué);2015年

2 張譯丹;鹽皮質(zhì)激素受體拮抗劑調(diào)控巨噬細(xì)胞表型對實(shí)驗(yàn)性矽肺的作用[D];河北醫(yī)科大學(xué);2015年

3 盧文冉;HCV core蛋白作用的巨噬細(xì)胞培養(yǎng)上清對肝細(xì)胞生物學(xué)性狀的影響[D];河北醫(yī)科大學(xué);2015年

4 李文建;載脂蛋白E影響巨噬細(xì)胞因子表達(dá)及分型的機(jī)制研究[D];河北醫(yī)科大學(xué);2015年

5 曹爽;高糖對巨噬細(xì)胞TLR4信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的調(diào)節(jié)作用[D];河北醫(yī)科大學(xué);2015年

6 寧程程;腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞在子宮內(nèi)膜癌雌激素敏感性中的作用及機(jī)制研究[D];復(fù)旦大學(xué);2014年

7 高龍;PLD4在腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞抑制結(jié)腸癌增殖中的作用研究[D];成都醫(yī)學(xué)院;2015年

8 任虹;感染期子宮頸癌U14細(xì)胞荷瘤小鼠抑制巨噬細(xì)胞CCL5分泌的機(jī)制研究[D];河北醫(yī)科大學(xué);2015年

9 李美玲;雙酚A對小鼠腹腔巨噬細(xì)胞極化影響的體外研究[D];安徽醫(yī)科大學(xué);2015年

10 劉瓊;黃芪多糖影響巨噬細(xì)胞向脂肪細(xì)胞趨化的作用及機(jī)制研究[D];新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院;2015年

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本文編號(hào)：258433