【摘要】：目的:心血管疾病是導(dǎo)致中老年死亡的常見原因之一，而心力衰竭是心血管疾病導(dǎo)致死亡的主要原因。在最近幾年有關(guān)microRNA-214(miR-214)的研究中，顯示出了其在心血管中的重要作用。大量的研究已經(jīng)展現(xiàn)出在急性心肌梗死中miR-214表達的相對水平是有區(qū)別的。 我們已經(jīng)研究了miR-214在大鼠的急性心肌梗死模型中通過磷酸酶-張力蛋白同源物途徑發(fā)揮調(diào)控左室重塑的作用。此次試驗，我們將繼續(xù)深入的研究miR-214在大鼠模型中急性心肌梗死后心臟纖維化的具體作用：通過結(jié)扎大鼠心臟左冠狀動脈的前降支制作急性心肌梗死的模型，心腔注射miR-214的前體及抑制劑來調(diào)節(jié)miR-214的表達，實時定量PCR驗證表達情況，觀測不同的miR-214表達水平下膠原相關(guān)指標(biāo)的變化情況。 方法:一心肌梗死大鼠模型的制備及miR-214的調(diào)節(jié) 成年大鼠麻醉后，氣管插管接小動物呼吸機輔助呼吸，被皮后逐層開胸，暴露心臟于胸腔外，阻斷心臟血流約6秒，向心腔內(nèi)緩慢注射藥物后，然后結(jié)扎左冠狀動脈前降支。通過下腔靜脈注射依文思藍的方法證實結(jié)扎成功：梗死區(qū)的心肌組織是蒼白色的，非梗死區(qū)的心肌則被染成藍色。將80只大鼠隨機分成4組：假手術(shù)組（穿過線后未做結(jié)扎n=20），對照組（結(jié)扎前心腔內(nèi)注射PBS，n=20），miR-214上調(diào)組（結(jié)扎并心腔內(nèi)注射miR-214前體，n=20），miR-214下調(diào)組（結(jié)扎并心腔內(nèi)注射miR-214抑制劑，n=20)。于手術(shù)后2周和6周取材，觀察比較這兩個時間段各指標(biāo)的不同變化。二心重體重比和組織學(xué)分析 大鼠稱重后通過腹腔內(nèi)注射水合氯醛的方法處死，取下心臟，稱重后放入10%福爾馬林中固定。固定好的樣本石蠟包埋，切成5um的厚度放于載玻片上進行馬松染色。三PCR和western 取1mm*1mm的梗死邊緣區(qū)的小塊組織，放入EP管中，檢測miR-214及mmp1的mRNA的表達及膠原I，膠原III，mmp1和tgf-β1蛋白的表達。 結(jié)果： 一心重體重比 稱量每只大鼠的體重（g）和心臟重量（mg）在取材時，計算得出的在2周和6周各組的心重體重比：對照組和前體組，抑制劑組和前體組具有顯著的統(tǒng)計學(xué)差異。且前一組明顯高于后面的一組。這一結(jié)果間接表明心肌組織中miR-214的表達上調(diào)能夠抑制急性心肌梗死后的心肌纖維化。與此同時，如果miR-214的表達下調(diào)則有利于心肌纖維化的發(fā)生。 二馬松染色 選取心肌梗死后6周的大鼠左心室心肌進行馬松染色。結(jié)果顯示：對照組與前體組對比有更多的纖維組織增生，而抑制劑組的膠原增生最明顯。 三實時定量PCR 通過RT-PCR驗證不同組別之間miR-214的表達水平。在不同的時間段，與前體組相比，對照組miR-214的表達明顯增加。相對于對照組和前體組，抑制劑組表達的miR-214最少。并且各組之間具有明顯的統(tǒng)計學(xué)差異。隨著miR-214表達水平的變化，mmp1呈現(xiàn)一個相反的趨勢。對照組與前體組的表達具有明顯差異，而抑制劑組mmp-1的表達顯著高于前體組。 四western Western的結(jié)果顯示除了不同的分組中各項指標(biāo)的不同表達。在miR-214表達水平高的分組（前體組），膠原I，，膠原III，mmp1和tgf-β1的蛋白表達是降低的。在2周和6周時，假手術(shù)組、對照組、抑制劑組的表達與前體組相比具有顯著差異。在2周時，膠原I/III在各組間沒有明顯差異，而6周時差異明顯�？偟膩碚f，在miR-214的表達上調(diào)組，促進纖維化的各項指標(biāo)均高于單純結(jié)扎左冠狀動脈前降支注射PBS的對照組和下調(diào)組。假手術(shù)組的表達是最低的。結(jié)果表明miR-214能夠影響纖維化相關(guān)蛋白的表達并且減少心肌的纖維化。 結(jié)論： 1miR-214對急性心肌梗死心肌纖維化所致的心臟重塑具有保護作用。其表達水平上調(diào)時，心重/體重以及膠原的生成具有明顯減輕。 2miR-214能夠通過影響mmp1，膠原I，膠原III和tgf-β1的基因及蛋白表達而作用于心臟的膠原形成，抑制其重塑。
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號】：R542.22

【參考文獻】

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1 ;MicroRNA: A matter of life or death[J];World Journal of Biological Chemistry;2010年04期

本文編號：2549380