【摘要】：【目的】 采用二丁基二氯化錫（Dibutyltin dichloride,DBTC）尾靜脈注射聯(lián)合10%乙醇飲用建立小鼠慢性胰腺炎的模型，觀察胰腺纖維化進(jìn)展中MAPK信號(hào)通路的變化及大柴胡湯對(duì)其干預(yù)效應(yīng)，以探討大柴胡湯防治慢性胰腺炎胰腺纖維化的作用機(jī)制。 【方法】 隨機(jī)將健康雄性昆明小鼠分為3組（n=90）：空白組（Control，Con組）、慢性胰腺炎(Chronic Pancreatitis，CP)模型組、大柴胡湯（Entrapementscattered DaChaiHu）治療組。給予小鼠一次性尾靜脈注射DBTC（8mg/kg），聯(lián)合10%乙醇飲用誘模，于造模后三天隨機(jī)將小鼠分為模型組和大柴胡湯治療組，模型組正常飲食，10%乙醇替代正常飲水，治療組給予大柴胡湯（0.5g生藥/ml，6g/kg/d））灌胃治療�？瞻捉M不做任何處理，常規(guī)攝食飲水作為對(duì)照。于造模及治療第1、2、4、8周四個(gè)時(shí)間點(diǎn)分別麻醉處死動(dòng)物，下腔靜脈取血，3000rpm離心15分鐘留取血清，按試劑盒方法檢測(cè)血清淀粉酶（Amylase, AMS）和透明質(zhì)酸（Hyaluronic acid，HA）含量。留取胰腺組織，甲醛固定、脫水透明、石蠟包埋、切片，HE染色及膠原纖維（Masson）染色觀察其組織病理學(xué)改變；胰腺組織勻漿提取RNA及總蛋白，RT-PCR檢測(cè)基質(zhì)金屬蛋白酶(matrixmetalloproteinase, MMP)及其抑制物金屬蛋白酶組織抑制劑(tissue inhibitorof metalloproteinase, TIMP)的含量；Western-blot檢測(cè)I型膠原（CollagenI，colA1）、磷酸化MAPK（P-ERK、P-JNK、P-p38）的指標(biāo)變化。 【結(jié)果】 1.大柴胡湯對(duì)慢性胰腺炎小鼠胰腺組織病理學(xué)改變的影響 HE染色顯示： DBTC尾靜脈注射1w可見胰腺明顯呈急性炎癥的表現(xiàn)；2w胰腺小葉水腫，可見腺泡細(xì)胞點(diǎn)片狀壞死及炎細(xì)胞浸潤(rùn)；隨著造模時(shí)間的延長(zhǎng)，，胰腺結(jié)構(gòu)破壞更加明顯，至4w可見纖維組織沉積，8w時(shí)胰腺纖維化明顯，取代了正常的胰腺腺泡細(xì)胞及胰島。經(jīng)大柴胡湯灌胃治療后，與同時(shí)間點(diǎn)模型組相比，胰腺損傷明顯減輕；至8w僅有少量纖維組織沉積。 膠原纖維（Masson）染色顯示DBTC尾靜脈注射后現(xiàn)少量藍(lán)染的膠原纖維在間質(zhì)中出現(xiàn)；隨著造模時(shí)間的延長(zhǎng)纖維化明顯增加，至8w可見大量膠原纖維廣泛增生，胰腺組織被纖維嚴(yán)重分割。大柴胡湯灌胃治療后各時(shí)間點(diǎn)胰腺纖維化的程度明顯減輕。 2．大柴胡湯對(duì)慢性胰腺炎小鼠血清AMS、HA、胰腺M(fèi)MP/TIMP及MAPK通路的影響 DBTC尾靜脈注射聯(lián)合飲用乙醇后，血清AMS的活性明顯升高；造模后2w、4w，血清AMS維持在較高水平，8w血清AMS水平顯著降低，與對(duì)照組相比差異有顯著性（P0.01）；大柴胡湯治療組1w、2w、4w血清AMS活性明顯下降,與相應(yīng)時(shí)間點(diǎn)模型組相比有顯著性差異(P0.01)，而8w血清淀粉酶活性沒有出現(xiàn)明顯下降，與模型組相比有所升高，差異存在顯著性（P0.01）。DBTC尾靜脈注射聯(lián)合飲用乙醇2周、4周后，血清HA明顯升高,8周后進(jìn)一步升高，與對(duì)照組相比有顯著性差異（P0.01）；大柴胡湯治療組血清HA明顯降低,與相應(yīng)時(shí)間點(diǎn)模型組比較存在顯著性差異(P0.01)。 DBTC尾靜脈注射聯(lián)合飲用乙醇后，模型組胰腺組織MMP-1mRNA表達(dá)持續(xù)降低，與正常組相比存在差異；經(jīng)大柴胡湯灌胃治療后小鼠胰腺M(fèi)MP-1表達(dá)明顯增多，與同時(shí)間點(diǎn)模型組比較有明顯差異(P0.05)。而胰腺組織TIMP-1mRNA表達(dá)在造模2w時(shí)明顯升高，4w、8w表達(dá)有所下降，但仍處于較高水平。大柴胡湯灌胃治療后，2w、4w胰腺組織TIMP-1mRNA的表達(dá)降低，與模型組比較，具有明顯差異（P0.05），但隨著給藥時(shí)間的延長(zhǎng)，TIMP-1mRNA維持在一個(gè)水平，與模型8w組比較無顯著性差異。 空白組小鼠胰腺未見Ⅰ型膠原的表達(dá)；CP模型組各時(shí)間點(diǎn)胰腺組織中colA1的表達(dá)明顯增強(qiáng)；4w表達(dá)最明顯。給予大柴胡湯灌胃治療后胰腺組織colA1的表達(dá)明顯少于模型組。 模型組胰腺組織中P-ERK、P-JNK、P-P38的活性表達(dá)均有不同程度增強(qiáng)；其中P-ERK表達(dá)增強(qiáng)最明顯，隨造模時(shí)間的延長(zhǎng)，表達(dá)進(jìn)一步增強(qiáng)。而大柴胡湯治療組各時(shí)間點(diǎn)P-ERK表達(dá)明顯減少。P-JNK在造模后1w表達(dá)明顯增強(qiáng)，2w時(shí)表達(dá)水平下降有所減弱，但4w、8w時(shí)表達(dá)則持續(xù)增強(qiáng)。大柴胡湯灌胃治療后的小鼠P-JNK表達(dá)減少，但在治療2w時(shí)P-JNK出現(xiàn)逆轉(zhuǎn)趨勢(shì)，表達(dá)有所增加，4w、8w明顯減少。P-p38在造模1w時(shí)表達(dá)增多最為明顯，2w及4w表達(dá)有所降低，但8w時(shí)表達(dá)又處于較高水平。而治療組在1w、2w、4w時(shí)P-p38的表達(dá)沒有明顯抑制；但是治療8w時(shí)P-p38的表達(dá)明顯降低，與模型組比較差異存在顯著性。 【結(jié)論】 1.采用尾靜脈注射DBTC聯(lián)合乙醇飲用可以建立小鼠CP模型， MAPK信號(hào)通路參與胰腺纖維化，是慢性胰腺炎的治療靶點(diǎn)之一； 2.大柴胡湯能有效防治胰腺纖維化，其分子機(jī)制與調(diào)控MAPK信號(hào)通路有關(guān)。
【圖文】：

結(jié)果 1 不同時(shí)間點(diǎn)胰腺組織病理學(xué)的變化 如圖1所示，HE結(jié)果顯示正常小鼠胰腺小葉結(jié)構(gòu)排列整齊，未見明顯病變；尾靜脈注射DBTC1天后，胰腺即有急性炎癥改變。DBTC尾靜脈注射1w可見胰腺間質(zhì)水腫充血，腺泡細(xì)胞腫脹，炎細(xì)胞浸潤(rùn)主要為中性粒細(xì)胞及單核細(xì)胞，明顯呈急性胰腺炎表現(xiàn)；CP2w組胰腺實(shí)質(zhì)腺泡呈現(xiàn)多處不同程度的片狀壞死，炎性細(xì)胞浸潤(rùn)有所增多，可有粘液及組織碎片在導(dǎo)管內(nèi)沉積，腺泡可見殘留的壞死組織。與2w組比較，造模后4周胰腺出現(xiàn)典型的不規(guī)則纖維化；部分胰腺組織結(jié)構(gòu)破壞

大柴胡湯灌胃治療后，與同時(shí)間點(diǎn)模型組輕，結(jié)構(gòu)有所恢復(fù)，間質(zhì)中仍可見少量炎為減輕，纖維組織明顯減少；8w 可見胰腺組織沉積量明顯少于模型組。H&E staining ×100 造模組不同時(shí)間點(diǎn)胰腺組織病理學(xué)變化
【學(xué)位授予單位】：陜西中醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號(hào)】：R259

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2542971