發(fā)布時(shí)間：2019-12-06 01:55

【摘要】：膽汁淤積是由膽汁生成障礙或/和膽汁流動障礙所致的一組疾病共同的臨床癥狀,常見的病因包括膽道結(jié)石、肝膽惡性腫瘤、妊娠期肝內(nèi)膽汁淤積、進(jìn)行性家族遺傳性肝內(nèi)膽汁淤積癥等。由于膽汁排出障礙,導(dǎo)致大量膽汁成分蓄積在肝細(xì)胞中,引起肝細(xì)胞氧化應(yīng)激、炎癥、凋亡和纖維化,如不進(jìn)行有效干預(yù),最終將演化為肝硬化。熊去氧膽酸是目前治療膽汁淤積的唯一有效藥物,但是對于原發(fā)性硬化性膽管炎、原發(fā)性膽汁性肝硬化等特殊病例,仍缺乏有效的治療手段。因此,急需開發(fā)一種高效低毒的膽汁淤積性肝疾病的有效藥物。穿心蓮內(nèi)酯是中藥穿心蓮的主要活性成分,具有抗菌、消炎、抗腫瘤、抗血小板聚集、抗心肌缺血、保護(hù)心腦血管、降血糖、免疫調(diào)節(jié)、保肝利膽等多種藥理活性。臨床上,相關(guān)制劑用于流行性感冒和腫瘤等疾病的治療,在中國以及亞洲國家應(yīng)用廣泛。近年來,研究發(fā)現(xiàn)穿心蓮內(nèi)酯類化合物對化學(xué)毒劑和藥物誘導(dǎo)的肝毒性具有顯著的保護(hù)作用。但是,穿心蓮內(nèi)酯對ANIT誘導(dǎo)的大鼠膽汁淤積和肝損傷的作用及其相關(guān)機(jī)制尚未得到充分研究。第一部分:穿心蓮內(nèi)酯對ANIT誘導(dǎo)的大鼠肝損傷和膽汁淤積的保護(hù)作用目的:探討穿心蓮內(nèi)酯對ANIT誘導(dǎo)的大鼠膽汁淤積和肝損傷的影響。方法:將36只健康成年雄性SD大鼠(體重180-220 g)隨機(jī)分為以下6組:(1)空白溶劑對照組;(2)穿心蓮內(nèi)酯正常給藥組(200 mg/kg);(3)ANIT組(50 mg/kg);(4)低劑量穿心蓮內(nèi)酯(50 mg/kg)+ANIT組(50 mg/kg);(5)中劑量穿心蓮內(nèi)酯(100 mg/kg)+ANIT組(50 mg/kg);(6)高劑量穿心蓮內(nèi)酯(200 mg/kg)+ANIT組(50 mg/kg)。穿心蓮內(nèi)酯混懸于0.5%CMC-Na中,以10 ml/kg體積灌胃給藥,持續(xù)4天,每天上午一次。ANIT溶于食用橄欖油中口服灌胃給藥,于第二天中午給予第3/4/5/6組大鼠50 mg/kg。第1組同時(shí)灌胃給予同容量溶媒。ANIT灌胃后48h,麻醉大鼠并腹主動脈取血,分離肝臟組織標(biāo)本。應(yīng)用試劑盒監(jiān)測血清或肝組織中ALT、AST、ALP、γ-GGT、總膽汁酸和總膽紅素等肝功、膽汁淤積標(biāo)記物的含量水平。應(yīng)用HE染色評價(jià)肝組織病理改變。結(jié)果:ANIT誘導(dǎo)大鼠血清中ALT、AST、ALP、γ-GGT、總膽汁酸和總膽紅素等生化指標(biāo)顯著升高,肝臟組織切片呈現(xiàn)病理樣改變。應(yīng)用穿心蓮內(nèi)酯預(yù)處理ANIT誘導(dǎo)的膽汁淤積大鼠,顯著逆轉(zhuǎn)大鼠肝功受損和膽汁淤積程度,肝組織病理改變減輕,表現(xiàn)出劑量依賴的肝保護(hù)作用。結(jié)論:穿心蓮內(nèi)酯對ANIT所致的大鼠肝損傷具有保護(hù)作用,減輕膽汁淤積程度。第二部分:穿心蓮內(nèi)酯通過抗炎和抗氧化活性逆轉(zhuǎn)ANIT所致大鼠膽汁淤積和肝損傷目的:探討穿心蓮內(nèi)酯逆轉(zhuǎn)ANIT誘導(dǎo)的大鼠膽汁淤積和肝損傷的作用機(jī)制。方法:將36只健康成年雄性SD大鼠(體重180-220 g)隨機(jī)分為以下6組:(1)空白溶劑對照組;(2)穿心蓮內(nèi)酯正常給藥組(200 mg/kg);(3)ANIT組(50 mg/kg);(4)低劑量穿心蓮內(nèi)酯(50 mg/kg)+ANIT組(50 mg/kg);(5)中劑量穿心蓮內(nèi)酯(100 mg/kg)+ANIT組(50 mg/kg);(6)高劑量穿心蓮內(nèi)酯(200 mg/kg)+ANIT組(50 mg/kg)。穿心蓮內(nèi)酯混懸于0.5%CMC-Na中,以10 ml/kg體積灌胃給藥,持續(xù)4天,每天上午一次。ANIT溶于食用橄欖油中口服灌胃給藥,于第二天中午給予第3/4/5/6組大鼠50 mg/kg。第1組同時(shí)灌胃給予同容量溶媒。ANIT灌胃后48h,麻醉大鼠并腹主動脈取血,分離肝臟組織標(biāo)本。應(yīng)用試劑盒監(jiān)測血清或肝組織中IL-6、TNF-α、MDA、SOD、GSH和GSH-PX等肝功、炎癥和氧化標(biāo)記物的含量水平。Western blot檢測NF-κB、COX-2、SIRT1和Nrf2的表達(dá)水平。SIRT1 m RNA表達(dá)水平由real time PCR測定。結(jié)果:ANIT誘導(dǎo)大鼠血清中IL-6和TNF-α水平升高,NF-κB/COX-2表達(dá)上調(diào)。而且,ANIT升高大鼠血清中MDA水平,SOD、GSH和GSH-PX水平下調(diào)。穿心蓮內(nèi)酯劑量依賴的逆轉(zhuǎn)ANIT所致血清炎癥因子水平上調(diào)和NF-κB/COX-2通路激活,抑制炎癥反應(yīng)。最后,穿心蓮內(nèi)酯劑量依賴的逆轉(zhuǎn)ANIT所致的MDA含量升高、GSH含量下降、以及SOD和GSH-Px活性下調(diào),作用機(jī)制可能涉及上調(diào)大鼠肝臟中SIRT1和Nrf2的表達(dá)水平。結(jié)論:穿心蓮內(nèi)酯通過抗炎和抗氧化機(jī)制,對ANIT所致的大鼠肝損傷具有保護(hù)作用,減輕膽汁淤積程度。穿心蓮內(nèi)酯可作為治療膽汁淤積性肝疾病的潛在藥物加以開發(fā)和利用。
【圖文】：

取大鼠血清進(jìn)行生化指標(biāo)測定。AND，穿心蓮內(nèi)酯。數(shù)據(jù)為 mean ±SD；n=6。p < 0.05 versus 正常對照組; # p < 0.05 versus ANIT 對照組。3.2 穿心蓮內(nèi)酯和 ANIT 處理對大鼠肝組織形態(tài)的影響為了更加直觀的考察穿心蓮內(nèi)酯對 ANIT 所致大鼠肝損傷和膽汁淤積的影響，我們對穿心蓮內(nèi)酯和 ANIT 處理后大鼠肝組織形態(tài)進(jìn)行了 HE 染色觀察。光鏡下，空白對照組肝小葉結(jié)構(gòu)正常，肝細(xì)胞未見顯著變化，匯管區(qū)、肝小葉、中央靜脈結(jié)構(gòu)清晰；ANIT 模型組失去正常的肝臟組織形態(tài)，呈顯著病理損傷，表現(xiàn)為肝細(xì)胞腫脹、胞漿著色變淺、肝竇擴(kuò)張且有明顯的瘀血，伴炎癥細(xì)胞浸潤及壞死；穿心蓮內(nèi)酯組病理損傷與模型組比較明顯改善，表現(xiàn)為壞死面積明顯縮小或不明顯，肝細(xì)胞腫脹程度減輕，胞核小，肝小葉邊界明顯，炎性細(xì)胞浸潤顯著減少，肝血竇和中央靜脈間有少量瘀血（圖 2）。正常大鼠給予穿心蓮內(nèi)酯不影響肝組織形態(tài)。

圖 3 穿心蓮內(nèi)酯和 ANIT 對大鼠炎癥相關(guān)因子表達(dá)水平的影響。穿心蓮內(nèi)酯劑量依賴的逆轉(zhuǎn) ANIT 誘導(dǎo)的大鼠血清 IL-6（A）和 TNF-α（B）、肝組織 NF-κB 和 COX-2（C 和 D）表達(dá)上調(diào)。大鼠灌胃不同劑量穿心蓮內(nèi)酯（50、100、200 mg/kg）連續(xù)四天，第二天給予 ANIT（50 mg/kg），對照組灌胃等體積溶劑（0.5% CMC-Na 溶液和食用橄欖油）。ANIT 灌胃后 48h，，取大鼠血清和肝臟進(jìn)行細(xì)胞因子測定和 western blot 實(shí)驗(yàn)。AND，穿心蓮內(nèi)酯。數(shù)據(jù)為 mean±SD；n=6。* p < 0.05 versus 正常對照組; # p < 0.05 versus ANIT 對照組。3.2 穿心蓮內(nèi)酯的抗氧化活性為了進(jìn)一步揭示穿心蓮內(nèi)酯保護(hù) ANIT 所致大鼠肝損傷的作用機(jī)制，我們考察了穿心蓮內(nèi)酯對 ANIT 所致氧化應(yīng)激的影響。MDA 是生物體內(nèi)自由基作用于脂質(zhì)發(fā)生過氧化反應(yīng)的終產(chǎn)物，SOD 和 GSH-PX 是機(jī)體清除自由基抗氧化的重要代謝酶，GSH 也是機(jī)體抗氧化的內(nèi)源性物質(zhì)[29]。當(dāng)機(jī)體出現(xiàn)炎癥等刺激時(shí)，可發(fā)生抗氧化酶及抗氧劑的缺失，導(dǎo)致氧化劑增多，產(chǎn)生氧化應(yīng)激和脂質(zhì)過氧化
【學(xué)位授予單位】：大連醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R285.5

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 朱平生;鄭貴珍;龍愛華;;ANIT誘發(fā)大鼠肝內(nèi)膽汁淤積的肝腎功能動態(tài)變化研究[J];醫(yī)藥論壇雜志;2010年14期

2 翟世康;;細(xì)胞色素P-450和異硫氰酸-1-萘酯(ANIT)中毒[J];國外醫(yī)學(xué)參考資料.藥學(xué)分冊;1976年03期

3 曹洪欣;孫暉;姜新剛;呂海濤;張廣美;王喜軍;孫文軍;吳澤明;王萍;劉蓮;周玨;;Comparative Study on the Protective Effects of Yinchenhao Decoction(茵陳蒿湯) against Liver Injury Induced byα-Naphthylisothiocyanate and Carbon Tetrachloride[J];Chinese Journal of Integrative Medicine;2009年03期

4 王喜軍;王萍;孫暉;劉蓮;吳澤明;呂海濤;孫文軍;;茵陳蒿湯對ANIT誘導(dǎo)的急性肝損傷的保護(hù)作用[J];中醫(yī)藥學(xué)報(bào);2007年04期

5 朱平生;龍愛華;王兵;;ANIT誘發(fā)大鼠肝內(nèi)膽汁淤積的動態(tài)病理變化觀察[J];中國實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志;2011年03期

6 張照蘭,郭勝,郭勇義;退黃合劑對ANIT誘發(fā)肝內(nèi)膽汁淤積大鼠的影響[J];中國中醫(yī)藥信息雜志;2004年12期

7 魏思思;趙艷玲;江鳳娟;邢小燕;朱云;賈雷;程丹紅;李瑞生;肖小河;;重用赤芍治療ANIT誘導(dǎo)大鼠急性淤膽型肝炎的研究[J];中國實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志;2012年12期

8 劉慶增;;中藥對ANIT肝損害的保護(hù)作用[J];國外醫(yī)藥(植物藥分冊);1992年02期

9 詹雪晶;蔡霈;劉秀芳;蔡光明;劉榮華;劉峰群;張卓勇;;小葉黑柴胡莖葉總黃酮對ANIT所致肝內(nèi)膽汁淤積大鼠的影響[J];中國藥理學(xué)通報(bào);2010年06期

10 鐘相根;鄧秀蘭;張曉晶;張宇忠;任麗薇;賈旭;劉燕南;李澎濤;;痰熱清注射液對ANIT誘導(dǎo)大鼠急性肝損傷的防護(hù)作用[J];中成藥;2011年05期

相關(guān)會議論文 前3條

1 Quanfu Zheng;Yanling Zhao;Guangde Zhou;Jiabo Wang;Lei Jia;Ping Zhang;Ruisheng Li;Limei Shan;Bing Liu;Shijing Liu;Xiaohe Xiao;;Paeoniflorin Protects Against ANIT-Induced Cholestasis by Ameliorating Oxidative Stress in Rats[A];中國醫(yī)藥教育論壇-中國醫(yī)藥教育協(xié)會第三屆三次理事大會暨學(xué)術(shù)年會論文專輯[C];2013年

2 竇志華;羅琳;章幼奕;顧錦華;吳鋒;施忠;;茵陳蒿湯醇提與水提部位對ANIT所致小鼠黃疸模型的藥效比較[A];全國第2屆中西醫(yī)結(jié)合傳染病學(xué)術(shù)會議暨國家中醫(yī)藥管理局第1屆傳染病協(xié)作組會議論文匯編[C];2008年

3 于珊;徐雪鈺;李昆峰;梁光義;黃正明;;苯丙氨酸二肽類化合物Y101對ANIT致小鼠肝損傷的保護(hù)作用[A];中國成人醫(yī)藥教育論壇[2010（3）][C];2010年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前2條

1 陳浩;京尼平苷酸基于FXR抗ANIT誘導(dǎo)膽汁淤積大鼠保肝利膽機(jī)制研究[D];廣州中醫(yī)藥大學(xué);2016年

2 王雷;穿心蓮內(nèi)酯對ANIT誘導(dǎo)的大鼠肝損傷的保護(hù)作用及其機(jī)制研究[D];大連醫(yī)科大學(xué);2016年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前3條

1 楊梅雄;IL-17及相關(guān)細(xì)胞因子在ANIT致膽汁淤積性肝纖維化大鼠模型中的表達(dá)及意義[D];廣西醫(yī)科大學(xué);2016年

2 吳一中;地塞米松對ANIT誘導(dǎo)的膽汁淤積大鼠肝膽系統(tǒng)AQP1表達(dá)的影響[D];南華大學(xué);2008年

3 方晶;不同劑量赤芍對ANIT誘導(dǎo)的肝內(nèi)膽汁淤積大鼠模型肝細(xì)胞膜蛋白NTCP、BSEP的影響[D];南京中醫(yī)藥大學(xué);2014年

本文編號：2570204