【摘要】：目的 探討半夏瀉心湯對(duì)糖尿病(diabetes mellitus, DM)大鼠Cajal間質(zhì)細(xì)胞(interstitialcells of Cajal, ICC)、腸神經(jīng)系統(tǒng)（Enteric nervous system，ENS）以及胱硫醚-β-合成酶(cystathionine-β-synthase, CBS)的影響及其可能的作用機(jī)制。 方法 1.糖尿病大鼠模型誘導(dǎo)將60只健康雄性SD大鼠設(shè)為正常對(duì)照組、糖尿病模型組（DM模型組）、半夏瀉心湯組（中藥組）和多潘立酮組（西藥組）。除正常對(duì)照組外，所有大鼠行一次性腹腔注射(ip)鏈脲佐菌素(STZ，55mg/kg)誘導(dǎo)糖尿病大鼠模型。所有糖尿病大鼠飼養(yǎng)6周后再選取成功模型。 2.干預(yù)方法中藥組每天給予半夏瀉心湯[5.4g/(kg.d)]灌胃，西藥組每天給予多潘立酮[5mg/(kg.d)]灌胃，DM模型組及正常對(duì)照組每天給予等量生理鹽水，每天1次，持續(xù)灌胃8周。 3.一般情況誘導(dǎo)糖尿病模型成功后觀察大鼠的飲食、飲水、糞便、毛色及精神狀況，每周測(cè)體重、檢測(cè)鼠尾末端血糖。 4.胃殘留率、小腸推進(jìn)率測(cè)定干預(yù)8周后禁食12小時(shí)，予預(yù)先調(diào)制的黑色半固體營養(yǎng)糊(1mL/100g)灌胃。30分鐘后注射10％水合氯醛麻醉開腹，快速結(jié)扎幽門和賁門后取出胃，結(jié)扎幽門和回盲部，無張力下分離腸系膜。胃殘留率（%）=(胃總重-胃凈重)／糊重×100％。測(cè)量從幽門至回盲部的總長度作為小腸總長度，從幽門至營養(yǎng)糊黑染所在的距離作為小腸推進(jìn)長度。小腸推進(jìn)率（%）=營養(yǎng)糊推進(jìn)距離(cm)／小腸全長(cm)×100％。 5.免疫組化SP法檢測(cè)胃竇組織c-kit、SCF；空腸組織c-kit、SCF、SYP、PGP9.5、SP、CBS表達(dá)的變化將四組實(shí)驗(yàn)大鼠胃竇、空腸組織標(biāo)本的石蠟切片通過免疫組化SP法、圖像分析觀察胃竇ICC及腸神經(jīng)叢、CBS陽性細(xì)胞表達(dá)的分布及變化。 6.Western blot檢測(cè)空腸組織c-kit、SCF、CBS蛋白的表達(dá)分別將四組實(shí)驗(yàn)大鼠空腸組織標(biāo)本提取蛋白后行免疫印跡檢測(cè)，通過灰度值對(duì)比檢測(cè)蛋白表達(dá)的變化情況。 結(jié)果 1.一般情況與正常對(duì)照組比較，DM模型組體重減輕，血糖及胃殘留率升高、小腸推進(jìn)率下降，與DM模型組比較，兩個(gè)用藥組多飲、多食及多尿癥狀減輕，精神狀態(tài)好轉(zhuǎn)，體重明顯增加(P0.05)，胃殘留率降低(P0.05)，小腸推進(jìn)率增加(P0.05)，，中藥組血糖降低較DM模型組降低(P0.05)。 2.各組大鼠胃竇與空腸組織c-kit與SCF的免疫組化結(jié)果與正常對(duì)照組比較，DM模型組大鼠胃竇、空腸c-kit及SCF平均光密度值顯著降低(P0.05)，與模型組比較，兩個(gè)用藥組胃竇及空腸c-kit及SCF平均光密度值明顯增加(P0.05)，且中藥組胃竇c-kit平均光密度高于西藥組(P0.05)。 3.各組大鼠空腸組織CBS的免疫組化結(jié)果與正常對(duì)照組相比，糖尿病大鼠空腸CBS光密度值升高(P0.05)，兩個(gè)用藥組較DM模型組CBS光密度值降低(P0.05)。中藥組與西藥組之間CBS光密度值無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05)。 4.各組大鼠空腸組織SYP、PGP9.5、SP的免疫組化結(jié)果DM模型組SYP、PGP9.5、SP平均陽性產(chǎn)物面積和吸光度值較正常對(duì)照組明顯減少(P0.05),中藥組、西藥組SYP、PGP9.5、SP陽性產(chǎn)物面積和平均吸光度值較DM模型組顯著增加(P0.05),但仍低于正常對(duì)照組(P0.05)。 5.各組大鼠空腸Western Blot法測(cè)定c-kit、SCF蛋白、CBS蛋白的表達(dá)結(jié)果中藥組與西藥組的c-kit蛋白及SCF蛋白的表達(dá)明顯高于DM模型組（P0.05），但低于正常對(duì)照組（P0.05）；中藥組與西藥組之間c-kit蛋白及SCF蛋白表達(dá)無明顯差異（P0.05）。DM模型組CBS蛋白的表達(dá)較正常對(duì)照組大鼠明顯上升（P0.05）,兩用藥組CBS蛋白表達(dá)較DM模型組降低，較正常對(duì)照組CBS蛋白表達(dá)增高（P0.05）。 結(jié)論 1.糖尿病大鼠存在胃排空延遲和腸推進(jìn)速率下降。 2.半夏瀉心湯促進(jìn)糖尿病大鼠c-kit及SCF表達(dá)，降低CBS的表達(dá)，提示對(duì)受損的胃竇ICC及氣體遞質(zhì)H2S有一定程度逆轉(zhuǎn)的作用，從而在一定程度上改善糖尿病大鼠的胃動(dòng)力障礙。 3.半夏瀉心湯促進(jìn)糖尿病大鼠空腸肌間神經(jīng)叢SYP、PGP9.5和SP的表達(dá)，提示對(duì)受損的糖尿病大鼠小腸肌間神經(jīng)叢有一定程度的修復(fù)作用。 4.糖尿病大鼠空腸CBS的表達(dá)異常，提示H2S的合成異�？赡苁悄c道動(dòng)力障礙的原因之一。
【學(xué)位授予單位】：安徽醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號(hào)】：R285.5;R259

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2524703